بدعم من DK065872 (ENP) ، ومؤسسة عائلة سميث جائزة التميز في البحوث الطبية الحيوية (ENP) ، F31 DA023760.

ملخص شهرين من العمر متوسط ​​عمر الفئران C57BL/6J أو ما يعادلها أو ثلاثة أشهر متوسط ​​عمر الفئران سبراغ داولي القديمة أو ما يعادلها يتم تخدير مع الكيتامين (60 ملغم / كغم من الملكية الفكرية بالنسبة للفئران ، و 100 ملغم / كغم من الملكية الفكرية بالنسبة للفئران) وزيلازين (10 ملغ / كغ ، والملكية الفكرية إما الأنواع). ويتم رصد التخدير باستخدام إصبع قرصة طيف سحب منعكس تظاهروا في <a href="/index/details.stp?ID=236">Walantus وآخرون</a> (إن الرب ، 6 ، 2007) و <a href="/index/details.stp?ID=404">Szot وآخرون</a> (إن الرب ، 9 ، 2007). ويمكن توفير الحراري من خلال لوحة التدفئة thermostatregulated (ALA آلات شركة) ورصدها من خلال ميزان حرارة المستقيم. غير حليق الرأس من الفراء وتنظيفها مع اليود قبل شق. بعد شق الجلد (2 سم الفئران لفترة طويلة ، طويلة ل1 سم الفئران) وإزالة جميع الأنسجة اللينة من سطح الجمجمة ، يتم تحديد موضع قنية دليل في ما يتعلق bregma. ومن حفر حفرة 6 ملم من خلال الجمجمة مع الحفار يعمل بواسطة بطارية مصممة لإجراء عملية جراحية القوارض (أدوات العلوم الجميلة ، وشركة). هو الحرص بحيث لا مثقاب اختراق من خلال الأغشية السحائية أو الأوعية الدموية. هو مزروع في الجمجمة مع الثنائي قياس 5 ملم 21 مهاوي غير القابل للصدأ دليل الصلب مما أدى إلى النواة المتكئة الخلفي ، المخطط الظهرية أو قشرة الفص الجبهي. يتم تأسيس إحداثيات التجسيمي حسب فرانكلين وPaxinos ، 1997 (مخ الفأر في الإحداثيات التجسيمي ، الأكاديمي الصحافة) أو Paxinos واتسون ، 2006 (الدماغ الجرذ في الإحداثيات التجسيمي ، الصحافة الأكاديمية) يتم تأمينها عن طريق زرع الأسنان الاسمنت. ويرد بلعة من قارعو الأجراس Lactated المالحة من 0.9 ٪ في نهاية عملية جراحية (SC 5mls في الفئران و1 مل SC في الفئران بعد أن يتم تسخين السوائل لدرجة حرارة الجسم العادية) لمنع الجفاف. يدار البوبرينورفين (0.1-0.5mg/kg SC) مرتين يوميا ، ثم بعد ذلك على أساس ما هو مطلوب ، إذا يبدو أن الحيوانات في الألم. العلاج بالمضادات الحيوية المحلي (باسيتراسين مرهم) ، والعلاج بالمضادات الحيوية الجهازية (البنسلين 100000 وحدة دولية / كغ IM كل 12 ساعة لمدة ال 48 ساعة الأولى بعد العملية) تدار إذا ما بعد الجراحة العدوى تحدث. بعد الجراحة ، ويعيش بمفرده مع المواد الغذائية والحيوانات المائية بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية المتاحة. يسمح مدة اسبوع على الاقل للتعافي قبل microdialysis والقتل الرحيم. بعد الشفاء من الجراحة ، ويتم نقل الحيوانات الى قفص microdialysis وتحقيقات microdialysis تندس ورسخ في مهاوي الدليل التي تم تثبيتها أثناء الجراحة. المسبار الإدراج لا تسبب الألم أو الانزعاج لأن التحقيق هو تجاوز الجلد والعضلات والأنسجة السحائي خلال رمح الدليل. لذلك ، يتم التحقيق الإدراج دون تخدير وتجنب أي آثار الناجمة عن التخدير في الكيمياء العصبية أو السلوك. تركنا تحقيقات استقرار لمدة 12 ساعة ثم نبدأ أخذ العينات كل 30 دقيقة لمدة 8-12 ساعة اعتمادا على التجربة. نحن نراقب السلوك الحركي للحيوان عن طريق الخلايا الضوئية أو التسجيل اليدوي للحركة من قبل المجرب. يتم حقن عينات Microdialysate في الأداء اللوني السائل عالي مع الكشف الكهروكيميائية (HPLC - EC) أداة للكشف الكيميائية العصبية وتحليلها. نحن نبحث عن الآثار على الكيمياء العصبية القاعدية ، والسلوك الحركي. في نهاية التجربة هو الموت الرحيم للحيوان عن طريق جرعة زائدة من الكيتامين النظامية (200 ملغم / كغم IP) وزيلازين (20 ملغم / كغم ، والملكية الفكرية). ثم perfused القلب مع المالحة 0.9 ٪ تليها بارافورمالدهيد 4 ٪. تتم إزالة العقول ، والمجمدة وقطع على طول المسالك microdialysis التحقيق للتحقق من دقة موضع التحقيق. إجراء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد صك التجسيمي وجميع المواد اللازمة. تأكد من تنظيف المنطقة والأدوات وتعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق الفراء مع الحلاقة الكهربائية. الانتقال من الأذنين للتو في الفترات الفاصلة بين العينين ، ونقل الشائكة في اتجاهات مختلفة على نحو فعال لتنظيف المنطقة من الفراء. تطبيق povidine / اليود الى منطقة حلق ولكن حماية العينين من ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الحيوان على جهاز التجسيمي بوضع قضبان الأذن في قناة الأذن وتشديد في مكانها. أول جبل الأذن شريط واحد في قناة الأذن ، ومن ثم الاحتفاظ بها في مكان والشرائح في شريط الأذن الأخرى. كنت تعرف انك في الموقع الصحيح عندما لم يعد يمكن أن يتم نقل رئيس الجانب إلى الجانب. تأمين الفم مع جبل الأمامي من التجسيمي وتأكد من أن الرأس هو المستوى مع مسطرة. وضع الحاكم في الوضع العمودي مع احترام إلى منصة التجسيمي الصك والتحقق من زاوية 90 درجة بين الحاكم والمتوسطة في فروة الرأس من الحيوان). تأكيد ذلك من خلال صك التجسيمي اذا كانت تتيح هذه القدرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق الأمامي / الخلفي على فروة الرأس مع مشرط معقم تمتد من لامدا فقط في الفترات الفاصلة بين أعين الحيوانات. استخدام المرقأة تعقيمها لقرصة قبالة الجلد والحفاظ على شق مفتوحة. باستخدام عدة مسحات القطن المعقم ، قبالة الجافة على سطح الجمجمة المكشوفة. <li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قنية دليل على جبل وأن تجد bregma على الجمجمة ، وموقف الحق قنية دليل على هذا الموقع. كتابة إحداثيات الأمامي / الخلفي والجانبي. من bregma ، العثور على الإحداثيات الصحيحة اللازمة لوضع التحقيق الخاص بمساعدة من الأطلس التجسيمي. موقف قنية دليل لإحداثيات الصحيح من خلال إضافة أو طرح من bregma. جلب قنية الخاص دليل أسفل حتى يتم لمس الجمجمة ، ثم سجل هذا التنسيق البطني. جعل علامة قلم رصاص مع عقيمة في هذا الموقع على الجمجمة ، وهذا هو المكان الذي سيتم الحفر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة دليل قنية وتعقيم بت الخاص الحفر. حفر حفرة في بعناية العلامة قلم حتى تحصل من خلال عرض الجمجمة. تحقق مع قنية دليل لمعرفة ما اذا كان واضحا في حفرة دون لمس الجانبين. تبقي الحفر والتدقيق حتى يمكن للقنية واضحة في مسار مستقيم. مرة واحدة يتم إجراء ثقب ، واستخدام إبرة معقمة لكمة بلطف السحايا من أجل السماح الإدراج دون عائق للقنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، وذلك باستخدام الحفر ناحية ، وجعل ستة ثقوب للمسامير الجمجمة : اثنان الأمامي لثقب قنية ، واثنين من الأفقي إلى ثقب قنية ، واثنان من الخلف على الجانبين. تعقيم six مسامير ووضعها على الجمجمة حتى يتم بإحكام ترسو عليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف قنية وإصلاحها مع الايثانول والمياه المالحة ، وجبل ، وانخفاض ببطء لتنسيق بطني المناسبة. تأكد من أن الجانبين لم يتم لمس وأنها تسير في رأسي تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المسمار مرساة إعلامي ومسامير وراء الجمجمة الخلفية والاحتفاظ بها في مكان مع ملاقط. مزيج دفعة رقيقة من الاسمنت السائل الأسنان وتغطية قنية وإصلاحها ، ومسامير ، والباقي من الجمجمة مع ملعقة العقيمة. جعل دفعة أخرى ، هذه المرة أكثر سمكا ، وتغطي كامل المنطقة وقنية والمسمار مرساة كافية لتأمين ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما يصبح أكثر سمكا الاسمنت وقبل أن يتصلب ، فصل الجلد من الكأس الاسمنت والاسمنت العفن الكأس مع ملعقة للتأكد من أن غطاء الاسمنت على نحو سلس في جميع أنحاء ولا تهيج في الجلد في وقت لاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للاسمنت الأسنان حتى يجف تماما قبل إزالة الحيوان من الجهاز. إزالة المرقأة. تطبيق باسيتراسين على طول الطريق حول سقف الاسمنت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة هذا الحيوان هو خارج الصك التجسيمي ، وضخ مع 0.25 مل من البنسلين IM (داخل العضلات) ، يليه SC 1 مل من المياه المالحة (تحت الجلد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع في قفص الحيوانات الخاصة بها ومراقبة ذلك حتى يصبح واعيا قبل اعادته الى غرفة لاسترداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد الحيوانات حتى يشفى من التخدير في يوم من الجراحة وبعد العملية اليومية ، وحتى نهاية التجربة ، لعلامات العدوى وتقييم الألم / استغاثة. وهذا يشمل عطلة نهاية الأسبوع والأعياد. حركة عفوية منخفضة ، والنطق عند الشدة المناولة والتقوس في الجلوس ، والإسهال ، وتورم والتفريغ في منطقة headmount ، ونقص التغذية / الشرب كلها علامات الألم والضيق. البوبرينورفين (0.1-0.5mg/kg SC) يدار مرتين يوميا ، ثم ، وعلى أساس ما هو مطلوب ، إذا كان الحيوان يبدو أن في الألم. العلاج بالمضادات الحيوية المحلي (باسيتراسين مرهم) ، والعلاج بالمضادات الحيوية الجهازية (البنسلين 100000 وحدة دولية / كغ IM كل 12 ساعة لمدة ال 48 ساعة الأولى بعد العملية) تدار إذا ما بعد الجراحة العدوى تحدث. إذا كان أي من هذه الأعراض التالية تستمر إدارة البوبرينورفين ، السائل الإضافي ، والعلاج بالمضادات الحيوية في غضون 12 ساعة من الجراحة ، والموت الرحيم للحيوان. </li></ol>

<ol>
	<li>Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdialysis+of+dopamine+interpreted+with+quantitative+model+incorporating+probe+implantation+trauma.">Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma.</a> J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).</li><li>Chen, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tissue+trauma+on+the+characteristics+of+microdialysis+zero-net-flux+method+sampling+neurotransmitters.">Effects of tissue trauma on the characteristics of microdialysis zero-net-flux method sampling neurotransmitters.</a> Journal of Theor. Biology. 238, 863-881 (2006).</li><li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N., Creese, I., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+eating+with+weight+loss+selectively+decreases+extracellular+dopamine+in+the+nucleus+accumbens+and+alters+dopamine+response+to+amphetamine,+morphine+and+food+intake.">Restricted eating with weight loss selectively decreases extracellular dopamine in the nucleus accumbens and alters dopamine response to amphetamine, morphine and food intake.</a> The Journal of Neuroscience. 15, 6640-6650 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

microdialysis في الجسم الحي هو الأداة المفضلة لقياس العصبية والأيضات متعددة في مواقع مختلفة من الدماغ حيوان حي. ومع ذلك ، فإنه يرصد فقط مستويات من خارج الخلية neurochemicals وأنها لا توفر الوقت لرصد قرار إيماس العصبي في الوقت الحقيقي. من خلال إصدار من تقنية تسمى &quot;صافي تدفق&quot; ، يمكن حساب تر...

مواد موصوفة في وثيقة بروتوكول

survivable stereotaxic surgery in rodents 

The ability to measure extracellular basal levels of neurotransmitters in the brain of awake animals allows for the determination of effects of different systemic challenges (pharmacological or physiological) to the CNS. For example, one can directly measure how the animal's midbrain dopamine projections respond to dopamine-releasing drugs like d-amphetamine or natural stimuli like food. In this video, we show you how to implant guide cannulas targeting specific sites in the rat brain, how to insert and implant a microdialysis probe and how to use high performance liquid chromatography coupled with electrochemical detection (HPLC-EC) to measure extracellular levels of oxidizable neurotransmitters and metabolites. Local precise introduction of drugs through the microdialysis probe allows for refined work on site specificity in a compound s mechanism of action. This technique has excellent anatomical and chemical resolution but only modest time resolution as microdialysis samples are usually processed every 20-30 minutes to ensure detectable neurotransmitter levels. Complementary ex vivo tools (i.e., slice and cell culture electrophysiology) can assist with monitoring real-time neurotransmission.

Watch this Scientific Journal Video about Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents at JoVE.com

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

رصد مستويات الناقلات العصبية في المخ في مناطق خارج الخلية متميزة من التحرك بحرية حيوانات يقدم رؤى حول الربط بين الافراج عن العصبي والسلوك. في الجسم الحي microdialysis مقرونا الكشف الكهروكيميائية التشريحية ممتازة ويوفر القرار الكيميائية ، ومعلومات عن كيفية تغيير العصبي القاعدية بواسطة التلاعب الدوائية أو الفسيولوجية.

التجسيمي جراحة للبقاء في القوارض

The ability to measure extracellular basal levels of neurotransmitters in the brain of awake animals allows for the determination of effects of different ...

survivable-stereotaxic-surgery-in-rodents

Research

JoVE Journal

Biology

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents 

68.3K Views.  Tufts University. رصد مستويات الناقلات العصبية في المخ في مناطق خارج الخلية متميزة من التحرك بحرية حيوانات يقدم رؤى حول الربط بين الافراج عن العصبي والسلوك. في الجسم الحي microdialysis مقرونا الكشف الكهروكيميائية التشريحية ممتازة ويوفر القرار الكيميائية ، ومعلومات عن كيفية تغيير الع?...

Video: Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

منتبذ زرع القلب في الفئران

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Small Bowel Transplantation In Mice

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive medications, infection prophylaxis, and suitable patient selection helped improve actuarial graft and patient survival rates for all types of intestine transplantation. Patients with irreversible intestinal failure and complications of parenteral nutrition should now be routinely considered for small intestine transplantation. However, Survival rates for small intestinal transplantation have been slow to improve compares increasingly favorably with renal, liver, heart and lung. The small bowel transplantation is still unsatisfactory compared with other organs. Further progress may depend on better understanding of immunology and physiology of the graft and can be greatly facilitated by animal models. A wider use of mouse small bowel transplantation model is needed in the study of immunology and physiology of the transplantation gut as well as efficient methods in diagnosing early rejection. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenging. We have developed a modified technique. When making anastomosis of portal vein and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s portal vein. The left wall of the inferior vena cava and donor s portal vein is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, after one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s portal vein are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis.  In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse small bowel transplantation model has been recognized as an important tool to study mechanismes of immune rejection and screen new immunosuppressive drugs. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenge. Now we introduce the modified technique.

زرع الأمعاء الصغيرة في الفئران

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive ...

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an extremely useful method, because it allows the study of the live intact brain. With appropriate preparations, this technique allows the observation of the same cortical area chronically, from minutes to months. In this video, we show a preparation for chronic in vivo imaging of the brain using two-photon microscopy. This technique was initially pioneered by Dr. Karel Svoboda, who is now a Howard Hughes Medical Institute Investigator at Janelia Farm. Preparations like the one shown here can be used for imaging of neocortical structure (e.g., dendritic and axonal dynamics),  to record neuronal activity using calcium-sensitive dyes, to image cortical blood flow dynamics, or for intrinsic optical imaging studies. Deep imaging of the neocortex is possible with optimal cranial window surgeries. Operating under the most sterile conditions possible to avoid infections, together with using extreme care to do not damage the dura mater during the surgery, will result in successful and long-lasting glass-covered cranial windows.


This video and protocol demonstrate how to implant a glass-covered cranial window in rodents. These preparations can be used for chronic in vivo two-photon imaging of the neocortex over time scales of months. It may also be used for other types of imaging, including optical intrinsic signal imaging.

إجراء جراحة حج القحف لتصوير الدماغ المزمن

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an ...

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In addition, the use of non-human primates has recently afforded the opportunity to naturally model complex psychiatric disorders such as alcohol abuse7. Here we describe a technique for blocking the brain in the coronal plane of the vervet monkey (Chlorocebus aethiops sabeus) in the intact skull in stereotaxic space. The method described here provides a standard plane of section between blocks and subjects and minimizes partial sections between blocks. Sectioning a block of tissue in the coronal plane also facilitates the delineation of an area of interest. This method provides manageable sized blocks since a single hemisphere of the vervet monkey yields more than 1200 sections when slicing at 50&mu;m. Furthermore by blocking the brain into 1cm blocks, it facilitates penetration of sucrose for cyroprotection and allows the block to be sliced on a standard cryostat.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of the normal processing of the brain. The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

تشريح الدماغ البشري غير الرئيسيات في الفضاء التجسيمي

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized. Primary cells are preferred in studies of cell cycle control, apoptosis, and DNA repair, as cancer cells carry mutations in genes involved in these processes. Primary cells cannot be cultured indefinitely due to the onset of replicative senescence or aneuploidization. Hence, new cultures need to be established regularly. The procedure for isolation of rodent embryonic fibroblasts is well established, but isolating adult fibroblast cultures often presents a challenge. Adult rodent fibroblasts isolated from mouse models of human disease may be a preferred control when comparing them to fibroblasts from human patients. Furthermore, adult fibroblasts are the only available material when working with wild rodents where pregnant females cannot be easily obtained. Here we provide a protocol for isolation and culture of adult fibroblasts from rodent skin and lungs. We used this procedure successfully to isolate fibroblasts from over twenty rodent species from laboratory mice and rats to wild rodents such as beaver, porcupine, and squirrel.

This article describes a protocol for isolation and maintenance of primary fibroblast cultures from skin and lung tissue of wild rodents.

إنشاء الابتدائية الثقافات الليفية الكبار من القوارض

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform surgery on a rodent. Students, post-doctoral scholars, and others interested in performing surgery on rodents as part of a research protocol may not have had formal surgical training as part of their required coursework. Surgery itself is a technical skill, and one that will improve with practice. The principles of aseptic technique, however, often remain unexplained or untaught. For most new surgeons, this vital information is presented in piecemeal fashion or learned on the job, neither of which is ideal. It may also make learning how to perform a particular surgery difficult, as the new surgeon is learning both a surgical technique and the principles of asepsis at the same time. This article summarizes and makes recommendations for basic surgical skills and techniques necessary for successful rodent surgery. This article is designed to supplement hands-on training by the user's institution.

Before attempting surgery, a new surgeon should have training in basic surgical techniques and concepts. This article will present basic surgical considerations with an emphasis on rodents.

مبادئ الجراحة القوارض لجراحة جديدة

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform ...

Intracavernosal Pressure Recording to Evaluate Erectile Function in Rodents

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. Rodents are employed by many studies to research the physiology/pathology of erectile function. Erectile function in rodents can be evaluated by measuring the intracavernosal pressure (ICP). In practice, ICP can be monitored following electrical stimulation of the cavernous nerves (CNs). The arterial pressure of the carotid artery (the mean arterial pressure) is used as the reference for ICP. Using ICP recording protocols, many key parameters of erectile function can be measured from the ICP response curve. The ICP measurement provides more information than the apomorphine-induced penile erection test, and is cheaper than telemetric monitoring of the corpus spongiosum penis, making this method the most popular one to evaluate erectile function. However, compared to the easily-performed APO-induced erectile function test, successful ICP recordings require attention to detail, practice, and adherence to the operation method. In this work, an introduction to ICP recording in rats is provided to complement the procedure efficiently.

Intracavernosal pressure recording (ICP) is an important method to evaluate the erectile function of experimental animals. Here, a detailed protocol is demonstrated for the recording procedure of ICP by catheterizing the crura penis and then electrically stimulating the cavernous nerves in rats.

تسجيل الضغط إينتراكافيرنوسال لتقييم وظيفة الانتصاب في القوارض

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling structure that forms rapidly post-amputation and is required for limb regeneration. However, methods to study its precise function at the molecular level over the last decades have been limited due to a paucity of precise functional techniques and genomic information available in salamander model systems. Excitingly, the recent plethora of sequencing technologies coupled with the release of various salamander genomes and the advent of functional genetic testing methods, including CRISPR, makes it possible to re-visit these foundational experiments at unprecedented molecular resolution. Here, I describe how to perform the classically developed full skin flap (FSF) surgery in adult axolotls in order to inhibit wound epidermis formation immediately following amputation. The wound epidermis normally forms via distal migration of epithelial cells in the skin proximal to the amputation plane to seal off the wound from the outside environment. The surgery entails immediately suturing full thickness skin (which includes both epidermal and dermal layers) over the amputation plane to hinder epithelial cell migration and contact with the underlying damaged mesenchymal tissues. Successful surgeries result in the inhibition of blastema formation and limb regeneration. By combining this surgery method with contemporary downstream molecular and functional analyses, researchers can begin to uncover the molecular underpinnings of wound epidermis function and biology during limb regeneration.

This article describes how to perform a surgical method to inhibit wound epidermis formation during axolotl limb regeneration by immediately suturing full thickness skin over the amputation plane. This method allows researchers to investigate the functional roles of the wound epidermis during the early stages of limb regeneration.

تثبيط تكوين بشرة الجرح عن طريق جراحة سديلة الجلد الكاملة أثناء تجديد الأطراف Axolotl

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...

Application of Passive Head Motion to Generate Defined Accelerations at the Heads of Rodents

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular mechanisms behind the beneficial effects of exercise are poorly understood. Many physical workouts, particularly those classified as aerobic exercises such as jogging and walking, produce impulsive forces at the time of foot contact with the ground. Therefore, it was speculated that mechanical impact might be implicated in how exercise contributes to organismal homeostasis. For testing this hypothesis on the brain, a custom-designed ''passive head motion'' (hereafter referred to as PHM) system was developed that can generate vertical accelerations with controlled and defined magnitudes and modes and reproduce mechanical stimulation that might be applied to the heads of rodents during treadmill running at moderate velocities, a typical intervention to test the effects of exercise in animals. By using this system, it was demonstrated that PHM recapitulates the serotonin (5-hydroxytryptamine, hereafter referred to as 5-HT) receptor subtype 2A (5-HT2A) signaling in the prefrontal cortex (PFC) neurons of mice. This work provides detailed protocols for applying PHM and measuring its resultant mechanical accelerations at rodents' heads.

The present protocol describes a custom-designed ''passive head motion'' system, which reproduces mechanical accelerations at rodents' heads generated during their treadmill running at moderate velocities. It allows dissecting mechanical factors/elements from the beneficial effects of physical exercise.

تطبيق حركة الرأس السلبية لتوليد تسارع محدد عند رؤوس القوارض

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular ...

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and disease. EIM is obtained by applying a low-intensity, directionally focused, electrical current to a muscle of interest across a range of frequencies (i.e., from 1 kHz to 10 MHz) and recording the resulting voltages. From these, several standard impedance components, including the reactance, resistance, and phase, are obtained. When performing ex vivo measurements on excised muscle, the inherent passive electrical properties of the tissue, namely the conductivity and relative permittivity, can also be calculated. EIM has been used extensively in animals and humans to diagnose and track muscle alterations in a variety of diseases, in relation to simple disuse atrophy, or as a measure of therapeutic intervention. Clinically, EIM offers the potential to track disease progression over time and to assess the impact of therapeutic interventions, thus offering the opportunity to shorten the clinical trial duration and reduce sample size requirements. Because it can be performed noninvasively or minimally invasively in living animal models as well as humans, EIM offers the potential to serve as a novel translational tool enabling both preclinical and clinical development. This article provides step-by-step instructions on how to perform in vivo and ex vivo EIM measurements in mice and rats, including approaches to adapt the techniques to specific conditions, such as for use in pups or obese animals.

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

This article details how to perform in vivo (using surface and needle electrode arrays) and ex vivo (using a dielectric cell) electrical impedance myography on the rodent gastrocnemius muscle. It will demonstrate the technique in both mice and rats and detail the modifications available, (i.e., obese animals, pups).

أداء في فيفو و السابقين فيفو المقاومة الكهربائية Myography في القوارض

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and ...