Quantitativer Nachweis von DNA-Protein-Vernetzungen und deren posttranslationale Modifikationen

Nun, meine Forschung konzentriert sich auf die Reparatur von DNA-Schäden. Insbesondere die Reparatur von DNA-Schäden, die durch Topoisomerase-Inhibitoren, PARP-Inhibitoren und Aldehyde induziert werden. Ich versuche, die molekularen Mechanismen zu veranschaulichen, mit denen die Zellen DNA-Protein-Querverbindungen reparieren, die durch diese Medikamente induziert werden.

Zu den jüngsten Fortschritten bei der Reparatur von DNA-Protein-Crosslinks gehören die Identifizierung neuer Reparaturwege für DNA-Protein-Crosslinks und die Modifikationsmechanismen nach der Transplantation, die diese Reparaturwege regulieren. Der In-vivo-Komplex des Enzym-Assays und der Rapid Approach to DNA Adduct Recovery Assay sind die am häufigsten verwendeten Methoden zur Messung von DNA-Protein-Crosslinks, und bestimmte DNA-Protein-Crosslinks, wie z. B. Topoisomerase-One-DNA-Protein-Crosslinks, können durch Immunfluoreszenz mit einem spezifischen Antikörper nachgewiesen werden. Eine der größten Herausforderungen ist die Untersuchung der Rolle posttranslationaler Modifikationen bei der Reparatur von DNA-Protein-Querverbindungen.

Aufgrund ihrer sehr geringen Häufigkeit war es bisher sehr schwierig, posttranslationale modifikatorkonjugierte DNA-Protein-Crosslinks anzureichern und nachzuweisen. Dieses Protokoll enthält Details zum Nachweis einer Quantifizierung von deubiquitylierten, SUMOylierten und ADP-ribosylierten DNA-Protein-Crosslinks, so dass Forscher die Kinetik und Bildung dieser Modifikationen bei der Reparatur von DNA-Protein-Crosslinks aus verschiedenen Quellen untersuchen können. Andere Protokolle zum Nachweis von DNA-Protein-Crosslinks enthalten keine Schritte, die den Nachweis ihrer posttranslationalen Modifikationen beschreiben.

Dieses Protokoll enthält Details wie Arzneimittelkonzentrationen und Zeitdauern zur Induktion der Modifikationen und Methoden zur Trennung und zum Nachweis von Modifikationen sowie Methoden zur Stabilisierung von Modifikationen. So wurden mehrere Modifikationen nach der Transplantation bei der Reparatur von DNA-Protein-Querverbindungen identifiziert. Wie sie die Reparatur koordinieren, ist weitgehend unbekannt.

Infolgedessen rechtfertigt das Zusammenspiel zwischen diesen Modifikationen weitere Untersuchungen.