الكشف الكمي عن الروابط المتقاطعة بين الحمض النووي والبروتين وتعديلاتها اللاحقة للترجمة

حسنا ، يركز بحثي على إصلاح تلف الحمض النووي. على وجه الخصوص ، إصلاح تلف الحمض النووي الناجم عن مثبطات توبويزوميراز ، مثبطات PARP ، والألدهيدات. أحاول توضيح الآليات الجزيئية التي تقوم الخلايا من خلالها بإصلاح الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي التي تسببها هذه الأدوية.

تشمل التطورات الحديثة في إصلاح الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي تحديد مسارات إصلاح جديدة للروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي وآليات تعديل ما بعد الزرع التي تنظم مسارات الإصلاح هذه. في الجسم الحي ، يعد اختبار المركب للإنزيم والنهج السريع لمقايسة استعادة تقريب الحمض النووي أكثر الطرق استخداما لقياس الارتباطات المتقاطعة لبروتين الحمض النووي وبعض الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي ، مثل الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي topoisomerase ، يمكن اكتشافها عن طريق التألق المناعي باستخدام جسم مضاد معين. أحد أكبر التحديات هو دراسة دور التعديلات اللاحقة للترجمة في إصلاح الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي.

لقد كان من الصعب للغاية إثراء واكتشاف الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي المترافق بعد الترجمة بسبب وفرتها المنخفضة جدا. يوفر هذا البروتوكول تفاصيل الكشف عن كمية الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي deubiquitylated و SUMOylated و ADP-ribosylated ، مما يسمح للباحثين بدراسة الحركية وتشكيل هذه التعديلات في إصلاح الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي من مصادر مختلفة. لا تحتوي البروتوكولات الأخرى للكشف عن الوصلات المتقاطعة لبروتين الحمض النووي على خطوات تصف الكشف عن تعديلات ما بعد الترجمة.

بينما يوفر هذا البروتوكول تفاصيل مثل تركيزات الدواء والفترات الزمنية للحث على التعديلات وطرق فصل التعديلات واكتشافها بالإضافة إلى طرق تثبيت التعديلات. لذلك تم تحديد العديد من التعديلات بعد الزرع في إصلاح الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي. كيف ينسقون الإصلاح لا يزال غير معروف إلى حد كبير.

ونتيجة لذلك ، فإن التفاعل بين هذه التعديلات يستدعي مزيدا من التحقيق.