يصف هذا البروتوكول الزرع التقويمي للخلايا السرطانية المشتقة من المريض في جدار الأعور للفئران التي تعاني من نقص المناعة. يلخص هذا النموذج المرض النقيلي المتقدم لسرطان القولون والمستقيم. يلخص نموذج سرطان القولون والمستقيم التقويمي المقدم هنا السيناريو السريري لأورام الأمعاء المتقدمة والأمراض النقيلي في مرضى سرطان القولون والمستقيم التي لا يمكن دراستها باستخدام المواد العضوية المشتقة من المريض أو نماذج الطعم الأجنبي المشتقة من المريض.
من فأر القتل الرحيم ، استخرج الورم عن طريق إزالته بعناية من الجلد والأنسجة المحيطة غير الورمية باستخدام المقص والملقط. ضع الأورام المحصودة في برنامج تلفزيوني عند أربع درجات مئوية. باستخدام شفرة ، افصل الأورام في لوحة ثقافة 10 سم تحتوي على ملليمتر واحد من الوسط.
ضع العينة المتجانسة المنفصلة في أنبوب مخروطي حجمه 15 ملليلتر. ثم أضف الوسط إلى الحجم النهائي البالغ خمسة ملليلتر. ثم أضف وسط الهضم إلى الأنبوب.
ضع الأنبوب في وضع 45 درجة داخل حاضنة زراعة الخلايا لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. أثناء الحضانة لمدة ساعة واحدة ، امزج المحلول كل 15 دقيقة مع ماصة خمسة ملليلتر. بعد الحضانة ، أضف خمسة ملليلتر من المتوسط واخلطه جيدا.
ثم ، قم بفرز المحلول باستخدام مصفاة خلية 100 ميكرومتر باستخدام أنبوب معقم سعة 50 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي الخلايا التي تم فرزها على 500 جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. نضح المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في ثلاثة ملليلتر من محلول 1x RBC Lysis Buffer.
احتضان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم أضف ثلاثة ملليلتر من الوسط واخلط العينة. أجهزة الطرد المركزي في 500g لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة ونضح طاف طاف.
أعد تعليق الحبيبات بخمسة إلى 10 ملليلتر من الوسط ، واستخدم عداد الخلايا لحساب العدد الإجمالي للخلايا. بعد طرد الخلايا عند 500 جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، أعد التعليق في 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني. كرر الطرد المركزي واغسل مع 10 ملليلتر من PBS.
أعد تعليق الحبيبات للحصول على تركيز 20 في 10 إلى ست خلايا لكل مليلتر واخلطها جيدا للحصول على تعليق خلية متجانس. بعد ذلك ، قم بإعداد حقنة 29 جرام لحقن الأعور. قم بتحميل 50 ميكرولترا من تعليق الخلايا السرطانية في المحقنة ، وتأكد من عدم بقاء فقاعات هواء في المحقنة.
ضع المحقنة على الثلج. أولا ، تعقيم موقع الجراحة عن طريق الرش بمنظف مطهر ومسح. ثم ، إزالة الشعر من البطن باستخدام آلة إزالة شعر الماوس.
ضع الماوس في وضع ضعيف وقم بتطهير البطن عن طريق التنظيف بالكلورهيكسيدين أو البوفيدون اليود. قم بعمل شق طولي بطول سنتيمتر واحد على أسفل البطن باستخدام مقص الجراحة. افصل الجلد بعناية عن الجانبين لفضح الصفاق.
بعد ذلك ، قم بعمل شق من 0.5 إلى سنتيمتر واحد في غشاء الصفاق ، وهو ما يكفي لإضفاء الطابع الخارجي على الأعور. باستخدام شاش معقم مسبق القطع ، اعزل الأعور بعناية عن الماوس. بلل الأعور كان محلول ملحي طوال العملية.
شل حركة الأعور عن طريق إمساكها بعناية بالملقط ، ثم أدخل الإبرة بشكل سطحي في جدار الأعور. ببطء ، قم بحقن حجم 50 ميكرولتر بالكامل من تعليق الخلايا السرطانية. تستغرق هذه العملية حوالي 10 ثوان.
بعد الحقن ، قم بإزالة الإبرة ببطء من الأعور واضغط برفق على موقع الحقن باستخدام قضيب طرف القطن. نظف الأعور بمحلول ملحي لإزالة أي حطام وإعادة الأعور إلى بطن الحيوان. أغلق الصفاق باستخدام خيوط 5/0 ثم أغلق جلد البطن باستخدام خيوط 5/0.
لوحظت أورام تقويم العظام CRC-PDX في أمعاء الفئران المزروعة بخلايا سرطانية مشتقة من المريض. أظهر التحليل النسيجي بواسطة تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين على الأعور وجود خلايا ورمية. كشف التحليل النسيجي أيضا عن ورم خبيث في الرئة وورم خبيث في الكبد في الفئران المزروعة.
عولجت الفئران التي تحمل أورام تقويم العظام إما بالمركبة أو عقار الاختبار أو عقار العلاج الكيميائي إرينوتيكان. أظهر تحليل صور التصوير المقطعي المحوسب الدقيق أنه مقارنة بالسيارة ، تسبب عقار الاختبار في تقليل حجم الورم ، والذي تم تقليله بشكل أكبر مع علاج إرينوتيكان. سيساعد هذا النموذج في دراسة بيولوجيا ورم خبيث في أورام سرطان القولون والمستقيم.
