Detecção quantitativa de ligações cruzadas DNA-proteína e suas modificações pós-traducionais

Bem, minha pesquisa se concentra no reparo de danos ao DNA. Em particular, o reparo de danos ao DNA induzidos por inibidores de topoisomerases, por inibidores de PARP e por aldeídos. Estou tentando ilustrar os mecanismos moleculares pelos quais as células reparam as ligações cruzadas de proteínas do DNA induzidas por essas drogas.

Avanços recentes no reparo de ligações cruzadas de proteínas de DNA incluem a identificação de novas vias de reparo para ligações cruzadas de proteínas de DNA e os mecanismos de modificação pós-transplante que regulam essas vias de reparo. O ensaio in vivo de complexo enzimático e o ensaio de abordagem rápida para recuperação de adutos de DNA são os métodos mais utilizados para medir ligações cruzadas de proteínas de DNA e certas ligações cruzadas de proteínas de DNA, como as ligações cruzadas de topoisomerase e proteína de DNA, podem ser detectadas por imunofluorescência usando um anticorpo específico. Um dos maiores desafios é o estudo do papel das modificações pós-traducionais no reparo de ligações cruzadas de proteínas do DNA.

Tem sido muito desafiador enriquecer e detectar ligações cruzadas de proteínas conjugadas de DNA modificador pós-traducional devido à sua abundância muito baixa. Este protocolo fornece detalhes da detecção de uma quantificação de ligações cruzadas de proteínas de DNA deubiquitiladas, SUMOiladas e ADP-ribosiladas, permitindo aos pesquisadores estudar a cinética e a formação dessas modificações no reparo de ligações cruzadas de proteínas de DNA de diferentes fontes. Outros protocolos para a detecção de ligações cruzadas de proteínas de DNA não contêm etapas que descrevam a detecção de suas modificações pós-traducionais.

Enquanto este protocolo fornece detalhes como concentrações de drogas e durações de tempo para induzir as modificações e métodos para separar e detectar modificações, bem como métodos para estabilizar modificações. Assim, várias modificações pós-transplante têm sido identificadas no reparo de ligações cruzadas de proteínas do DNA. Como eles coordenam o reparo permanece em grande parte desconhecido.

Assim, a interação entre essas modificações merece uma investigação mais aprofundada.