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Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells

Platelet aggregation occurs in response to vascular injury where the extracellular matrix below the endothelium has been exposed. The platelet adhesion ...

Fluxion Biosciences, Inc.

&#x8F7B;&#x94FE; &#xFF08;&#x6216;&#x94DD;&#xFF09; &#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x53D8;&#x6027;&#x75C5;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x75C5;&#x7406;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x7247;&#x6BB5;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3001; &#x5899;&#x4F53;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x6C89;&#x79EF;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5916;&#x91CD;&#x7EC4; amyloidogenic &#x8F7B;&#x94FE;&#x53EF;&#x53D8;&#x57DF;&#xFF0C;SMA&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6765;&#x76D1;&#x89C6;&#x7684;&#x3002;&#x5F62;&#x72B6;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x5408;&#x91D1;&#x5728;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x5F62;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5728; ph &#x503C; 5.0 &#x672C;&#x673A;&#x4E91;&#x6BCD;&#x3001; &#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x975E;&#x6676;&#x805A;&#x5408;&#x7A97;&#x4F53;&#x4E0A;&#x3002;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x529E;&#x6CD5; &#xFF1B; &#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x662F;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x52A0;&#x901F;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x589E;&#x957F;&#x660E;&#x663E;&#x66F4;&#x5FEB;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x548C;&#x6BD4;&#x5728;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x5F88;&#x591A;&#x8F83;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x53D1;&#x73B0;&#x758F;&#x6C34;&#x6216;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x6216;&#x5728; ph &#x503C; &gt; 7.0&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B0;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x589E;&#x957F;&#xFF1A; &#x53CC;&#x5411;&#x7EBF;&#x6027;&#x5927;&#x4F1A;&#x5BE1;&#x805A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x548C;&#x4ECE;&#x9884;&#x5236;&#x975E;&#x6676;&#x78C1;&#x82AF;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x50AC;&#x5316;&#x7387;&#x7684;&#x98A4;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x66F4;&#x591A;&#x751F;&#x7406;&#x6709;&#x5173;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5185;&#x5B58;&#x6B3E;&#x4E0E;&#x66F2;&#x9762;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x50AC;&#x5316;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Light chain (or AL) amyloidosis is characterized by the pathological deposition of insoluble fibrils of immunoglobulin light chain fragments in various tissues, walls of blood vessels, and basement membranes. In the present investigation, the in vitro assembly of a recombinant amyloidogenic light chain variable domain, SMA, on various surfaces was monitored using atomic force microscopy. SMA formed fibrils on native mica at pH 5.0, conditions under which predominantly amorphous aggregates form in solution. Fibril formation was accelerated significantly on surfaces compared with solution; for example, fibrils grew on surfaces at significantly faster rates and at much lower concentrations than in solution. No fibrils were observed on hydrophobic or positively charged surfaces or at pH >7.0. Two novel types of fibril growth were observed on the surface: bidirectional linear assembly of oligomeric units, and linear growth from preformed amorphous cores. In addition to catalyzing the rate of fibrillation, the mechanism of fibril formation on the surfaces was significantly different from in solution, but it may be more physiologically relevant because in vivo the deposits are associated with surfaces.

Surface-catalyzed amyloid fibril formation.

La cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re (ou AL) amylose est caract&#xE9;ris&#xE9; par le d&#xE9;p&#xF4;t pathologique de fibrilles insolubles de fragments d&#x26;#39;immunoglobuline cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re dans divers tissus, des parois des vaisseaux sanguins, et des membranes basales. Dans la pr&#xE9;sente enqu&#xEA;te, l&#x26;#39;assemblage in vitro d&#x26;#39;une cha&#xEE;ne recombinant la lumi&#xE8;re amylo&#xEF;dog&#xE9;nique domaine variable, SMA, sur diff&#xE9;rentes surfaces a &#xE9;t&#xE9; suivie en utilisant la microscopie &#xE0; force atomique. SMA form&#xE9; fibrilles sur le mica natif &#xE0; pH 5,0, les conditions dans lesquelles les agr&#xE9;gats amorphes forment principalement dans la solution. La formation de fibrilles a &#xE9;t&#xE9; acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9;e de mani&#xE8;re significative sur les surfaces par rapport &#xE0; une solution, par exemple, a augment&#xE9; de fibrilles sur des surfaces &#xE0; des taux consid&#xE9;rablement plus rapides et &#xE0; des concentrations beaucoup plus faibles que dans la solution. Pas de fibrilles ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s sur hydrophobe ou surfaces charg&#xE9;es positivement ou &#xE0; un pH&#x26;gt; 7,0. Deux nouveaux types de croissance des fibrilles ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s sur la surface: bidirectionnel assemblage lin&#xE9;aire d&#x26;#39;unit&#xE9;s oligom&#xE9;riques, et la croissance lin&#xE9;aire de noyaux pr&#xE9;form&#xE9;s amorphes. En plus de catalyser le taux de fibrillation auriculaire, le m&#xE9;canisme de formation de fibrilles sur les surfaces &#xE9;tait significativement diff&#xE9;rente de en solution, mais il peut &#xEA;tre plus pertinente, car physiologiquement in vivo les d&#xE9;p&#xF4;ts sont associ&#xE9;s &#xE0; des surfaces.

Surface catalys&#xE9;e par formation de fibrilles amylo&#xEF;des

Surface-katalysierten Amyloidfibrillenbildung.

Catena leggera (o AL) amiloidosi sono caratterizzata da patologica deposizione di fibrille insolubili di frammenti di immunoglobuline catena leggera in vari tessuti, pareti dei vasi sanguigni e membrane basali. Nella presente ricerca, l&#39;assemblaggio in vitro di un ricombinante amiloidogeniche catena leggera variabile dominio, SMA, su varie superfici &egrave; stata monitorata mediante microscopia a forza atomica. SMA forma fibrille su nativo mica a pH 5.0, condizioni sotto quale forma aggregati prevalentemente amorfa in soluzione. Formazione fibrillare &egrave; stato accelerato in modo significativo sulle superfici confrontate con la soluzione; per esempio, fibrille &egrave; cresciuta sulle superfici a tassi significativamente pi&ugrave; veloci e a concentrazioni molto inferiori rispetto a soluzione. No fibrille sono state osservate sulle superfici idrofobiche o caricate positivamente o a pH &amp;gt; 7.0. Due nuovi tipi di crescita fibrillare sono stati osservati sulla superficie: Assemblea lineare bidirezionale delle unit&agrave; oligomerici e una crescita lineare da nuclei amorfi preformate. Oltre a catalizzare il tasso di fibrillazione, il meccanismo di formazione fibrillare sulle superfici &egrave; stato significativamente diverso da in soluzione, ma pu&ograve; essere pi&ugrave; fisiologicamente rilevante perch&eacute; in vivo i depositi sono associati con le superfici.

Formazione di superficie-catalizzata fibrillare amiloide.

&#x8EFD;&#x9396;&#xFF08;&#x307E;&#x305F;&#x306F;AL&#xFF09;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306E;&#x58C1;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5806;&#x7A4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x8EFD;&#x9396;&#x53EF;&#x5909;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;SMA&#x3001;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SMA&#x306F;&#x3001;pH5.0&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x975E;&#x6676;&#x8CEA;&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306F;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AB;&#x4E0A;&#x3067;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x52A0;&#x901F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x901F;&#x3044;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6B63;&#x306B;&#x8377;&#x96FB;&#x3057;&#x305F;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;pH&#x26;gt; 7.0&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E88;&#x3081;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B9;&#x30B3;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x7DDA;&#x5F62;&#x6210;&#x9577;&#xFF1A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x6210;&#x9577;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306F;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x5806;&#x7A4D;&#x7269;&#x304C;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x89E6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;

&#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; (&#xB610;&#xB294; &#xC54C;) amyloidosis &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xC18C;, &#xD608;&#xAD00;, &#xBC0F; &#xC9C0;&#xD558;&#xC2E4; &#xB9C9; &#xBCBD;&#xC758; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC99D; &#xCC29;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; amyloidogenic &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xBCC0;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, SMA, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xB9BD; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SMA &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; pH 5.0&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC6B4; &#xBAA8;, &#xC8FC;&#xB85C; &#xBE44;&#xC815; &#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; &#xC544;&#xB798; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC18C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;. Fibril &#xD615;&#xC131; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC00;&#xC18D; &#xD588;&#xB2E4; &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC18C;&#xB294; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xBE60;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xC804; &#xD45C;&#xBA74; &#xB610;&#xB294; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xBB34; &#xC18C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &amp;gt; 7.0. Fibril &#xC131;&#xC7A5; &#xC18C;&#xC124; &#xB450;&#xAC00;&#xC9C0; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;: oligomeric &#xB2E8;&#xC704; &#xBC0F; &#xC120;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xD615;&#xC131;&#xD55C; &#xC544; &#xBAB0; &#xD37C;&#xC2A4; &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC591;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC120;&#xD615; &#xC870;&#xB9BD;. &#xB3D9; &#xC18D;&#xB3C4; catalyzing &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; fibril &#xD615;&#xC131; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xC804;&#xD600; &#xB2E4;&#xB978; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xBCF4; &#xC608;&#xAE08; &#xC11C;&#xD53C;&#xC2A4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC21C;&#xC218; &#xB354; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; fibril &#xD45C;&#xBA74; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD615;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La cadena ligera (o AL) amiloidosis se caracteriza por la deposici&#xF3;n patol&#xF3;gica de fibrillas insolubles de fragmentos de inmunoglobulina de cadena ligera en diversos tejidos, paredes de vasos sangu&#xED;neos, y las membranas basales. En la presente investigaci&#xF3;n, en el montaje de la in vitro de una prote&#xED;na recombinante de la cadena amiloidog&#xE9;nica luz variable de dominio, SMA, en varias superficies se controlar&#xE1; mediante microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica. SMA formado fibrillas sobre la mica nativo a pH 5,0, condiciones bajo las cuales los agregados predominantemente amorfos forman en soluci&#xF3;n. La formaci&#xF3;n de fibras se aceler&#xF3; significativamente en las superficies en comparaci&#xF3;n con la soluci&#xF3;n, por ejemplo, fibrillas creci&#xF3; en las superficies a tasas significativamente m&#xE1;s r&#xE1;pidas y en concentraciones mucho m&#xE1;s bajas que en soluci&#xF3;n. No se observaron en fibrillas hidr&#xF3;foba o superficies cargadas positivamente o con un pH&#x26;gt; 7,0. Dos nuevos tipos de crecimiento de las fibrillas se observaron en la superficie: montaje bidireccional lineal de unidades oligom&#xE9;ricas, y el crecimiento lineal de los n&#xFA;cleos preformados amorfos. Adem&#xE1;s de catalizar la tasa de fibrilaci&#xF3;n, el mecanismo de formaci&#xF3;n de fibras en las superficies fue significativamente diferente de en soluci&#xF3;n, pero puede ser m&#xE1;s fisiol&#xF3;gicamente relevantes porque en vivo, los dep&#xF3;sitos est&#xE1;n asociados con las superficies.

Superficie catalizada amiloide fibrillas Formaci&#xF3;n

&#x57FA;&#x4E8E;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5206;&#x6790;&#x671F;&#x95F4;&#x98A4;&#x52A8;&#x7684; &alpha;-synuclein&#x3001; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x3001; &#x548C; G &#x86CB;&#x767D; B1 &#x57DF;&#x5F62;&#x6210;&#x9488;&#x72B6;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#xFF0C;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x53EF;&#x53D8;&#x57DF;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x88AB;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x822C;&#x6A21;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x6240;&#x6709;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9488;&#x72B6;&#x7684;&#x76F4;&#x5F84;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x6700;&#x5C0F;&#x539F;&#xFF0C;&#x6709;&#x7EDF;&#x4E00;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x800C;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3001; protofibrils &#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x662F;&#x539F;&#x9519;&#x7EFC;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x6307;&#x793A;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x539F;&#x6DF7;&#x6742;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x5411;&#x7A97;&#x4F53; protofibrils &#x548C; protofibrils &#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x6DF7;&#x6742;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x5206;&#x5C42;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6A21;&#x578B;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E00;&#x822C;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Based on atomic force microscopy analysis of the morphology of fibrillar species formed during fibrillation of alpha-synuclein, insulin, and the B1 domain of protein G, a previously described model for the assembly of amyloid fibrils of immunoglobulin light-chain variable domains is proposed as a general model for the assembly of protein fibrils. For all of the proteins studied, we observed two or three fibrillar species that vary in diameter. The smallest, protofilaments, have a uniform height, whereas the larger species, protofibrils and fibrils, have morphologies that are indicative of multiple protofilaments intertwining. In all cases, protofilaments intertwine to form protofibrils, and protofibrils intertwine to form fibrils. We propose that the hierarchical assembly model describes a general mechanism of assembly for all amyloid fibrils.

A general model for amyloid fibril assembly based on morphological studies using atomic force microscopy.

Bas&#xE9; sur l&#x26;#39;analyse microscopie &#xE0; force atomique de la morphologie des esp&#xE8;ces fibrillaires form&#xE9;s au cours de la fibrillation de l&#x26;#39;alpha-synucl&#xE9;ine, l&#x26;#39;insuline, et le domaine de la prot&#xE9;ine G B1, un mod&#xE8;le d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment pour l&#x26;#39;assemblage de fibrilles amylo&#xEF;des de domaines d&#x26;#39;immunoglobuline variable de cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re est propos&#xE9;e comme un mod&#xE8;le g&#xE9;n&#xE9;ral pour l&#x26;#39;assemblage de fibrilles prot&#xE9;iques. Pour l&#x26;#39;ensemble des prot&#xE9;ines &#xE9;tudi&#xE9;es, nous avons observ&#xE9; deux ou trois esp&#xE8;ces fibrillaires qui varient de diam&#xE8;tre. Les plus petits, les protofilaments, ont une hauteur uniforme, tandis que les grandes esp&#xE8;ces, protofibrilles et fibrilles, ont des morphologies qui sont indicatifs de plusieurs protofilaments entrelac&#xE9;es. Dans tous les cas, protofilaments s&#x26;#39;entrelacent pour former protofibrilles, et protofibrilles s&#x26;#39;entrelacent pour former des fibrilles. Nous proposons que le mod&#xE8;le d&#x26;#39;assemblage hi&#xE9;rarchique d&#xE9;crit un m&#xE9;canisme g&#xE9;n&#xE9;ral de l&#x26;#39;assemblage de tous les fibrilles amylo&#xEF;des.

Un mod&#xE8;le g&#xE9;n&#xE9;ral pour les fibrilles amylo&#xEF;des Assembl&#xE9;e Bas&#xE9; sur des &#xE9;tudes morphologiques utilisant la microscopie &#xE0; force atomique

Ein allgemeines Modell f&#xFC;r die Amyloid-Fibrillen Montage auf morphologische Studien mit Rasterkraftmikroskopie basiert.

Basato su analisi di microscopia forza atomica della morfologia delle specie fibrillare formato durante la fibrillazione di alfa-sinucleina, insulina e il dominio di B1 della proteina G, un modello precedentemente descritto per il montaggio di fibrille amiloidi dei domini variabili luce-catena di immunoglobulina &egrave; proposto come un modello generale per l&#39;assemblaggio delle fibrille della proteina. Per tutte le proteine studiate, abbiamo osservato due o tre specie fibrillare che variano in diametro. Il pi&ugrave; piccolo, protofilamenti, hanno un&#39;altezza uniforme, mentre la pi&ugrave; grande specie, protofibrille e fibrille, hanno morfologie che sono indicative di pi&ugrave; protofilamenti intreccio. In tutti i casi, protofilamenti si intrecciano a forma protofibrille e protofibrille si intrecciano a fibrille di forma. Proponiamo che il modello gerarchico assembly descrive un meccanismo generale di montaggio per tutte le fibrille amiloidi.

Un modello generale per l&#39;assemblaggio di fibrillare amiloide sulla base di studi morfologici mediante microscopia a forza atomica.

&#x3B1;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;G&#x306E;B1&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x7A2E;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x53EF;&#x5909;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x524D;&#x8FF0;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x7528;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x5F84;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;2&#x307E;&#x305F;&#x306F;3&#x7DDA;&#x7DAD;&#x7A2E;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x7A2E;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x9AD8;&#x3055;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;protofilaments&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x3001;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3046;&#x8907;&#x6570;protofilaments&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3046;protofilaments&#x3068;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x304C;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3063;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x968E;&#x5C64;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;

&#xC54C;&#xD30C; synuclein, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; G b 1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9; &#xB3D9;&#xC548; fibrillar &#xC885;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xBCC0;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xC758; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACF5;&#xBD80;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 2 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 3 &#xAC1C;&#xC758; fibrillar &#xC885;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xC791;&#xC740;, protofilaments, &#xBC18;&#xBA74; &#xD070; &#xC885;, protofibrils &#xBC0F; &#xC18C;, &#xC5EC;&#xB7EC; protofilaments intertwining &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBB38;&#xBC95;&#xACFC; &#xC720;&#xB2C8;&#xD3FC;&#xB3C4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC591;&#xC2DD; protofibrils&#xC5D0; &#xAF2C;&#xC774;&#xB294; protofilaments &#xBC0F; protofibrils &#xC591;&#xC2DD; &#xC18C;&#xC5D0; &#xAF2C;&#xC774;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xACC4;&#xCE35;&#xC801; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; fibril &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xBAA8;&#xB378;.

Basado en el an&#xE1;lisis de microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica de la morfolog&#xED;a de las especies fibrilares formados durante la fibrilaci&#xF3;n de la alfa-sinucle&#xED;na, la insulina, y el dominio B1 de la prote&#xED;na G, un modelo anteriormente descrito para el conjunto de fibras amiloides de los dominios variables de la cadena de inmunoglobulina ligera se propone como un modelo general para el conjunto de las fibrillas de prote&#xED;na. Por todas las prote&#xED;nas estudiadas, se observ&#xF3; dos o tres especies fibrilares que var&#xED;an en di&#xE1;metro. El m&#xE1;s peque&#xF1;o, protofilamentos, tienen una altura uniforme, mientras que las especies m&#xE1;s grandes, protofibrillas y fibrillas, tienen morfolog&#xED;as que son indicativos de protofilamentos m&#xFA;ltiples entrelazados. En todos los casos, se entrelazan para formar protofilamentos protofibrillas, y protofibrillas se entrelazan para formar fibrillas. Proponemos que el modelo de ensamblaje jer&#xE1;rquico describe un mecanismo general de la asamblea de todos los fibrillas de amiloide.

Un modelo general de amiloide fibrilar Asamblea Basado en estudios morfol&#xF3;gicos mediante microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica

&#x5728;&#x8BD5;&#x56FE;&#x7406;&#x89E3;&#x4E2D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x53D8;&#x6027;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;amyloidogenic (SMA) &#x548C;&#x826F;&#x6027; (LEN) &#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x53EF;&#x53D8;&#x57DF; (VL) &#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x6784;&#x8C61;&#x7684; LEN &#x548C; SMA &#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x4ECE; 2 &#x548C; 8 &#x5728; ph &#x503C;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x548C;&#x4E09;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7684; pH &#x503C;&#xFF0C;LEN &#x662F;&#x6BD4; SMA &#x66F4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;LEN &#x5728; ph &#x503C; 2 &#x7684; CD &#x8C31;&#x76F8;&#x82E5;&#x7684; SMA &#x5728; ph &#x503C; 7.5&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; LEN &#x7684;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x5F62;&#x6001;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x5F62;&#x72B6;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x5408;&#x91D1;&#x5728;&#x751F;&#x7406; ph &#x503C;&#x3002;&#x5728;&#x4F4E; ph &#x503C;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x6784;&#x8C61;&#x4E3A; SMA &#x586B;&#x5145;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FC5;&#x901F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E0E; LEN&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x662F;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F; LEN &#x7EA4;&#x7EF4;&#x6405;&#x62CC;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x5E10;&#x6237;&#x3002;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230; N &#x7AEF; SMA kappa &#x56DB;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x5F15;&#x8D77;&#x6563;&#x4F19;&#x7684;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x548C;&#x6709;&#x4EBA;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684; SMA &#x539F;&#x4E00;&#x7AEF;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6BCF;&#x4E2A; protofilament &#x662F;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x7531;&#x5F62;&#x72B6;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x5408;&#x91D1;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x6BD4;&#x8F83; amyloidogenic &#x548C;&#x826F;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

In an attempt to understand the mechanism of amyloid fibril formation in light chain amyloidosis, the properties of amyloidogenic (SMA) and benign (LEN) immunoglobulin light chain variable domains (VL) were compared. The conformations of LEN and SMA were measured using secondary and tertiary structural probes over the pH range from 2 and 8. At all pH values, LEN was more stable than SMA. The CD spectra of LEN at pH 2 were comparable to those of SMA at pH 7.5, indicating that the low pH conformation of LEN closely resembles that of SMA at physiological pH. At low pH, a relatively unfolded intermediate conformation is populated for SMA and rapidly leads to amyloid fibrils. The lack of such an intermediate with LEN, is attributed to sequence differences and accounts for the lack of LEN fibrils in the absence of agitation. A kappa IV-specific monoclonal antibody that recognizes the N-terminal of SMA caused unraveling of the fibrils to the protofilaments and was observed to bind to one end of SMA protofilaments by atomic force microscopy. The antibody result indicates that each protofilament is asymmetric with different ends. A model for the formation of fibrils by SMA is proposed.

A model for amyloid fibril formation in immunoglobulin light chains based on comparison of amyloidogenic and benign proteins and specific antibody binding.

Dans une tentative de comprendre le m&#xE9;canisme de formation de fibrilles amylo&#xEF;des dans l&#x26;#39;amylose &#xE0; cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re, les propri&#xE9;t&#xE9;s de amylo&#xEF;dog&#xE9;nique (SMA) et b&#xE9;nignes (LEN) immunoglobulines domaines de cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re variable (VL) ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s. Les conformations de LEN et SMA ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide des sondes secondaires et tertiaires de structure dans la gamme de pH de 2 et 8. &#xC0; toutes les valeurs de pH, LEN &#xE9;tait plus stable que SMA. Les spectres CD de LEN &#xE0; pH 2 &#xE9;taient comparables &#xE0; ceux de la SMA &#xE0; un pH de 7,5, ce qui indique que la conformation &#xE0; faible pH de LEN ressemble &#xE9;troitement &#xE0; celui de SMA &#xE0; un pH physiologique. A un pH bas, une proportion relativement d&#xE9;pli&#xE9; conformation interm&#xE9;diaire est remplie pour les SMA et conduit rapidement &#xE0; des fibrilles amylo&#xEF;des. L&#x26;#39;absence d&#x26;#39;un tel interm&#xE9;diaire avec LEN, est attribu&#xE9;e &#xE0; des diff&#xE9;rences de s&#xE9;quence et les comptes de l&#x26;#39;absence de fibrilles LEN en l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;agitation. Un kappa IV anticorps monoclonal sp&#xE9;cifique qui reconna&#xEE;t l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de SMA fait effilochage des fibrilles aux protofilaments et a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e &#xE0; se lier &#xE0; une extr&#xE9;mit&#xE9; de protofilaments SMA par microscopie &#xE0; force atomique. Le r&#xE9;sultat d&#x26;#39;anticorps indique que chaque protofilaments est asym&#xE9;trique avec des extr&#xE9;mit&#xE9;s diff&#xE9;rentes. Un mod&#xE8;le pour la formation de fibrilles par SMA est propos&#xE9;.

Un mod&#xE8;le pour formation de fibrilles amylo&#xEF;des dans les cha&#xEE;nes l&#xE9;g&#xE8;res d&#x26;#39;immunoglobulines Bas&#xE9; sur la comparaison des prot&#xE9;ines et du B&#xE9;nin et amylo&#xEF;dog&#xE9;niques liaison d&#x26;#39;anticorps sp&#xE9;cifique

Ein Modell f&#xFC;r Amyloidfibrillenbildung in leichten Ketten der Immunglobuline auf dem Vergleich der amyloidogenen und gutartige Proteine &#x200B;&#x200B;und spezifische Antik&#xF6;rper-Bindung basiert.

Nel tentativo di capire il meccanismo di formazione fibrillare amiloide amiloidosi catena leggera, sono state confrontate le propriet&agrave; di amiloidogeniche (SMA) e benigni (LEN) immunoglobulina catena leggera variabile domini (VL). Le conformazioni di LEN e SMA sono state misurate utilizzando sonde strutturali secondarie e terziarie oltre l&#39;intervallo di pH da 2 e 8. A tutti i valori di pH, LEN era pi&ugrave; stabile di SMA. Gli spettri del CD di LEN a pH 2 erano paragonabili a quelli della SMA a pH 7.5, indicando che la conformazione di basso pH di LEN ricorda da vicino quello della SMA a pH fisiologico. A basso pH, una conformazione intermedia relativamente dispiegata &egrave; popolata per la SMA e porta rapidamente a fibrille amiloidi. La mancanza di tale intermedio con LEN, &egrave; attribuita a differenze di sequenza e conti per la mancanza di fibrille LEN in assenza di agitazione. Un kappa IV specifico anticorpo monoclonale che riconosce il N-terminale della SMA causato unraveling di fibrille ai protofilamenti e fu osservato da associare a un&#39;estremit&agrave; della SMA protofilamenti di microscopia a forza atomica. Il risultato di anticorpi indica che ogni protofilament &egrave; asimmetrica con fini diversi. Viene proposto un modello per la formazione delle fibrille di SMA.

Un modello per la formazione di amiloide fibrillare in catene leggere di immunoglobuline basato sul confronto tra amiloidogenica e proteine benigne e grippaggio dell&#39;anticorpo specifico.

&#x8EFD;&#x9396;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x307F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;SMA&#xFF09;&#x3068;&#x826F;&#x6027;&#xFF08;LEN&#xFF09;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x53EF;&#x5909;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;VL&#xFF09;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002; LEN&#x3068;SMA&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;2&#x301C;8&#x306E;pH&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x4E8C;&#x6B21;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E09;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;pH&#x5024;&#x3067;&#x3001;LEN&#x306F;&#x3001;SMA&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; pH&#x304C;2&#x3067;LEN&#x306E;CD&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;LEN&#x306E;&#x4F4E;pH&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;pH&#x3067;&#x306E;SMA&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;pH7.5&#x3067;SMA&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;pH&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C55;&#x958B;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;SMA&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x79FB;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; LEN&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x652A;&#x62CC;&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x3067;LEN&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3068;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SMA&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;IV-&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;protofilaments&#x306B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;SMA&#x306E;protofilaments&#x306E;&#x4E00;&#x7AEF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4E21;&#x7AEF;&#x304C;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SMA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x826F;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;

&#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; amyloidosis&#xC5D0; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; fibril &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, amyloidogenic (SMA)&#xACFC; &#xC591;&#xC131; (LEN) &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xBCC0;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (VL) &#xC18D;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB80C;&#xACFC; SMA conformations pH &#xBC94;&#xC704; 2 &#xBC0F; 8&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xCC28; &#xBC0F; 3 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; pH &#xAC12;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB80C; SMA &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. PH 2&#xC5D0;&#xC11C; &#xB80C;&#xC758; CD &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; SMA&#xC758; &#xADF8; &#xB80C;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC0B0;&#xB3C4; &#xB098; &#xB780; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC9C0; SMA&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; pH 7.5&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC911;&#xAC04; &#xB098; &#xB780; SMA&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xCC44;&#xC6CC;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xB97C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xB80C;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xAC04;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xC21C;&#xC11C; &#xCC28;&#xC774; &#xB3D9;&#xC694;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC18C; &#xB80C;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. SMA&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xCE74;&#xD30C; 4 &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB294; protofilaments &#xD558; &#xC18C;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC6D0;&#xC778;&#xACFC; SMA protofilaments&#xC758; &#xD55C;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xCCB4; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC01; protofilament &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xB2E4;&#xB978; &#xB05D;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SMA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC18C;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;.

Amyloidogenic &#xBC0F; &#xC591;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xACBD; &#xC1C4;&#xC5D0; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; fibril &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;.

En un intento de comprender el mecanismo de formaci&#xF3;n de fibras amiloides en la amiloidosis de cadenas ligeras, las propiedades de amiloidog&#xE9;nica (SMA) y benignos (LEN) ligeras de inmunoglobulina dominios variables de cadena (VL) se compararon. Las conformaciones de LEN y SMA se midieron utilizando sondas estructurales secundarias y terciarias en el rango de pH de 2 y 8. En todos los valores de pH, LEN era m&#xE1;s estable que la SMA. Los espectros de CD de LEN a pH 2 fueron comparables a las de SMA a pH 7,5, indicando que la conformaci&#xF3;n de pH bajo LEN asemeja mucho a la de SMA a pH fisiol&#xF3;gico. A pH bajo, relativamente se desarroll&#xF3; la conformaci&#xF3;n intermedia se llena para SMA y conduce r&#xE1;pidamente a fibrillas de amiloide. La falta de tal intermedio con LEN, se atribuye a diferencias en la secuencia y las cuentas de la falta de fibrillas LEN en ausencia de agitaci&#xF3;n. Un kappa IV-espec&#xED;fico anticuerpo monoclonal que reconoce el extremo N-terminal de SMA causado desintegraci&#xF3;n de las fibrillas a los protofilamentos y se observ&#xF3; que se unen a un extremo de protofilamentos SMA por microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica. El resultado de anticuerpos indica que cada protofilamento es asim&#xE9;trico con diferentes fines. Un modelo para la formaci&#xF3;n de fibrillas de SMA se propone.

Un modelo para la formaci&#xF3;n de fibras amiloides en las cadenas ligeras de inmunoglobulina Basado en la comparaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas y amiloidog&#xE9;nicas benigna y uni&#xF3;n de los anticuerpos espec&#xED;ficos

&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5426;&#x5219;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C; &#xFF08;&#x5982;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x836F;&#x7269;&#x3001; DNA&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x3001; &#x548C;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;) &#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x7269;&#x8D28;&#x4ECE;&#x800C;&#x5C06;&#x5F15;&#x5165;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x56FA;&#x5B9A;&#x548C;&#x672C;&#x5730; electroporate &#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6B64;&#x6613;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x82AF;&#x7247;&#x4E3B;&#x8981;&#x7535;&#x573A;&#xFF0C;&#x6D88;&#x9664;&#x9700;&#x8981;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7535;&#x6781;&#x6216;&#x73BB;&#x7483;&#x5438;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x5141;&#x8BB8;&#x5E76;&#x884C;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x7535;&#x538B; &#xFF08;&lt; 1 V) &#x7684; electroporating HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5E73;&#x5747;&#x8DE8;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x5904;&#x4E8E; 0.51 + /-0.13 &#x4E94;&#x3001; &#x819C;&#x6E17;&#x900F;&#x7531;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7279;&#x6027; &#39;&#x8DF3;&#39; &#x7535;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5F53;&#x524D;&#x5BF9;&#x5E94;&#x6EF4;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x62B5;&#x6297;&#x548C;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0B;&#x7684;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8981;&#x4E48;&#x9003;&#x8DD1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x67D3;&#x6599;&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x4E0A;&#x5348;&#x6216;&#x5165;&#x53E3;&#x7684;&#x53F0;&#x76FC;&#x84DD;&#x67D3;&#x8272;&#x3002;

&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x82AF;&#x7247;&#x3002;

Increasing the cell membrane's permeability can be accomplished via single cell electroporation. Polar substances that cannot otherwise permeate the plasma membrane (such as dyes, drugs, DNA, proteins, peptides, and amino acids) can thus be introduced into the cell. We developed a polymeric chip that can selectively immobilize and locally electroporate single cells. This easy-to-use chip focuses the electric field, eliminating the need to manipulate electrodes or glass pipettes. Moreover, this device allows parallel single cell electroporation. We demonstrate the effectiveness of our device design by electroporating HeLa cells using low applied voltages (< 1 V). We found the average transmembrane potential required for electroporation of HeLa cells to be 0.51 +/- 0.13 V. Membrane permeation is assessed electrically by measuring characteristic 'jumps' in current that correspond to drops in cell resistance, and microscopically by recording either the escape of cytoplasmic dye Calcein AM or the entrance of Trypan blue stain.

A single cell electroporation chip.

Augmenter la perm&#xE9;abilit&#xE9; de la membrane de cellule peut &#xEA;tre accomplie par &#xE9;lectroporation seule cellule. Substances polaires qui ne peuvent pas autrement perm&#xE9;at de la membrane plasmique (tels que des colorants, des m&#xE9;dicaments, de l&#x26;#39;ADN, des prot&#xE9;ines, des peptides et des acides amin&#xE9;s) peut ainsi &#xEA;tre introduit dans la cellule. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une puce polym&#xE8;re qui peut immobiliser s&#xE9;lectivement et localement &#xE9;lectroporer des cellules individuelles. Cet appareil facile &#xE0; utiliser la puce se concentre le champ &#xE9;lectrique, ce qui &#xE9;limine la n&#xE9;cessit&#xE9; de manipuler des &#xE9;lectrodes ou des pipettes en verre. En outre, ce dispositif permet l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation des cellules parall&#xE8;les unique. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de notre conception du dispositif par &#xE9;lectroporation des cellules HeLa en utilisant de faibles tensions appliqu&#xE9;es (&#x26;lt;1 V). Nous avons trouv&#xE9; le potentiel transmembranaire moyenne requise pour l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation des cellules HeLa &#xE0; 0,51 + / - 0,13 V. perm&#xE9;ation membranaire est &#xE9;valu&#xE9;e par la mesure de caract&#xE9;ristiques &#xE9;lectriques des sauts en courant des qui correspondent &#xE0; des baisses de r&#xE9;sistance de la cellule, et au microscope par l&#x26;#39;enregistrement soit la fuite de cytoplasmique colorant calc&#xE9;ine AM ou l&#x26;#39;entr&#xE9;e de Trypan bleuissement.

Une puce &#xE0; cellule unique d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation

Eine einzelne Zelle Elektroporation Chip.

Aumentare la permeabilit&agrave; della membrana delle cellule pu&ograve; essere realizzato tramite elettroporazione singola cella. Sostanze polari che altrimenti non possono permeare la membrana plasmatica (come coloranti, farmaci, DNA, proteine, peptidi e aminoacidi) possono essere cos&igrave; introdotto nella cellula. Abbiamo sviluppato un chip polimerico che pu&ograve; immobilizzare in modo selettivo e localmente le singole cellule electroporate. Questo chip easy-to-use si concentra il campo elettrico, eliminando la necessit&agrave; di manipolare gli elettrodi o pipette di vetro. Inoltre, questo dispositivo permette di elettroporazione parallelo singola cella. Noi di dimostrare l&#39;efficacia del nostro design dispositivo da cellule HeLa electroporating utilizzando basse tensioni applicate (&lt; 1 V). Abbiamo trovato che il potenziale transmembrana medio necessaria per elettroporazione delle cellule HeLa per essere 0,51 + 0,13 permeazione V. membrana &egrave; valutata elettricamente dal caratteristici &#39;salti&#39; di misura corrente che corrispondono a gocce in resistenza delle cellule, e microscopicamente registrando sia la fuoriuscita del colorante citoplasmatico calceina AM o l&#39;ingresso di Trypan blu macchia.

Un chip di elettroporazione di singola cellula.

&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3046;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x67D3;&#x6599;&#x3001;&#x85AC;&#x3001;DNA&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x304C;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x900F;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x6975;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F7F;&#x3044;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6975;&#x3084;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D4;&#x30DA;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x96FB;&#x754C;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30E9;&#x30EC;&#x30EB;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5370;&#x52A0;&#x96FB;&#x5727;&#xFF08;&#x26;lt;1 V&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;electroporating&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x88C5;&#x7F6E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;0.51&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5E73;&#x5747;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;+ /  -  0.13 V&#x306E;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x7279;&#x6027; &#x26;quot;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x26;quot;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5FAE;&#x8996;&#x7684;&#x306B;&#x8A18;&#x9332;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x8131;&#x51FA;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x8272;&#x7D20;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;AM&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x30FC;&#x306E;&#x5165;&#x308A;&#x53E3;&#x306F;&#x67D3;&#x8272;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;

&#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF9; &#xBB3C;&#xC9C8; (&#xC5FC;&#xB8CC;, &#xC758;&#xC57D;&#xD488;, DNA, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;) &#xB4F1; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCE68;&#xD22C; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB3C4;&#xC785; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBB34;&#xB825;&#xD654; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xCE69; &#xBC0F; &#xB85C;&#xCEEC; electroporate &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC26C;&#xC6B4; &#xCE69; &#xC804;&#xADF9; &#xC870;&#xC791; &#xB610;&#xB294; pipettes &#xC720;&#xB9AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC544;&#xB3C4; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC810;&#xC744; &#xB461;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB294; &#xBCD1;&#xB82C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; electroporating &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0AE;&#xC740; &#xB418;&#xB294; &#xC804;&#xC555; (&lt; 1 V)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC7A5;&#xCE58; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3C9;&#xADE0; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; 0.51 0.13 V. &#xB9C9; &#xD22C;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC131; &#39;&#xC810;&#xD504;&#39;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; + &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD604;&#xC7AC; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD488; &#xC140; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xC138; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xAE30;&#xB85D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC5FC;&#xC0C9; Calcein &#xC624;&#xC804; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xB610;&#xB294; Trypan &#xBE14;&#xB8E8; &#xC785;&#xAD6C; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; electroporation&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;.

&#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation &#xCE69;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El aumento de la permeabilidad de la membrana celular puede llevarse a cabo mediante electroporaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas individuales. Sustancias polares que de otro modo no puede penetrar en la membrana plasm&#xE1;tica (tales como colorantes, f&#xE1;rmacos, ADN, prote&#xED;nas, p&#xE9;ptidos y amino&#xE1;cidos) as&#xED; puede ser introducido en la c&#xE9;lula. Hemos desarrollado un chip de pol&#xED;mero que puede inmovilizar de forma selectiva y local electroporar c&#xE9;lulas individuales. Este f&#xE1;cil de usar viruta se centra el campo el&#xE9;ctrico, eliminando la necesidad de manipular electrodos o pipetas de vidrio. Adem&#xE1;s, este dispositivo permite la electroporaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas paralelo clave. Se demuestra la eficacia de nuestro dise&#xF1;o del dispositivo de electroporaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas HeLa con bajos voltajes aplicados (&#x26;lt;1 V). Hemos encontrado el potencial transmembrana media requerida para la electroporaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas HeLa para ser 0,51 + / - 0,13 permeaci&#xF3;n de membrana V. se eval&#xFA;a midiendo el&#xE9;ctricamente caracter&#xED;sticos &#x26;#39;saltos&#x26;#39; en la corriente que corresponden a gotas en resistencia de la c&#xE9;lula, y microsc&#xF3;picamente por grabaci&#xF3;n ya sea el escape de citoplasm&#xE1;tica tinte calce&#xED;na AM o la entrada de Trypan mancha azul.

Una c&#xE9;lula de chip &#xFA;nico de electroporaci&#xF3;n

&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x57FA;&#x4E8E;&#x672C;&#x5730;&#x6C22;&#x7535;&#x4EE3;&#x82AF;&#x7247;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F01;&#x4E1A;&#x7684;&#x6C22;&#x79BB;&#x5B50;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3002;&#x6EB6;&#x89E3;&#x51FA;&#x73B0;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0A;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6C22;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E0E;&#x8FC7;&#x5269;&#x3001; &#x521B;&#x5EFA;&#x4E2D;&#x6027; ph &#x503C;&#x51BB;&#x878D;&#x548C;&#x6D88;&#x9664;&#x6D17;&#x6B65;&#x9AA4;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x6C22;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5C06;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;&#xFF1A; &#x7EA2;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; HeLa (&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BF;&#x7624;&#x7EBF;) &#x53CA;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; (CHO) &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x3002;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C; impermeant &#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x9003;&#x8DD1;&#xFF0C;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x8BC1;&#x660E;&#x4ECE; HeLa &#x548C; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x9644;&#x8FD1;&#x9634;&#x6781;&#xFF0C;&#x6C22;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x7531;&#x6709;&#x9650;&#x5143;&#x6A21;&#x62DF;&#x9884;&#x6D4B;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9002;&#x5408;&#x4E0D;&#x540C;&#x8DDD;&#x79BB;&#x4ECE;&#x53D1;&#x7535;&#x9634;&#x6781;&#x7684;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7387;&#x3002;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x673A;&#x68B0;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x5668;&#x7ED3;&#x5408;&#x6C22;&#x6C27;&#x5316;&#x751F;&#x6210;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x8BBE;&#x5907;&#x662F;&#x634F;&#x9020;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x8BE5;&#x7B5B;&#x9009;&#x5668;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4EE5;&#x6355;&#x83B7;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4EC5;&#x5141;&#x8BB8;&#x88C2;&#x89E3;&#x901A;&#x8FC7;&#x3002;&#x6C22;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5728;&#x6EB6;&#x89E3;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x7684;&#x6D41;&#x7387;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5EFA;&#x6A21;&#x548C;&#x88C2;&#x89E3;&#x6548;&#x7387;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; 15 &#x81F3; 30 microl min(-1) &#x6C22;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x6D41;&#x7387;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;

&#x82AF;&#x7247;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7531;&#x672C;&#x5730;&#x6C22;&#x6C27;&#x5316;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

We present a novel method for on-chip cell lysis based on local hydroxide electro-generation. Hydroxide ions porate the cell membrane, leading to cell lysis. After lysis occurs, hydrogen ions, also generated on chip, react with excess hydroxide, creating a neutral pH lysate and eliminating the need for a wash step. Three different cell types are shown to be effectively lysed by this method: red blood cells, HeLa (human tumor line) and Chinese Hamster Ovary (CHO) cell lines. The release of cytoplasmic molecules from HeLa and CHO cells is demonstrated by monitoring the escape of a membrane impermeant dye from the cytoplasm. In the vicinity of the cathode, the hydroxide concentration is predicted by finite element simulations and shown to fit the lysis rates at different distances from the generating cathode. For flow-through experiments, a second device integrating a mechanical filter with hydroxide generation is fabricated and tested. The purpose of the filter is to trap whole cells and only allow lysate to pass through. The flow rate dependence of hydroxide concentration at the lysis filter is modeled and lysis efficiency is experimentally determined to be proportional to the hydroxide concentration for flow rates from 15 to 30 microl min(-1).

On-chip cell lysis by local hydroxide generation.

Nous pr&#xE9;sentons une nouvelle m&#xE9;thode pour la lyse cellulaire sur puce &#xE0; base d&#x26;#39;hydroxyde locale &#xE9;lectro-g&#xE9;n&#xE9;ration. Des ions hydroxyde porate la membrane cellulaire, ce qui conduit &#xE0; une lyse cellulaire. Apr&#xE8;s lyse se produit, des ions hydrog&#xE8;ne, &#xE9;galement g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es sur la puce, r&#xE9;agir avec l&#x26;#39;hydroxyde de exc&#xE8;s, la cr&#xE9;ation d&#x26;#39;un lysat de pH neutre et &#xE9;liminer la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;une &#xE9;tape de lavage. Trois diff&#xE9;rents types de cellules sont pr&#xE9;sent&#xE9;s pour &#xEA;tre efficacement lys&#xE9;es par cette m&#xE9;thode: les globules rouges, HeLa (lign&#xE9;e tumorale humaine) et Chinese Hamster lignes de cellules d&#x26;#39;ovaires (CHO). La lib&#xE9;ration de mol&#xE9;cules cytoplasmiques de cellules HeLa et les cellules CHO est d&#xE9;montr&#xE9;e par le suivi de la fuite d&#x26;#39;un colorant imperm&#xE9;ant membrane du cytoplasme. Au voisinage de la cathode, la concentration d&#x26;#39;hydroxyde de pr&#xE9;dit par la simulation d&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ments finis et repr&#xE9;sent&#xE9; en fonction des taux de lyse &#xE0; diff&#xE9;rentes distances de la cathode de g&#xE9;n&#xE9;ration. Pour l&#x26;#39;&#xE9;coulement par des exp&#xE9;riences-, un second dispositif int&#xE9;grant un filtre m&#xE9;canique avec l&#x26;#39;hydroxyde de g&#xE9;n&#xE9;ration est fabriqu&#xE9; et test&#xE9;. L&#x26;#39;application du filtre est de pi&#xE9;ger des cellules enti&#xE8;res et permettre seulement lysat de passer &#xE0; travers. La d&#xE9;pendance du d&#xE9;bit de la concentration d&#x26;#39;hydroxyde au niveau du filtre de lyse est mod&#xE9;lis&#xE9;e et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de lyse est d&#xE9;termin&#xE9;e exp&#xE9;rimentalement pour &#xEA;tre proportionnelle &#xE0; la concentration d&#x26;#39;hydroxyde de d&#xE9;bits de 15 &#xE0; 30 min microlitre (-1).

Lyse cellulaire sur puce par Generation Hydroxyde locale

On-Chip-Zell-Lyse durch lokale Hydroxid Generation.

Vi presentiamo un nuovo metodo per lisi cellulare on-chip basato su idrossido locale elettro-generazione. Gli ioni idrossido societaria la membrana delle cellule, che porta alla lisi delle cellule. Dopo Lisi si verifica, gli ioni di idrogeno, anche generati sul chip, reagiscono con l&#39;idrossido in eccesso, creando un pH neutro lisato ed eliminando la necessit&agrave; di una fase di lavaggio. Tre diversi tipi di cellule sono indicati per essere efficacemente lisati di questo metodo: globuli rossi, HeLa (linea di tumore umano) e linee di cellule di ovaio di criceto cinese (CHO). Il rilascio di molecole citoplasmatiche da cellule HeLa e CHO &egrave; dimostrato dal monitoraggio la fuga di un colorante impermeant membrana dal citoplasma. In prossimit&agrave; del catodo, la concentrazione di idrossido &egrave; previsto da simulazioni agli elementi finiti e mostrata per adattare i tassi di lisi a differenti distanze dal catodo generatrice. Per gli esperimenti di flow-through, un secondo dispositivo integra un filtro meccanico con generazione di idrossido &egrave; fabbricato e testato. Lo scopo del filtro &egrave; di intrappolare le cellule intere e consentire solo lisato di passare attraverso. La dipendenza di tasso di flusso di concentrazione idrossido presso il filtro lisi &egrave; modellata e l&#39;efficienza di lisi &egrave; determinato sperimentalmente per essere proporzionale alla concentrazione di idrossido per portate da 15 a 30 microl min(-1).

On-chip lisi delle cellule di generazione locale di idrossido.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5730;&#x5143;&#x306E;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D30;&#x80DE;&#x6EB6;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6EB6;&#x89E3;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;porate&#x3002;&#x6EB6;&#x89E3;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3082;&#x3001;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x4E0A;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x6C34;&#x7D20;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;pH&#x6EB6;&#x89E3;&#x6DB2;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x6D17;&#x6D44;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x3068;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;HeLa&#xFF08;&#x30D2;&#x30C8;&#x816B;&#x760D;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#xFF08;CHO&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;CHO&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x8131;&#x51FA;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C9;&#x8FD1;&#x508D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x6709;&#x9650;&#x8981;&#x7D20;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3067;&#x306E;&#x6EB6;&#x89E3;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3068;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6EB6;&#x89E3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x304C;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x306F;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6D41;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068;&#x6EB6;&#x89E3;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;15&#x304B;&#x3089;30 microl&#x5206;&#xFF08;-1&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x6D41;&#x91CF;&#x306E;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;Cell Lysis

&#xB85C;&#xCEEC; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xC804;&#xAE30; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xCE69;&#xC5D0; &#xC140; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xD130;&#xBE14; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xC774;&#xC628; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294;. Lysis &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xD6C4; &#xCE69;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC218;&#xC18C; &#xC774;&#xC628; &#xBC18;&#xC751; &#xCD08;&#xACFC; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654;, &#xC911;&#xB9BD; pH lysate &#xB9CC;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC138;&#xCC99; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; lysed &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218;&#xB97C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;, &#xD5EC;&#xB7EC; (&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xC120;)&#xACFC; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; (&#xC870;) &#xC140; &#xB77C;&#xC778;. &#xD5EC;&#xB7EC;&#xC640; &#xC870; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C9; impermeant &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD0C8;&#xCD9C;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; &#xC74C;&#xADF9;, &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC720;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xCE21; &#xC774;&#xBA70; &#xC0DD;&#xC131; &#xC74C;&#xADF9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB9DE;&#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xD750;&#xB984;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xC138;&#xB300;&#xC640; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD544;&#xD130;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xD544;&#xD130;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xACFC; lysate &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Lysis &#xD544;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xD750;&#xB984; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBAA8;&#xB378; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574; &#xD6A8;&#xC728; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xB420; 15-30 microl min(-1) &#xD750;&#xB984; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC628; &#xCE69; &#xC140; lysis &#xB85C;&#xCEEC; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xC138;&#xB300;&#xB85C;.

Se presenta un m&#xE9;todo novedoso para la lisis celular en el chip a base de hidr&#xF3;xido locales electro-generaci&#xF3;n. Los iones hidr&#xF3;xido porado la membrana celular, que conduce a la lisis celular. Despu&#xE9;s de la lisis se produce, los iones de hidr&#xF3;geno, tambi&#xE9;n generadas en el chip, reaccionan con el hidr&#xF3;xido de exceso, creando un lisado pH neutro y eliminando la necesidad de una etapa de lavado. Tres tipos de c&#xE9;lulas diferentes se muestran de manera eficaz lisadas por este m&#xE9;todo: gl&#xF3;bulos rojos, HeLa (l&#xED;nea de tumor humano) y ovario de h&#xE1;mster chino (CHO), l&#xED;neas celulares. La liberaci&#xF3;n de mol&#xE9;culas citoplasm&#xE1;ticas de las c&#xE9;lulas HeLa y CHO se demuestra mediante el control de la fuga de un colorante impermeant membrana desde el citoplasma. En las proximidades del c&#xE1;todo, la concentraci&#xF3;n de hidr&#xF3;xido se predice por las simulaciones de elementos finitos y se muestra para adaptarse a las tasas de lisis a diferentes distancias de la generaci&#xF3;n de c&#xE1;todo. Para el flujo a trav&#xE9;s de experimentos, un segundo dispositivo integrar un filtro mec&#xE1;nico con la generaci&#xF3;n de hidr&#xF3;xido se fabrica y probado. El prop&#xF3;sito del filtro es atrapar las c&#xE9;lulas enteras y s&#xF3;lo permiten pasar a trav&#xE9;s de lisado. La dependencia velocidad de flujo de concentraci&#xF3;n de hidr&#xF3;xido en el filtro de lisis se modela y la eficiencia de lisis se determin&#xF3; experimentalmente que es proporcional a la concentraci&#xF3;n de hidr&#xF3;xido para caudales de 15 a 30 microlitros min (-1).

El chip de lisis celular mediante la generaci&#xF3;n de hidr&#xF3;xido de local

&#x7EA2;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9886;&#x57DF;&#x548C;&#x5DF2;&#x6267;&#x884C;&#x8FC7;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x6837;&#x672C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x53D6;&#x78B1;&#x6027;&#x6EB6;&#x8840;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6EB6;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x5C45;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7531;&#x5E73;&#x5747;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x662F;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x819C;&#x5C45;&#x9A71;&#x52A8;&#x6EB6;&#x8840;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x72B6;&#x548C;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

&#x78B1;&#x6027;&#x6EB6;&#x8840;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x5F62;&#x6001;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

The morphometric analysis of red blood cells (RBCs) is an important area of study and has been performed previously for fixed samples. We present a novel method for the analysis of morphologic changes of live erythrocytes as a function of time. We use this method to extract information on alkaline hemolysis fragility. Many other toxins lyse cells by membrane poration, which has been studied by averaging over cell populations. However, no quantitative data are available for changes in the morphology of individual cells during membrane poration-driven hemolysis or for the relation between cell shape and fragility.

Alkaline hemolysis fragility is dependent on cell shape: results from a morphology tracker.

L&#x26;#39;analyse morphom&#xE9;trique des globules rouges (h&#xE9;maties) est un important domaine d&#x26;#39;&#xE9;tude et a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;e pr&#xE9;c&#xE9;demment pour les &#xE9;chantillons fixes. Nous pr&#xE9;sentons une nouvelle m&#xE9;thode pour l&#x26;#39;analyse des changements morphologiques des h&#xE9;maties en direct en fonction du temps. Nous utilisons cette m&#xE9;thode pour extraire des informations sur la fragilit&#xE9; h&#xE9;molyse alcaline. Beaucoup d&#x26;#39;autres toxines lyser les cellules par poration membrane, ce qui a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9; par la moyenne sur des populations cellulaires. Cependant, pas de donn&#xE9;es quantitatives sont disponibles pour des changements dans la morphologie des cellules individuelles pendant la membrane poration ax&#xE9;e sur l&#x26;#39;h&#xE9;molyse ou pour la relation entre la forme des cellules et la fragilit&#xE9;.

Fragilit&#xE9; H&#xE9;molyse alcaline est d&#xE9;pendante de la forme cellulaire: Les r&#xE9;sultats d&#x26;#39;une morphologie Tracker

Alkaline H&#xE4;molyse Zerbrechlichkeit ist abh&#xE4;ngig von der Zellform: Ergebnisse aus einer Morphologie-Tracker.

L&#39;analisi morfometrica delle cellule rosse del sangue (globuli rossi) &egrave; un&#39;importante area di studio ed &egrave; stata eseguita in precedenza per campioni fissati. Vi presentiamo un nuovo metodo per l&#39;analisi delle variazioni morfologiche degli eritrociti live in funzione del tempo. Usiamo questo metodo per estrarre informazioni sulla fragilit&agrave; di emolisi alcalina. Molte altre tossine lisare cellule da poration membrana, che &egrave; stato studiato da una media di popolazioni cellulari. Tuttavia, dati quantitativi non sono disponibili per i cambiamenti nella morfologia delle cellule individuali durante emolisi poration-driven membrana o per il rapporto tra la forma delle cellule e la fragilit&agrave;.

Fragilit&agrave; alcalina emolisi dipende dalla forma delle cellule: risultati da un tracker di morfologia.

&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#xFF08;RBC&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x8A66;&#x6599;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x6027;&#x6EB6;&#x8840;&#x306E;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x5E73;&#x5747;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x819C;&#x306E;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x6EB6;&#x8840;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3068;&#x3082;&#x308D;&#x3055;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x6027;&#x6EB6;&#x8840;&#x7E4A;&#x7D30;&#x3067;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;

&#xC801;&#xD608;&#xAD6C; (Rbc)&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC774;&#xBA70; &#xACE0;&#xC815; &#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xB41C;. &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC; &#xB860; &#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xD608; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558;&#xB824;&#xBA74;&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xB9CE;&#xC740; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xB9C9; poration &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lyse. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9C9; poration &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC6A9; &#xD608; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xC140; &#xBAA8;&#xC591; &#xBC0F; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xD608; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC131; &#xC140; &#xBAA8;&#xC591;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xCD94;&#xC801;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798;&#xD55C; &#xB2E4;.

El an&#xE1;lisis morfom&#xE9;trico de las c&#xE9;lulas rojas de la sangre (gl&#xF3;bulos rojos) es un &#xE1;rea importante de estudio y se ha realizado anteriormente para las muestras fijadas. Se presenta un nuevo m&#xE9;todo para el an&#xE1;lisis de los cambios morfol&#xF3;gicos de los eritrocitos en vivo como una funci&#xF3;n del tiempo. Nosotros usamos este m&#xE9;todo para extraer informaci&#xF3;n sobre la fragilidad hem&#xF3;lisis alcalina. Muchas otras toxinas lisar c&#xE9;lulas por poraci&#xF3;n membrana, que ha sido estudiado por un promedio de m&#xE1;s poblaciones de c&#xE9;lulas. Sin embargo, no hay datos cuantitativos est&#xE1;n disponibles para los cambios en la morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas individuales durante membrana poraci&#xF3;n impulsado por hem&#xF3;lisis o por la relaci&#xF3;n entre la forma celular y fragilidad.

Fragilidad hem&#xF3;lisis alcalina es dependiente en la forma celular: Los resultados de un Tracker Morfolog&#xED;a

&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8FD1;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4EE3;&#x4EF7;&#x662F;&#x89C6;&#x89C9;&#x83B7;&#x5F97;&#x6B63;&#x5728;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x63D0;&#x9AD8;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8DEF;&#x53E3;&#x4E3B;&#x5BA4;&#x548C;&#x4FA7;&#x5F55;&#x5236;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x88C5;&#x914D;&#x5F0F;&#x7684;&#x6A21;&#x5851;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7; (PDMS) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7B80;&#x5355;&#x66FF;&#x4EE3;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x57FA;&#x8D28;&#x6D88;&#x9664;&#x632F;&#x52A8;&#x9694;&#x79BB;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x7535;&#x6C60;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x96C6;&#x6210;&#x5141;&#x8BB8;&#x5F55;&#x5236;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#x662F;&#x9635;&#x5217; 20 microm &#x5916;&#xFF0C;&#x5171;&#x5206;&#x5EAD;&#x7684;&#x5377; &lt; 0.5 nl&#x3002;&#x5F55;&#x5236;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x51E0;&#x4F55;&#x8BC1;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x9AD8;&#x8D28;&#x91CF;&#x3001; &#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5C01;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x8BC1;&#x660E;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x4E0A;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7535;&#x538B;&#x654F;&#x611F;&#x94BE;&#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; Kv2.1 &#x7684;&#x5F55;&#x97F3;&#x6BD4;&#x8F83;&#x597D;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x5438;&#x7BA1;&#x5F55;&#x97F3;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F7F;&#x53EF;&#x80FD;&#x96C6;&#x6210;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x4E0E;&#x5BB9;&#x6613;&#x5236;&#x9020;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x82AF;&#x7247;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

The recent development of automated patch clamp technology has increased the throughput of electrophysiology but at the expense of visual access to the cells being studied. To improve visualization and the control of cell position, we have developed a simple alternative patch clamp technique based on microfluidic junctions between a main chamber and lateral recording capillaries, all fabricated by micromolding of polydimethylsiloxane (PDMS). PDMS substrates eliminate the need for vibration isolation and allow direct cell visualization and manipulation using standard microscopy. Microfluidic integration allows recording capillaries to be arrayed 20 microm apart, for a total chamber volume of <0.5 nl. The geometry of the recording capillaries permits high-quality, stable, whole-cell seals despite the hydrophobicity of the PDMS surface. Using this device, we are able to demonstrate reliable whole-cell recording of mammalian cells on an inexpensive microfluidic platform. Recordings of activation of the voltage-sensitive potassium channel Kv2.1 in mammalian cells compare well with traditional pipette recordings. The results make possible the integration of whole-cell electrophysiology with easily manufactured microfluidic lab-on-a-chip devices.

Mammalian electrophysiology on a microfluidic platform.

Le d&#xE9;veloppement r&#xE9;cent de la technologie patch clamp automatis&#xE9; a augment&#xE9; le d&#xE9;bit de l&#x26;#39;&#xE9;lectrophysiologie, mais au d&#xE9;triment de l&#x26;#39;acc&#xE8;s visuel &#xE0; des cellules &#xE9;tudi&#xE9;es. Pour am&#xE9;liorer la visualisation et le contr&#xF4;le de la position de la cellule, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une technique simple de remplacement de patch-clamp sur la base de jonctions entre microfluidiques une chambre principale et enregistrement lat&#xE9;ral capillaires, tous fabriqu&#xE9;s par micromoulage de polydim&#xE9;thylsiloxane (PDMS). PDMS substrats d&#x26;#39;&#xE9;liminer la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;isolation contre les vibrations et permettent la visualisation directe de la cellule et la manipulation en utilisant la microscopie standard. L&#x26;#39;int&#xE9;gration microfluidique permet d&#x26;#39;enregistrer capillaires &#xE0; &#xEA;tre dispos&#xE9;s 20 microm part, pour un volume total de la chambre &#x26;lt;0,5 nl. La g&#xE9;om&#xE9;trie des capillaires permet l&#x26;#39;enregistrement de haute qualit&#xE9;, stables et cellules enti&#xE8;res joints en d&#xE9;pit de la hydrophobicit&#xE9; de la surface de PDMS. L&#x26;#39;utilisation de ce dispositif, nous sommes en mesure de d&#xE9;montrer globalement fiables d&#x26;#39;enregistrement des cellules de cellules de mammif&#xE8;res sur une plate-forme peu co&#xFB;teuse microfluidique. Enregistrements d&#x26;#39;activation du canal potassique sensible au voltage Kv2.1 dans des cellules mammaliennes la comparaison avec les enregistrements de pipette traditionnels. Les r&#xE9;sultats rendent possible l&#x26;#39;int&#xE9;gration de la cellule enti&#xE8;re &#xE9;lectrophysiologie avec facilement fabriqu&#xE9;s microfluidiques lab-on-a-chip appareils.

&#xC9;lectrophysiologie mammif&#xE8;res sur une plate-forme microfluidique

S&#xE4;uger Elektrophysiologie einer mikrofluidischen Plattform.

Il recente sviluppo della tecnologia del morsetto patch automatizzata ha aumentato la velocit&agrave; effettiva di elettrofisiologia, ma a scapito di accesso visivo alle cellule in fase di studio. Per migliorare la visualizzazione e il controllo di posizione di cella, abbiamo sviluppato una tecnica di morsetto semplice patch alternativo basata su microfluidica giunzioni tra una camera principale e laterale registrazione capillari, tutti fabbricati da micromolding di polidimetilsilossano (PDMS). Substrati PDMS eliminano la necessit&agrave; di isolamento delle vibrazioni e permettono la visualizzazione diretta delle cellule e manipolazione mediante microscopia standard. Microfluidica integrazione permette la registrazione dei capillari per essere schierati microm 20 pezzi, per un volume totale camera di &lt; 0,5 nl. La geometria dei capillari registrazione permette di alta qualit&agrave;, stabile, cellule intere tenute nonostante l&#39;idrofobicit&agrave; della superficie PDMS. Utilizzando questo dispositivo, siamo in grado di dimostrare la registrazione affidabile di cellule intere di cellule di mammifero su una piattaforma microfluidica poco costoso. Registrazioni dell&#39;attivazione del canale del potassio voltaggio-sensibili Kv2.1 in cellule di mammifero confrontare bene con registrazioni di pipetta tradizionale. I risultati rendono possibile l&#39;integrazione delle cellule intere elettrofisiologia con dispositivi lab-on-a-chip microfluidici fabbricati facilmente.

Elettrofisiologia dei mammiferi su una piattaforma microfluidica.

&#x81EA;&#x52D5;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x8996;&#x899A;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x5BA4;&#x3068;&#x5916;&#x5074;&#x9332;&#x97F3;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x306E;micromolding&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PDMS&#x57FA;&#x677F;&#x306F;&#x632F;&#x52D5;&#x7D76;&#x7E01;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x7D71;&#x5408;&#x304C;&#x8A18;&#x9332;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x304C;&#x26;lt;0.5 NL&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x5BB9;&#x7A4D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;20&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3092;&#x914D;&#x5217;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A18;&#x9332;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x306F;&#x3001;PDMS&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E0A;&#x3067;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x8A18;&#x9332;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x5727;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;Kv2.1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30D4;&#x30DA;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x9332;&#x97F3;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x9020;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x3067;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30E9;&#x30DC;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3067;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB418; &#xACE0; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC804;&#xAE30; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xC140; &#xC704;&#xCE58; &#xC81C;&#xC5B4; &#xAC1C;&#xC120;, &#xBA54;&#xC778; &#xCC54;&#xBC84;&#xC640; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;, polydimethylsiloxane (PDMS)&#xC758; micromolding&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB450; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xAE30;&#xB85D; &#xCE21;&#xBA74; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBBF8;&#xC138; &#xC811;&#xD569;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PDMS &#xAE30;&#xD310; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC808;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC140; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xC870;&#xC791; &#xD45C;&#xC900; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xBBF8;&#xC138; &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xCD1D; &#xCC54;&#xBC84; &#xBCFC;&#xB968; 20 microm &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC9D3;&#xACE0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB420; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &lt; 0.5 nl. &#xB179;&#xC74C; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xD615;&#xC0C1;&#xC744; PDMS &#xD45C;&#xBA74; hydrophobicity &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xD488;&#xC9C8;, &#xC548;&#xC815;, &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xBB3C;&#xAC1C;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xB179;&#xC74C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Kv2.1 &#xC804;&#xC555;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCE7C;&#xB968; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xB179;&#xC74C; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xD3AB;&#xC740; &#xB179;&#xC74C; &#xC798; &#xBE44;&#xAD50;. &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xAE30; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC81C;&#xC870; &#xB41C; &#xBBF8;&#xC138; &#xB7A9; &#xC628; &#xCE69; &#xB514;&#xBC14;&#xC774;&#xC2A4;&#xC640;.

&#xBBF8;&#xC138; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC804;&#xAE30; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El reciente desarrollo de la tecnolog&#xED;a automatizada abrazadera parche ha aumentado el rendimiento de la electrofisiolog&#xED;a, pero a expensas de acceso visual a las c&#xE9;lulas en estudio. Para mejorar la visualizaci&#xF3;n y el control de la posici&#xF3;n de la c&#xE9;lula, hemos desarrollado una t&#xE9;cnica simple alternativa abrazadera parche sobre la base de las uniones de microfluidos entre una c&#xE1;mara principal y lateral de grabaci&#xF3;n capilares, todos fabricados por micromoldeado de polidimetilsiloxano (PDMS). PDMS sustratos eliminar la necesidad de aislamiento de vibraci&#xF3;n y permitir la visualizaci&#xF3;n directa de c&#xE9;lulas y la manipulaci&#xF3;n mediante microscop&#xED;a est&#xE1;ndar. La integraci&#xF3;n de microfluidos permite la grabaci&#xF3;n de los capilares que se vista de 20 micras de distancia, para un volumen total de la c&#xE1;mara de &#x26;lt;0,5 nl. La geometr&#xED;a de la grabaci&#xF3;n capilares permite alta calidad, estables, de c&#xE9;lulas enteras juntas a pesar de la hidrofobicidad de la superficie de PDMS. El uso de este dispositivo, que son capaces de demostrar fiable de c&#xE9;lulas enteras de grabaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero en una plataforma de microfluidos barato. Las grabaciones de la activaci&#xF3;n de los canales de potasio sensibles al voltaje Kv2.1 en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero se comparan favorablemente con las grabaciones de pipetas tradicionales. Los resultados hacen posible la integraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas enteras de electrofisiolog&#xED;a con facilidad de microfluidos fabricados lab-on-a-chip de los dispositivos.

Electrofisiolog&#xED;a de los mam&#xED;feros en una plataforma de microfluidos

Thioflavin T &#x662F;&#x5C55;&#x54C1;&#x540E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x6765;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x4E8B;&#x540E;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x82EF;&#x5E76;&#x567B;&#x5511;&#x67D3;&#x6599;&#x3002;&#x5728;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#xFF0C;thioflavin T &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5B58;&#x5728;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x80F6;&#x675F;&#x6D53;&#x5EA6;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EA4;&#x7EF4; (&#x5927;&#x7EA6; 10-20 microM) &#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8861;&#x91CF;&#x4E0D;&#x540C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; thioflavin T &#x548C;&#x4E34;&#x754C;&#x80F6;&#x675F;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6240;&#x5F97; 4.0+/-0.5 microM&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F; thioflavin &#x7684;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x53D1;&#x548C;&#x53D1;&#x5C04; T &#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x4E5F;&#x662F; thioflavin &#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x80F6;&#x675F;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x3002;3 Nm &#x76F4;&#x5F84; thioflavin T &#x675F;&#x76F4;&#x63A5;&#x88AB;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; thioflavin T &#x675F;&#x53D1;&#x73B0;&#x6CBF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8D85;&#x8FC7;&#x4E34;&#x754C;&#x80F6;&#x675F;&#x6D53;&#x5EA6; thioflavin T &#x663E;&#x793A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x957F;&#x5EA6;&#x6CBF;&#x80F6;&#x675F;&#x7684;&#x4EBA;&#x6570;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Thioflavin T &#x675F;&#x53D7;&#x963B;&#x5728;&#x4F4E; ph &#x503C; thioflavin T &#x81F3;&#x8FD8;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x589E;&#x5F3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x540E;&#x6240;&#x8BF4;&#x7684;&#x90A3;&#x6837;&#x6570;&#x500D;&#x540E;&#x964D;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x5230; 3 &#x4EE5;&#x4E0B;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x6B63;&#x7535;&#x8377; thioflavin T &#x5206;&#x5B50;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x5176;&#x9879;&#x7136;&#x540E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x80F6;&#x675F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7684; thioflavin T &#x675F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x53D1;&#x5C04;&#x7684;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3002;

Thioflavin T &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x3002;

Thioflavin T is a benzothiazole dye that exhibits enhanced fluorescence upon binding to amyloid fibrils and is commonly used to diagnose amyloid fibrils, both ex vivo and in vitro. In aqueous solutions, thioflavin T was found to exist as micelles at concentrations commonly used to monitor fibrils by fluorescence assay ( approximately 10-20 microM). Specific conductivity changes were measured at varying concentration of thioflavin T and the critical micellar concentration was calculated to be 4.0+/-0.5 microM. Interestingly, changes in the fluorescence excitation and emission of thioflavin T were also dependent on the micelle formation. The thioflavin T micelles of 3 nm diameter were directly visualized using atomic force microscopy, and bound thioflavin T micelles were observed along the fibril length for representative fibrils. Increasing concentration of thioflavin T above the critical micellar concentration shows increased numbers of micelles bound along the length of the amyloid fibrils. Thioflavin T micelles were disrupted at low pH as observed by atomic force microscopy and fluorescence enhancement upon binding of thioflavin T to amyloid fibrils also reduced by several-fold upon decreasing the pH to below 3. This suggests that positive charge on the thioflavin T molecule has a role in its micelle formation that then bind the amyloid fibrils. Our data suggests that the micelles of thioflavin T bind amyloid fibrils leading to enhancement of fluorescence emission.

Mechanism of thioflavin T binding to amyloid fibrils.

Thioflavine T est un colorant benzothiazole qui pr&#xE9;sente la fluorescence renforc&#xE9;e lors de la liaison &#xE0; des fibrilles amylo&#xEF;des et est couramment utilis&#xE9; pour diagnostiquer les fibrilles amylo&#xEF;des, &#xE0; la fois ex vivo et in vitro. Dans les solutions aqueuses, thioflavine T a &#xE9;t&#xE9; conclu &#xE0; l&#x26;#39;existence sous forme de micelles &#xE0; des concentrations couramment utilis&#xE9;s pour surveiller les fibrilles par un test de fluorescence (environ 10-20 microM). Changements de conductivit&#xE9; sp&#xE9;cifiques ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;s &#xE0; des concentrations variables de thioflavine T et la concentration micellaire critique a &#xE9;t&#xE9; calcul&#xE9;e &#xE0; 4,0 + / -0,5 microM. Fait int&#xE9;ressant, des changements dans l&#x26;#39;excitation de fluorescence et d&#x26;#39;&#xE9;mission de thioflavine T d&#xE9;pendent aussi de la formation de micelles. La thioflavine T micelles de 3 nm de diam&#xE8;tre ont &#xE9;t&#xE9; directement visualis&#xE9;es en utilisant la microscopie &#xE0; force atomique, et li&#xE9; thioflavine T micelles ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s le long de la longueur des fibrilles de fibrilles repr&#xE9;sentatives. Augmentation de la concentration de la thioflavine T-dessus de la concentration micellaire critique montre une augmentation du nombre de micelles li&#xE9;s le long de la longueur des fibrilles amylo&#xEF;des. Thioflavine T micelles ont &#xE9;t&#xE9; perturb&#xE9;s &#xE0; un pH faible observ&#xE9; par microscopie &#xE0; force atomique et &#xE0; l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de fluorescence lors de la liaison de la thioflavine T &#xE0; des fibrilles amylo&#xEF;des ont &#xE9;galement r&#xE9;duit par plusieurs fois de la r&#xE9;duction du pH en dessous de 3. Ceci sugg&#xE8;re que la charge positive sur la mol&#xE9;cule thioflavine T joue un r&#xF4;le dans sa formation de micelles qui alors se lier les fibrilles amylo&#xEF;des. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que les micelles de fibrilles amylo&#xEF;des T thioflavine lient conduisant &#xE0; l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de l&#x26;#39;&#xE9;mission de fluorescence.

M&#xE9;canisme de Thioflavine T Liaison &#xE0; des fibrilles amylo&#xEF;des

Mechanismus von Thioflavin T-Bindung an Amyloidfibrillen.

Thioflavin T &egrave; un colorante benzothiazole che esibisce una maggiore fluorescenza dell&#39;associazione di fibrille amiloidi e viene comunemente utilizzato per diagnosticare le fibrille amiloidi, ex vivo e in vitro. Nelle soluzioni acquose, thioflavin T &egrave; stato trovato ad per esistere come micelle a concentrazioni comunemente utilizzate per monitorare le fibrille di analisi di fluorescenza (circa 10-20 microM). Modifiche specifiche conducibilit&agrave; sono state misurate a diversa concentrazione di thioflavin T e 4.0+/-0.5 microM &egrave; stata calcolata la concentrazione micellare critica. &Egrave; interessante notare che, cambiamenti nell&#39;eccitazione della fluorescenza e l&#39;emissione di thioflavin T dipendevano anche la formazione di micelle. Le micelle thioflavin T del diametro di 3 nm sono stati visualizzati direttamente mediante microscopia a forza atomica, e associato thioflavin T micelle sono stati osservati lungo la lunghezza fibrillare fibrille rappresentativi. Aumentando la concentrazione di thioflavin T sopra la concentrazione micellare critica Mostra aumento del numero di micelle vincolati lungo la lunghezza di fibrille amiloidi. Micelle Thioflavin T sono stati perturbati a basso pH, come osservato da enhancement fluorescenza e microscopia forza atomica dell&#39;associazione di thioflavin T di fibrille amiloidi anche ridotto di several-fold sulla diminuzione del pH a inferiore a 3. Questo suggerisce che la carica positiva sulla molecola thioflavin T ha un ruolo nella sua formazione di micelle che si legano poi le fibrille amiloidi. I nostri dati suggeriscono che le micelle di thioflavin T legano fibrille amiloidi che conduce all&#39;aumento dell&#39;emissione di fluorescenza.

Meccanismo di associazione thioflavin T di fibrille amiloidi.

&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;ex vivo&#x3067;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6642;&#x306B;&#x5897;&#x5F37;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x30C1;&#x30A2;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#xFF08;&#x7D04;10&#x301C;20&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3067;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5C0E;&#x96FB;&#x7387;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x81E8;&#x754C;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;4.0 + / -0.5&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3068;&#x7B97;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x52B1;&#x8D77;&#x3068;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; 3 nm&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x81E8;&#x754C;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;3&#x306B;pH&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6570;&#x500D;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3078;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6642;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x5897;&#x5F37;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x4F4E;pH&#x3067;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0A;&#x306E;&#x6B63;&#x96FB;&#x8377;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;T&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;

Thioflavin T &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xACE0; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;, ex vivo&#xC640; &#xCCB4; &#xC678; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; benzothiazole &#xC5FC;&#xB8CC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC131; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; thioflavin T micelles &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; (&#xC57D; 10-20 microM) &#xD558; &#xC5EC; &#xC18C;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Thioflavin T&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xC911;&#xC694; micellar &#xB18D;&#xB3C4; 4.0+/-0.5 microM &#xACC4;&#xC0B0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xD615;&#xAD11; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC640; thioflavin T&#xC758; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xB610;&#xD55C; micelle &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. 3 Nm &#xC9C1;&#xACBD;&#xC758; thioflavin T micelles &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC9C1;&#xC811; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; thioflavin T micelles &#xB300;&#xD45C; &#xC18C; fibril &#xAE38;&#xC774; &#xB530;&#xB77C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; micellar &#xB18D;&#xB3C4; &#xC704;&#xC5D0; T thioflavin&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; micelles &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xB530;&#xB77C; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xB97C; T thioflavin&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC99D;&#xC9C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xCC30; Thioflavin T micelles &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xB2E8; &#xB41C; Ph&#xB97C; 3 &#xAC1C; &#xC774;&#xD558;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC; &#xBA87;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; thioflavin T &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC9C0;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; micelle &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; thioflavin T micelles &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

Thioflavin T &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tioflavina T es un medio de contraste que presenta fluorescencia benzotiazol mejorado al unirse a las fibrillas amiloides y se utiliza com&#xFA;nmente para diagnosticar fibrillas de amiloide, tanto ex vivo e in vitro. En soluciones acuosas, tioflavina T se encontr&#xF3; que existen como micelas a concentraciones com&#xFA;nmente utilizados para controlar fibrillas mediante el ensayo de fluorescencia (aproximadamente 10-20 microM). Los cambios espec&#xED;ficos de conductividad se midieron en una concentraci&#xF3;n variable de tioflavina T y la concentraci&#xF3;n micelar cr&#xED;tica se calcul&#xF3; en 4,0 + / -0,5 microM. Interesantemente, los cambios en la excitaci&#xF3;n de fluorescencia y la emisi&#xF3;n de tioflavina T fueron tambi&#xE9;n depende de la formaci&#xF3;n de micelas. El tioflavina T micelas de 3 nm de di&#xE1;metro se visualizan directamente mediante microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica, y la envolvente tioflavina T micelas se observaron a lo largo de la longitud de las fibrillas de las fibrillas de representaci&#xF3;n. El aumento de la concentraci&#xF3;n de tioflavina T por encima de la concentraci&#xF3;n micelar cr&#xED;tica muestra un mayor n&#xFA;mero de micelas unidas a lo largo de la longitud de las fibras amiloides. Tioflavina T micelas se rompieron a pH bajo como se observa por microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica y la mejora de fluorescencia tras la uni&#xF3;n de tioflavina T para fibrillas amiloides tambi&#xE9;n reducidas por varias veces al disminuir el pH por debajo de 3. Esto sugiere que la carga positiva en la mol&#xE9;cula de tioflavina T tiene un papel en su formaci&#xF3;n de micelas, que luego se unen las fibrillas de amiloide. Nuestros datos sugieren que las micelas de tioflavina fibrillas amiloides T se unen dando lugar a la mejora de emisi&#xF3;n de fluorescencia.

Mecanismo de Tioflavina T La uni&#xF3;n a las fibrillas de amiloide

&#x5FEB;&#x901F;&#x505A;&#x6210;&#x80DE;&#x5185;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;DNA &#x6216; RNA&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x6C38;&#x4E45;&#x635F;&#x574F;&#x7EC6;&#x80DE; &mdash; &mdash; &#x5355;&#x5143;&#x683C; &mdash; &mdash; &#x5230;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3001; &#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x666E;&#x904D;&#x96BE;&#x9898;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5E94;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x754C;&#x9762;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F34;&#x4FA3;&#x5230;&#x4E00;&#x6B21;&#x6027; 96 &#x4E95;&#x683C;&#x5F0F;&#x5316;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x53F0;&#x5F0F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x542F;&#x7528;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x64CD;&#x7EB5;&#x3001; &#x7A7F;&#x5B54;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x76D1;&#x63A7;&#x7684;&#x60AC;&#x6D6E;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x8868;&#x660E;&#x5B9E;&#x65F6;&#x53CD;&#x9988;&#x63A7;&#x5236;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4F1A;&#x81EA;&#x52A8;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5E76;&#x968F;&#x540E;&#x91CA;&#x653E;&#x7535;&#x573A;&#xFF0C;&#x6392;&#x9664;&#x7EE7;&#x7EED;&#x7684;&#x5916;&#x5730;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5141;&#x8BB8;&#x819C;&#x76D6;&#x5370;&#x7AE0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4; (n = 15&#xFF09; &#x7684;&#x60AC;&#x67B6;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x5E94;&#x7528;&#x7535;&#x6C14;&#x9886;&#x57DF; &#xFF08;&lt; 1 V) &#x548C;&#x5426;&#x5219;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x900F;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269; &#xFF08;&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x548C;&#x6A59;&#x7EFF;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#xFF09; &#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x80DE;&#x5185;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x7535;&#x6C14;&#x53CA;&#x5149;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C31;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E0E;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x5178;&#x578B;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5236;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x88C5;&#x8F7D;&#x5012;&#x7ACB;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x65E0;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0E;&#x539F;&#x578B;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x82AF;&#x7247;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x548C;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x5BF9;&#x7167;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7684;&#x5E73;&#x884C;&#x538B;&#x529B;&#x548C;&#x7535;&#x6C14;&#x5E94;&#x7528;&#x5230;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x3002;

&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x9635;&#x5217;&#x4E0E;&#x5B9E;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x548C;&#x53CD;&#x9988;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

Rapid well-controlled intracellular delivery of drug compounds, RNA, or DNA into a cell--without permanent damage to the cell--is a pervasive challenge in basic cell biology research, drug discovery, and gene delivery. To address this challenge, we have developed a bench-top system comprised of a control interface, that mates to disposable 96-well-formatted microfluidic devices, enabling the individual manipulation, electroporation and real-time monitoring of each cell in suspension. This is the first demonstrated real-time feedback-controlled electroporation of an array of single-cells. Our computer program automatically detects electroporation events and subsequently releases the electric field, precluding continued field-induced damage of the cell, to allow for membrane resealing. Using this novel set-up, we demonstrate the reliable electroporation of an array (n = 15) of individual cells in suspension, using low applied electric fields (<1 V) and the rapid and localized intracellular delivery of otherwise impermeable compounds (Calcein and Orange Green Dextran). Such multiplexed electrical and optical measurements as a function of time are not attainable with typical electroporation setups. This system, which mounts on an inverted microscope, obviates many issues typically associated with prototypical microfluidic chip setups and, more importantly, offers well-controlled and reproducible parallel pressure and electrical application to individual cells for repeatability.

Single-cell electroporation arrays with real-time monitoring and feedback control.

Rapid bien contr&#xF4;l&#xE9;e d&#xE9;livrance intracellulaire de m&#xE9;dicaments compos&#xE9;s, d&#x26;#39;ARN ou d&#x26;#39;ADN dans une cellule - sans dommage permanent &#xE0; la cellule - est un d&#xE9;fi omnipr&#xE9;sent dans la recherche en biologie cellulaire de base, la d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments, et de g&#xE8;nes. Pour relever ce d&#xE9;fi, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un syst&#xE8;me de paillasse compos&#xE9; d&#x26;#39;une interface de contr&#xF4;le, qui s&#x26;#39;accouple &#xE0; jetables de 96 puits au format dispositifs microfluidiques, permettant la manipulation individuelle, l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation et surveillance en temps r&#xE9;el de chaque cellule en suspension. C&#x26;#39;est la premi&#xE8;re fois d&#xE9;montr&#xE9; r&#xE9;troaction en temps r&#xE9;el contr&#xF4;l&#xE9; par &#xE9;lectroporation d&#x26;#39;un tableau de simples cellules. Notre programme d&#x26;#39;ordinateur d&#xE9;tecte automatiquement les &#xE9;v&#xE9;nements d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation et lib&#xE8;re par la suite le champ &#xE9;lectrique, ce qui emp&#xEA;che la poursuite de champ induite par les dommages de la cellule, afin de permettre rescellement membrane. L&#x26;#39;utilisation de ce roman mis en place, nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation fiable d&#x26;#39;un tableau (n = 15) des cellules individuelles en suspension, en utilisant de faibles champs &#xE9;lectriques appliqu&#xE9;s (&#x26;lt;1 V) et la livraison rapide et localis&#xE9;e intracellulaire de compos&#xE9;s autrement imperm&#xE9;ables (calc&#xE9;ine et Orange Vert Dextran). Ces multiplex&#xE9;s mesures &#xE9;lectriques et optiques en fonction du temps ne sont pas r&#xE9;alisables avec des configurations typiques d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation. Ce syst&#xE8;me, qui se monte sur un microscope invers&#xE9;, &#xE9;vite de nombreux probl&#xE8;mes typiquement associ&#xE9;s &#xE0; des configurations prototypiques puce microfluidique et, plus important encore, offre une pression parall&#xE8;le bien contr&#xF4;l&#xE9;e et reproductible et l&#x26;#39;application &#xE9;lectrique des cellules individuelles pour la r&#xE9;p&#xE9;tabilit&#xE9;.

Les tableaux d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation cellule unique avec Surveillance en temps r&#xE9;el et de contr&#xF4;le des Commentaires

Kontrollierte intrazellul&auml;re Ersatzteillieferung Droge Verbindungen, RNA oder DNA in eine Zelle--ohne bleibende Sch&auml;den an der Zelle--ist eine allgegenw&auml;rtige Herausforderung in grundlegende Zelle Biologie Forschung, Arzneimittelforschung und gen-Lieferung. Um dieser Herausforderung zu begegnen, haben wir ein Pr&uuml;ftisch--System, bestehend aus einer Steuerschnittstelle, passend zu Einweg 96-Well-Format Microfluidic Vorrichtungen, entwickelt, erm&ouml;glicht die individuelle Bearbeitung, Elektroporation und Echtzeit-&Uuml;berwachung der einzelnen Zellen in Suspension. Dies ist die erste nachweisliche Echtzeit R&uuml;ckmeldung gesteuert Electroporation eines Arrays von Einzel-Zellen. Unser Computerprogramm erkennt automatisch Electroporation Ereignisse und anschlie&szlig;end frei das elektrische Feld, entgegensteht, weitere Feld-induzierten Sch&auml;den der Zelle Membrane Neuversiegeln erm&ouml;glichen. Von dieser neuartigen Aufbau, zeigen wir die zuverl&auml;ssige Electroporation eines Arrays (n = 15) einzelner Zellen in Suspension, mit geringer elektrischer Felder angewendet (&lt; 1 V) und die schnelle und lokalisierte intrazellul&auml;re Zustellung ansonsten undurchl&auml;ssige Verbindungen (Calcein und Orange-Gr&uuml;n-Dextran). Solche Multiplex elektrischen und optischen Messungen als Funktion der Zeit sind nicht erreichbar, mit typischen Elektroporation-Setups. Dieses System, das auf einem inversen Mikroskop angemeldet wird, Methode viele Fragen, die in der Regel verbunden mit prototypischen Microfluidic Chip-Setups und, noch wichtiger ist, bietet gut kontrollierten und reproduzierbare parallel Druck und elektrische Anwendung auf einzelne Zellen f&uuml;r die Wiederholbarkeit.

Einzeller-Elektroporation-Arrays mit Echtzeit&uuml;berwachung und Regelungstechnik.

Rapida consegna intracellulare ben controllato di droga composti, RNA o DNA in una cellula - senza danni permanenti alla cella - &egrave; una sfida pervasiva nella ricerca di biologia di base delle cellule, drug discovery e consegna del gene. Per affrontare questa sfida, abbiamo sviluppato un sistema di banco composto da un&#39;interfaccia di controllo, che gli accoppiamenti a dispositivi microfluidici USA e getta formato 96-well, che permette la manipolazione individuale, elettroporazione e monitoraggio in tempo reale di ogni cella in sospensione. Questo &egrave; il primo elettroporazione dimostrata controllato feedback in tempo reale di una matrice di celle singole. Il nostro programma per computer rileva automaticamente gli eventi di elettroporazione e successivamente rilascia il campo elettrico, precludendo continuato danno indotta dal campo della cella, per consentire la chiusura della membrana. Utilizzando questo nuovo assetto, dimostriamo l&#39;elettroporazione affidabile di una matrice (n = 15) delle singole cellule in sospensione, utilizzando basse applicati campi elettrici (&lt; 1 V) e la consegna rapida e localizzata intracellulare di composti altrimenti impermeabile (calceina e arancio verde Destrano). Tali misurazioni elettriche e ottiche multiplex in funzione del tempo non sono raggiungibili con configurazioni tipiche di elettroporazione. Questo sistema, che si monta sul microscopio invertito, evita molti problemi tipicamente associati con configurazioni di chip microfluidici prototipo e, ancora pi&ugrave; importante, offre ben controllata e riproducibile pressione parallela e applicazione elettrica di singole celle per ripetibilit&agrave;.

Cella singola elettroporazione matrici con monitoraggio in tempo reale e controllo feedback.

&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001;RNA&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;DNA&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x3088;&#x304F;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001; - &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6C38;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x50B7;&#x306A;&#x3057; - &#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x5275;&#x85AC;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xB7;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x666E;&#x53CA;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4F7F;&#x3044;&#x6368;&#x3066;&#x306E;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x4EF2;&#x9593;&#x304C;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x5404;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x76E3;&#x8996;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x5236;&#x5FA1;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x96FB;&#x754C;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x518D;&#x5C01;&#x9396;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x754C;&#x8A98;&#x8D77;&#x30C0;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x3044;&#x5370;&#x52A0;&#x96FB;&#x754C;&#xFF08;&#x26;lt;1 V&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#xFF08;N = 15&#xFF09;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x4E0D;&#x6D78;&#x900F;&#x6027;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x9001;&#x9054;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30AA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#xFF09;&#x3002;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x91CD;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5012;&#x7ACB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x9664;&#x304D;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4E26;&#x5217;&#x5727;&#x529B;&#x3068;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;

&#xB9C8;&#xC57D; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;, DNA &#xB610;&#xB294; RNA, &#xC140;-&#xC140;-&#xC5D0; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC0C1; &#xC5C6;&#xC774; &#xBE60;&#xB978; well-controlled &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xD37C;&#xC9C0;&#xB294; &#xB3C4;&#xC804; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC870;&#xC791;, electroporation &#xBC0F; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;&#xC758; &#xAC01; &#xC140;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xC77C;&#xD68C;&#xC6A9; 96 &#xC798; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xADF8; &#xC9DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xBCA4;&#xCE58;&#xD0D1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCCAB; &#xC2DC;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC81C;&#xC5B4; electroporation &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; electroporation &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC790;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xC774;&#xBCF4;&#xB2E4; &#xB9C9; resealing &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC140;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD544;&#xB4DC; &#xC720;&#xB3C4; &#xD53C;&#xD574; &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC744; &#xD574;&#xC81C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; electroporation &#xC2DC;&#xC5F0;&#xC774; &#xC18C;&#xC124; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, (n = 15) &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xC57C; &#xC801;&#xC6A9; (&lt; 1 V)&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC2A4;&#xBA70;&#xB4E4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; (Calcein &#xBC0F; &#xC624;&#xB80C;&#xC9C0; &#xADF8;&#xB9B0; Dextran) &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC804;&#xB2EC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xC804;&#xAE30; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; &#xCE21;&#xC815; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; electroporation &#xC124;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC70;&#xAFB8;&#xB85C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xD0D1;&#xC7AC;,&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; obviates &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6D0;&#xD615; &#xBBF8;&#xC138; &#xCE69; &#xC124;&#xCE58;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB9CE;&#xC740; &#xBB38;&#xC81C; &#xACE0; &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, well-controlled &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBCD1;&#xB82C; &#xC555;&#xB825;&#xACFC; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0; &#xC804;&#xAE30; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation &#xBC30;&#xC5F4;.

Rapid bien controlado el suministro intracelular de compuestos de f&#xE1;rmacos, ARN o ADN en una c&#xE9;lula - sin da&#xF1;o permanente a la celda - es un desaf&#xED;o generalizado en la investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica biolog&#xED;a celular, el descubrimiento de f&#xE1;rmacos, y la entrega de genes. Para hacer frente a este desaf&#xED;o, hemos desarrollado un sistema de sobremesa compuesto por una interfaz de control, que se acopla a los desechables de 96 pocillos con formato dispositivos de microfluidos, que permite la manipulaci&#xF3;n individual, la electroporaci&#xF3;n y la monitorizaci&#xF3;n en tiempo real de cada c&#xE9;lula en suspensi&#xF3;n. Este es el primero en demostrar en tiempo real controlado por electroporaci&#xF3;n de una serie de simples c&#xE9;lulas. Nuestro programa de ordenador detecta autom&#xE1;ticamente los eventos de electroporaci&#xF3;n y posteriormente libera el campo el&#xE9;ctrico, se opone a continuaci&#xF3;n campo da&#xF1;o inducido de la c&#xE9;lula, para permitir resellado membrana. El uso de este nuevo set-up, se demuestra la confianza de la electroporaci&#xF3;n de una matriz (n = 15) de las c&#xE9;lulas individuales en suspensi&#xF3;n, utilizando campos el&#xE9;ctricos aplicados bajo (&#x26;lt;1 V) y la entrega intracelular r&#xE1;pida y localizada de compuestos de otra manera impermeable (calce&#xED;na y Naranja Verde dextrano). Tales multiplexados mediciones el&#xE9;ctricas y &#xF3;pticas como una funci&#xF3;n del tiempo no son alcanzables con las configuraciones t&#xED;picas de electroporaci&#xF3;n. Este sistema, que se monta en un microscopio invertido, evita muchos problemas asociados t&#xED;picamente con protot&#xED;picos configuraciones de chip de microfluidos y, m&#xE1;s importante, ofrece presi&#xF3;n paralelo bien controlada y reproducible y aplicaci&#xF3;n el&#xE9;ctrica a las c&#xE9;lulas individuales de repetibilidad.

Una sola c&#xE9;lula de matrices de electroporaci&#xF3;n con Monitoreo en tiempo real y control de retroalimentaci&#xF3;n

&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#xFF0C;&#x5E94;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7535;&#x573A;&#xFF0C;permeabilize &#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#xFF0C;&#x4E2A;&#x522B;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x660E;&#x6539;&#x5584;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x80FD;&#x529B;&#x548C;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7387;&#x8D85;&#x8FC7;&#x5E38;&#x89C4;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x8FDB;&#x65B0;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5916;&#x6E90;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6548;&#x7387;&#xFF1A; &#x7535;&#x6CF3;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x540E;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x7535;&#x6CF3;&#x7528;&#x6765;&#x534F;&#x52A9;&#x52A0;&#x8F7D;&#x5426;&#x5219;&#x4E3A;&#x9632;&#x6E17;&#x5916;&#x6E90;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20; (Invitrogen&#x3001; MW = 622) &#x548C;&#x4FC4;&#x52D2;&#x5188;&#x5DDE;&#x7EFF;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6; &#xFF08;OGD&#xFF0C;Invitrogen&#xFF0C;MW = 70,000)&#x3002;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E00;&#x9879;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; pre-concentrating &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x7535;&#x573A;&#x7528;&#x4E8E;&#x9A71;&#x52A8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528; 50-200 mV &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x540E;&#x7A7F;&#x5B54;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x591A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x6CF3;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5355;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x540E;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x7684;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7387;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x7535;&#x6CF3;&#x8F85;&#x52A9;&#x9AD8;&#x6548;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4F20;&#x9012;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7A7F;&#x5B54;&#x3002;

Single-cell electroporation, in which a focused electric field is applied to permeabilize an individual target cell using relatively low applied voltages, has demonstrated improved cell viability and transfection rates over conventional bulk electroporation set-ups. Here, we introduce a new strategy, in conjunction with single-cell electroporation, to enhance exogenous transport efficiency: electrophoresis delivery of compounds subsequent to electroporation. Electrophoresis is used to assist loading of otherwise impermeable exogenous anionic fluorescent molecules Calcein (Invitrogen, MW = 622) and Oregon Green Dextran (OGD, Invitrogen, MW = 70,000). For the larger dextran molecules, we demonstrate a protocol of first pre-concentrating at the cell-microfluidic channel interface. Then, the electric field is used to drive these molecules into the cell post-electroporation using 50-200 mV. We demonstrate delivery rate enhancements of more than an order of magnitude using electrophoresis compared to diffusion alone subsequent to electroporation.

Electrophoresis-assisted single-cell electroporation for efficient intracellular delivery.

Une seule cellule d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation, dans lequel un champ &#xE9;lectrique focalis&#xE9; est appliqu&#xE9; &#xE0; perm&#xE9;abiliser une cellule cible &#xE0; l&#x26;#39;aide individuelle relativement faibles tensions appliqu&#xE9;es, a d&#xE9;montr&#xE9; la viabilit&#xE9; des cellules am&#xE9;lior&#xE9;e et taux de transfection plus classiques en vrac &#xE9;lectroporation set-ups. Ici, nous introduisons une nouvelle strat&#xE9;gie, en conjonction avec une seule cellule d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation, pour am&#xE9;liorer l&#x26;#39;efficacit&#xE9; des transports exog&#xE8;ne: la livraison &#xE9;lectrophor&#xE8;se de compos&#xE9;s ult&#xE9;rieurs &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation. L&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se est utilis&#xE9;e pour faciliter le chargement d&#x26;#39;ailleurs imperm&#xE9;able exog&#xE8;ne anionique fluorescente calc&#xE9;ine mol&#xE9;cules (Invitrogen, MW = 622) et de l&#x26;#39;Oregon vert Dextran (OGD, Invitrogen, MW = 70.000). Pour les mol&#xE9;cules de dextran plus, nous d&#xE9;montrons un protocole de la premi&#xE8;re pr&#xE9;-concentration &#xE0; l&#x26;#39;interface canal cellulaire microfluidique. Puis, le champ &#xE9;lectrique est utilis&#xE9; pour entra&#xEE;ner ces mol&#xE9;cules dans la cellule apr&#xE8;s l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation en utilisant 50 &#xE0; 200 mV. Nous d&#xE9;montrons des am&#xE9;liorations des taux de livraison de plus d&#x26;#39;un ordre de grandeur en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se par rapport &#xE0; la diffusion seule &#xE0; la suite de l&#x26;#39;&#xE9;lectroporation.

Electrophor&#xE8;se assist&#xE9;e unicellulaire &#xE9;lectroporation pour la d&#xE9;livrance intracellulaire efficace

Einzellige Elektroporation, in der eine fokussierte elektrische Feld angewendet wird, um eine einzelne Zielzelle mit relativ niedrige angewandte Spannungen, permeabilize hat verbesserte Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit und Transfektion Preise in konventionellen Massen Electroporation Set-ups demonstriert. Hier stellen wir eine neue Strategie, in Verbindung mit einzelligen Elektroporation, zur Verbesserung der exogenen Transporteffizienz: Elektrophorese Lieferung Verbindungen nach Elektroporation. Elektrophorese dient zum Laden sonst undurchl&auml;ssige exogene anionische fluoreszierende Molek&uuml;le Calcein unterst&uuml;tzen (Invitrogen, MW = 622) und Oregon Green Dextran (OGD, Invitrogen, MW = 70.000). F&uuml;r die gr&ouml;&szlig;eren Dextran-Molek&uuml;le zeigen wir ein Protokoll des ersten pre-concentrating in die Zelle-Microfluidic-Channel-Schnittstelle. Anschlie&szlig;end wird das elektrische Feld verwendet, diese Molek&uuml;le in der Zelle Post-Elektroporation mit 50-200 mV zu treiben. Wir demonstrieren die Lieferung Bewertung Erweiterungen von mehr als eine Gr&ouml;&szlig;enordnung mit Elektrophorese im Vergleich zur Verbreitung allein im Anschluss an die Elektroporation.

Elektrophorese-assistierte einzellige Electroporation f&uuml;r effiziente intrazellul&auml;re Bereitstellung.

Cella singola elettroporazione, in cui viene applicato un campo elettrico concentrato per permeabilizzare una cella obiettivo individuale utilizzando relativamente basse tensioni applicate, ha dimostrato tassi di redditivit&agrave; e transfezione cellula migliorata negli allestimenti di elettroporazione di massa convenzionale. Qui, presentiamo una nuova strategia, in collaborazione con cella singola elettroporazione, per migliorare l&#39;efficienza dei trasporti esogeno: consegna di elettroforesi di composti successivamente elettroporazione. L&#39;elettroforesi viene usato per aiutare il caricamento altrimenti impermeabile esogeno molecole fluorescenti anionici calceina (Invitrogen, MW = 622) e Oregon Green Destrano (OGD, Invitrogen, MW = 70.000). Per le pi&ugrave; grandi molecole di destrano, mostriamo un protocollo di primo pre-concentrating all&#39;interfaccia cellula-microfluidica canale. Quindi, il campo elettrico &egrave; usato per guidare queste molecole nella cellula post-elettroporazione con 50-200 mV. Dimostreremo miglioramenti del tasso di consegna di pi&ugrave; di un ordine di grandezza mediante elettroforesi rispetto alla diffusione solo successivamente elettroporazione.

Elettroforesi-assistita a cella singola elettroporazione per efficiente consegna intracellulare.

&#x96C6;&#x4E2D;&#x96FB;&#x754C;&#x304C;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4F4E;&#x3044;&#x5370;&#x52A0;&#x96FB;&#x5727;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x6539;&#x5584;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7387;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#xFF1A;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x914D;&#x4FE1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x4E0D;&#x6D78;&#x900F;&#x6027;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;Invitrogen&#x793E;&#x88FD;&#x3001;MW = 622&#xFF09;&#x3068;&#x30AA;&#x30EC;&#x30B4;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#xFF08;OGD&#x3001;Invitrogen&#x793E;&#x88FD;&#x3001;MW = 70,000&#xFF09;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3067;&#x30D7;&#x30EA;&#x96C6;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x96FB;&#x754C;&#x304C;50&#x304B;&#x3089;200 mV&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4E00;&#x4EBA;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6841;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x7387;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x9001;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;

&#xB418;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC804;&#xC555;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; permeabilize&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810; &#xB9DE;&#xCD98;&#xB41C; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xC57C;&#xB97C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation &#xC885;&#xB798;&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; electroporation &#xC5C5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC0F; transfection &#xC18D;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Exogenous &#xC804;&#xC1A1; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;,: electroporation &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC2A4;&#xBA70;&#xB4E4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; exogenous &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790; Calcein&#xC758; &#xB85C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; (Invitrogen, MW = 622)&#xC640; &#xC624; &#xB808; &#xACE4; &#xADF8;&#xB9B0; Dextran (&#xC9C0;&#xB3C4;&#xBD80;, Invitrogen, MW = 70000). &#xD070; dextran &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; pre-concentrating&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C;, &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC774;&#xC774; &#xBD84;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C;-electroporation 50-200 Mv&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xAE09; electroporation &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xD63C;&#xC790;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAE30; &#xC21C;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB354;&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electroporation.

Sola c&#xE9;lula electroporaci&#xF3;n, en el cual se aplica un campo el&#xE9;ctrico enfocada para permeabilizar una c&#xE9;lula diana individuo utilizando voltajes aplicados relativamente bajos, se ha demostrado la viabilidad celular mejorado y las tasas de transfecci&#xF3;n m&#xE1;s convencionales a granel de electroporaci&#xF3;n montajes. Aqu&#xED;, se introduce una nueva estrategia, en conjunci&#xF3;n con una sola celda de electroporaci&#xF3;n, para mejorar la eficiencia del transporte ex&#xF3;geno: entrega electroforesis de compuestos posteriores a la electroporaci&#xF3;n. Electroforesis se utiliza para ayudar a la carga de otro modo impermeable ex&#xF3;geno ani&#xF3;nico fluorescente calce&#xED;na mol&#xE9;culas (Invitrogen, PM = 622) y Oregon Verde Dextrano (OGD, Invitrogen, PM = 70.000). Para las grandes mol&#xE9;culas de dextrano, se demuestra un protocolo de la primera pre-concentraci&#xF3;n en la interfaz de canal de las c&#xE9;lulas de microfluidos. Entonces, el campo el&#xE9;ctrico se utiliza para conducir estas mol&#xE9;culas en la c&#xE9;lula post-electroporaci&#xF3;n utilizando 50-200 mV. Se demuestra mejoras en la entrega de velocidad de m&#xE1;s de un orden de magnitud mediante electroforesis en comparaci&#xF3;n con difusi&#xF3;n por s&#xED; sola despu&#xE9;s de la electroporaci&#xF3;n.

La electroforesis con ayuda de una sola celda de electroporaci&#xF3;n para la administraci&#xF3;n intracelular eficiente

&#x8F6F;&#x523B;&#x8680;&#x7684;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7; (PDMS) &#x5F39;&#x6027;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x542F;&#x7528;&#x4E86;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x5236;&#x9020;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x88C5;&#x7F6E;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x62C5;&#x5FE7;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x8868;&#x9762;&#x5438;&#x9644;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5B54;&#x9699;&#x7387;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;2 &#x5C0F;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x5438;&#x9644; (&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x548C; 5-(&#x548C; 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) &#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x8868;&#x9762;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x548C;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5438;&#x9644;&#x5DF2;&#x88AB;&#x76F8;&#x6BD4; 2 &#x4F20;&#x7EDF;&#x886C;&#x5E95;&#xFF1A; &#x73BB;&#x7483;&#x548C;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x3002;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x517B;&#x751F;&#x4E2D;&#x5438;&#x9644;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5411;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5438;&#x9644;&#x4E0E;&#x89E3;&#x5438;&#x7684;&#x6D41;&#x91CF;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684; 2 &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E5F;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x6700;&#x4F4E;&#x9650;&#x5EA6;&#x5438;&#x9644;&#x7684;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#xFF0C;&#x800C;&#x66F4;&#x4E3A;&#x758F;&#x6C34;&#x6D85;&#x5438;&#x9644;&#x5728;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5411;&#x4E0A;&#x81F3; 4 &#x500D;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x6216;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x3002;&#x5728;&#x6D41;&#x52A8;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5438;&#x6982;&#x51B5;&#x548C; desorbed &#x590D;&#x5408;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D;&#x5230;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73; 10-42 s &#x89E3;&#x5438;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#xFF09; &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x6700;&#x574F;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6D85; 4 &#x5206;&#x949F;&#x66B4;&#x9732;&#x540E; 4 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D17;&#x5BFC;&#x81F4;&#x590D;&#x5408;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5FAE;&#x964D;&#x5230;&#x4F4E;&#x4E8E; 2 x 10(-5) &#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x6D53;&#x5EA6;&#x503C;&#x3002;

&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x590D;&#x5408;&#x5438;&#x9644;&#x5728;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;

Soft lithography of polydimethylsiloxane (PDMS), an elastomeric polymer, has enabled rapid and inexpensive fabrication of microfluidic devices for various biotechnology applications. However, concerns remain about adsorption of compounds on PDMS surfaces because of its porosity and hydrophobicity. Here, the adsorption of 2 small fluorescent dyes of different hydrophobicity (calcein and 5- (and 6-)carboxytetramethylrhodamine (TMR)) on PDMS surface has been systematically characterized, and PDMS adsorption has been compared with 2 traditional substrates: glass and polystyrene. To characterize adsorption in a regimen that is more relevant to microfluidic applications, the adsorption and desorption of the 2 compounds in PDMS microfluidic channels under flow conditions were also studied. Results showed that there was minimal adsorption of the hydrophilic compound calcein on PDMS, whereas the more hydrophobic TMR adsorbed on PDMS up to 4 times of that on glass or polystyrene. Under flow conditions, the desorption profiles and times needed to drop desorbed compound concentrations to negligible levels (desorption time constant, 10-42 s) were characterized. In the worst case scenario, after a 4-min exposure to TMR, 4 min of continuous wash resulted in compound concentrations in the microchannels to drop to values below 2 x 10(- 5) of the initial concentration.

PDMS compound adsorption in context.

Lithographie douce de polydim&#xE9;thylsiloxane (PDMS), un polym&#xE8;re &#xE9;lastom&#xE8;re, a permis la fabrication rapide et peu co&#xFB;teuse des dispositifs microfluidiques pour diverses applications de la biotechnologie. Toutefois, des inqui&#xE9;tudes subsistent quant adsorption des compos&#xE9;s sur des surfaces de PDMS en raison de sa porosit&#xE9; et d&#x26;#39;hydrophobicit&#xE9;. Ici, l&#x26;#39;adsorption de 2 petites colorants fluorescents de diff&#xE9;rence de caract&#xE8;re hydrophobe (calc&#xE9;ine et 5 - (et 6 -) carboxyt&#xE9;tram&#xE9;thylrhodamine (TMR)) sur la surface de PDMS a &#xE9;t&#xE9; syst&#xE9;matiquement caract&#xE9;ris&#xE9;, et PDMS d&#x26;#39;adsorption a &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9; avec 2 supports traditionnels: le verre et le polystyr&#xE8;ne. Afin de caract&#xE9;riser l&#x26;#39;adsorption dans un r&#xE9;gime qui est plus pertinent pour les applications microfluidiques, l&#x26;#39;adsorption et la d&#xE9;sorption des compos&#xE9;s dans 2 canaux microfluidiques en PDMS dans des conditions d&#x26;#39;&#xE9;coulement ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s. Les r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; qu&#x26;#39;il y avait un minimum d&#x26;#39;adsorption de la calc&#xE9;ine compos&#xE9; hydrophile sur PDMS, alors que le TMR plus hydrophobe PDMS adsorb&#xE9; sur jusqu&#x26;#39;&#xE0; 4 fois sup&#xE9;rieure &#xE0; celle sur le verre ou le polystyr&#xE8;ne. Dans des conditions d&#x26;#39;&#xE9;coulement, les profils de d&#xE9;sorption et les d&#xE9;lais n&#xE9;cessaires pour d&#xE9;poser concentrations des compos&#xE9;s d&#xE9;sorb&#xE9;s &#xE0; des niveaux n&#xE9;gligeables (d&#xE9;sorption constante de temps, 10-42 s) ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s. Dans le pire des cas, apr&#xE8;s une exposition de 4 minutes &#xE0; TMR, 4 min de lavage continue a entra&#xEE;n&#xE9; des concentrations de compos&#xE9;s dans les microcanaux tomber &#xE0; des valeurs inf&#xE9;rieures &#xE0; 2 x 10 (- 5) de la concentration initiale.

Compos&#xE9; PDMS adsorption dans son contexte

Weiche Lithographie von Polydimethylsiloxan (PDMS), eine Elastomere Polymer, hat schnelle und kosteng&uuml;nstige Herstellung der Microfluidic Ger&auml;te f&uuml;r verschiedene Anwendungen der Biotechnologie aktiviert. Bleiben jedoch Bedenken &uuml;ber die Adsorption von Verbindungen auf PDMS Oberfl&auml;chen wegen seiner Porosit&auml;t und Hydrophobie. Hier, die Adsorption von 2 kleinen Leuchtstofff&auml;rbungen von verschiedenen Hydrophobie (Calcein und 5 (und 6) Carboxytetramethylrhodamine (TMR)) auf PDMS Oberfl&auml;che ist systematisch, und gepr&auml;gt PDMS Adsorption wurde verglichen mit herk&ouml;mmlichen Substraten 2: Glas und Polystyrol. Zur Charakterisierung von Adsorption in eine Therapie, die mehr wurden f&uuml;r mikrofluidische Anwendungen, die Adsorption und Desorption der 2 Verbindungen in PDMS mikrofluidische Kan&auml;le unter Str&ouml;mungsverh&auml;ltnisse auch untersucht. Ergebnisse zeigten, dass es minimal Adsorption von der hydrophilen zusammengesetzte Calcein auf PDMS, w&auml;hrend der mehr hydrophobe TMR auf PDMS bis zu 4 mal das auf Glas oder Polystyrol adsorbiert. Unter Str&ouml;mungsverh&auml;ltnisse zeichneten sich die Desorption Profile und oft gebraucht, desorbierte zusammengesetzte Konzentrationen zu vernachl&auml;ssigendes Niveau (Desorption Zeitkonstante, 10-42-s) zu l&ouml;schen. Im schlimmsten Fall ergab 4 min kontinuierliche W&auml;sche nach einer 4-min TMR, zusammengesetzte Konzentrationen in den Mikrokan&auml;len auf Werte unter 2 X 10(-5) der anf&auml;nglichen Konzentration fallen.

PDMS zusammengesetzte Adsorption in Zusammenhang.

Litografia morbido di polidimetilsilossano (PDMS), un polimero elastomerico, ha permesso a rapido e poco costoso fabbricazione di dispositivi microfluidici per varie applicazioni della biotecnologia. Tuttavia, preoccupazioni rimangono sull&#39;adsorbimento di composti su superfici PDMS a causa della sua porosit&agrave; e idrofobicit&agrave;. Qui, l&#39;adsorbimento di 2 piccoli tinture fluorescenti di diverso idrofobicit&agrave; (calceina e 5 (e 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) su PDMS superficie &egrave; stata sistematicamente caratterizzata, e adsorbimento PDMS &egrave; stato confrontato con 2 substrati tradizionali: vetro e polistirolo. Per caratterizzare l&#39;adsorbimento in un regime che &egrave; pi&ugrave; rilevanti per le applicazioni di microfluidica, l&#39;adsorbimento e desorbimento dei 2 composti canali microfluidici PDMS in condizioni di flusso sono stati anche studiati. I risultati hanno mostrato che non c&#39;era minimo adsorbimento della calceina composto idrofilico su PDMS, considerando che il TMR pi&ugrave; idrofobi adsorbito su PDMS fino a 4 volte di quella su vetro o polistirolo. In condizioni di flusso, i profili di desorbimento e tempi necessari a goccia desorbita con concentrazioni di composti a livelli trascurabili (costante di tempo di desorbimento, 10-42 s) sono stati caratterizzati. Nel peggiore dei casi, dopo un&#39;esposizione di 4 min a TMR, 4 min di lavaggio continuo ha portato in concentrazioni composti a microcanali di scendere a valori inferiori a 2 x 10(-5) della concentrazione iniziale.

PDMS compound adsorbimento nel contesto.

&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x3001;&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x88FD;&#x9020;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x61F8;&#x5FF5;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x591A;&#x5B54;&#x6027;&#x3068;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;PDMS&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;5  - &#xFF08;6  - &#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#xFF08;TMR&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x5438;&#x7740;PDMS&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;PDMS&#x5438;&#x7740;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30B8;&#x30E1;&#x30F3;&#x3067;&#x5438;&#x7740;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;PDMS&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;2&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x3068;&#x8131;&#x7740;&#x3082;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;TMR&#x306F;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x3067;&#x305D;&#x306E;4&#x500D;&#x306B;PDMS&#x4E0A;&#x306B;&#x5438;&#x7740;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PDMS&#x4E0A;&#x306B;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x7121;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#xFF08;&#x8131;&#x7740;&#x6642;&#x5B9A;&#x6570;&#x3001;10&#x304B;&#x3089;42 s&#xFF09;&#x306B;&#x8131;&#x96E2;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8131;&#x96E2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; -  5&#xFF09;&#x521D;&#x671F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x60AA;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30EA;&#x30AA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TMR&#x301C;4&#x5206;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x3001;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D17;&#x6D44;&#x306E;4&#x5206;&#xD7;10 2&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x5024;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;PDMS&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;

Polydimethylsiloxane (PDMS) &#xD0C4;&#xC131; &#xC911;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xC18C; &#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBA85; &#xACF5;&#xD559; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC791;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC6B0;&#xB824;&#xB294; &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131;&#xACFC; hydrophobicity PDMS &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD761;&#xCC29;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xB2E4;&#xB978; hydrophobicity&#xC758; 2 &#xC791;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD761;&#xCC29; (calcein &#xBC0F; 5-(&#xACE0; 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR))&#xC5D0;&#xC11C; PDMS &#xD45C;&#xBA74; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC0F; PDMS &#xD761;&#xCC29; 2 &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xC720;&#xB9AC;, &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C;. &#xB354; &#xCC98;&#xBC29;&#xC5D0; &#xD761;&#xCC29;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD761;&#xCC29; &#xBC0F; &#xD0C8; &#xCC29; &#xD750;&#xB984; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; PDMS &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758;&#xB3C4; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB354; &#xC18C;&#xC218; TMR adsorbed PDMS&#xC5D0; &#xCD5C;&#xB300;&#xB97C; 4 &#xBC88;&#xC758; &#xC720;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD574; PDMS&#xC5D0; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; calcein&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xD761;&#xCC29; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD750;&#xB984; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218;&#xC900; (&#xD0C8; &#xCC29; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;, 10-42 s) desorbed &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB4DC;&#xB86D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xD0C8; &#xCC29; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC545;&#xC758; &#xC2DC;&#xB098;&#xB9AC;&#xC624;&#xB294; TMR&#xC5D0; 4 &#xBD84; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC138;&#xCC99;&#xC758; 4 &#xBD84;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xAC00; &#xCD08;&#xAE30; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; 2 x 10(-5) &#xC544;&#xB798; &#xAC12;&#xC744; microchannels&#xC5D0;&#xC11C;.

PDMS &#xBCF5;&#xD569; &#xD761;&#xCC29; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C;.

Litograf&#xED;a suave de polidimetilsiloxano (PDMS), un pol&#xED;mero elast&#xF3;mero, ha permitido la fabricaci&#xF3;n r&#xE1;pida y barata de dispositivos de microfluidos para diversas aplicaciones de la biotecnolog&#xED;a. Sin embargo, existen dudas sobre la adsorci&#xF3;n de los compuestos en las superficies de PDMS, debido a su porosidad y la hidrofobia. Aqu&#xED;, la adsorci&#xF3;n de 2 tintes fluorescentes peque&#xF1;as de hidrofobicidad diferente (calce&#xED;na y 5 - (y 6 -) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) en la superficie de PDMS se ha caracterizado de forma sistem&#xE1;tica, y la adsorci&#xF3;n de PDMS se ha comparado con 2 sustratos tradicionales: vidrio y poliestireno. Para la caracterizaci&#xF3;n de adsorci&#xF3;n en un r&#xE9;gimen que es m&#xE1;s relevante para las aplicaciones de microflu&#xED;dica, la adsorci&#xF3;n y desorci&#xF3;n de los 2 compuestos de PDMS canales de microfluidos bajo condiciones de flujo tambi&#xE9;n fueron estudiados. Los resultados mostraron que no hab&#xED;a un m&#xED;nimo de adsorci&#xF3;n de la calce&#xED;na compuesto hidr&#xF3;filo en PDMS, mientras que la TMR m&#xE1;s hidr&#xF3;fobo adsorbe en PDMS hasta 4 veces de que sobre vidrio o poliestireno. Bajo condiciones de flujo, los perfiles de desorci&#xF3;n y los tiempos necesarios para colocar desorbidos concentraci&#xF3;n de estos compuestos a niveles insignificantes (tiempo de desorci&#xF3;n, 10-42 s) se han caracterizado. En el peor de los casos, despu&#xE9;s de una exposici&#xF3;n 4-min a TMR, 4 min de lavado continuo result&#xF3; en concentraciones de compuestos en los microcanales a caer a valores inferiores a 2 x 10 (- 5) de la concentraci&#xF3;n inicial.

PDMS compuesto de adsorci&#xF3;n en el contexto

&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x5728;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x73B0;&#x8C61;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x8005;&#x63D0;&#x51FA;&#x8FDB;&#x884C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x526A;&#x5207;&#x6D41;&#x52A8;&#x4E0B;&#x7684;&#x4E95;&#x677F;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7; (&#x8FD0;&#x52A8;) &#x8BBE;&#x5907;&#x3002;&#x751F;&#x7406;&#x526A;&#x6D41;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;-&#x914D;&#x4F4D;&#x4F53;&#x7C98;&#x9644;&#x5728;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x5185;&#x5177;&#x6709;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x610F;&#x4E49;&#x6BD4;&#x5E38;&#x89C4;&#x4E95;&#x677F;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x300C; &#x8FD0;&#x52A8; &#x300D; &#x683C;&#x5F0F;&#x8FD8;&#x5236;&#x4F5C;&#x5FEB;&#x76F8;&#x6BD4;&#x9759;&#x6001;&#x4E95;&#x677F;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x6DB2;&#x4F53;&#x5904;&#x7406;&#x5927;&#x91CF;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#x4F18;&#x52BF;&#x3002;&#x4F5C;&#x8005;&#x7528; VLA-4-&#x8840;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9ECF;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x6A21;&#x578B; VLA 4 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7C98;&#x9644;&#x6291;&#x5236;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; &#x300C; &#x8FD0;&#x52A8; &#x300D; &#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210; IC(50) &#x5242;&#x91CF;-&#x53CD;&#x5E94;&#x66F2;&#x7EBF; 96 &#x500D;&#x6BD4;&#x5E38;&#x89C4;&#x6D41;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3002;&#x8FD0;&#x52A8;&#x8BBE;&#x5907;&#x4E5F;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x7684;&#x8F6E;&#x56DE;&#x3002;&#x4E8C;&#x5341;&#x56DB;&#x4E2A;&#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x8F6E;&#x56DE;&#x6570;&#x636E;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;

&#x597D;&#x677F;&#x8026;&#x5408;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7B80;&#x6613;&#x57FA;&#x4E8E;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x8F6E;&#x56DE;&#x5316;&#x9A8C;&#x3002;

Microfluidic devices have become invaluable tools in recent years to model biological phenomena. Here, the authors present a well plate microfluidic (WPM) device for conducting cell biology assays under shear flow. Physiological shear flow conditions of cell-cell and cell-ligand adhesion within this device produce results with higher biological significance than conventional well plates. The WPM format also produced significant work flow advantages such as faster liquid handling compared to static well plate assays. The authors used the VLA-4-VCAM-1 cell adhesion model as the basis for a rapid, higher throughput adhesion inhibition screen of monoclonal antibodies against VLA-4. Using the WPM device, they generated IC(50) dose-response curves 96 times faster than conventional flow cells. The WPM device was also used to study transmigration of mononuclear cells through endothelial cell monolayers. Twenty-four channels of transmigration data were generated in a single experiment.

Well plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays.

Dispositifs microfluidiques sont devenus des outils pr&#xE9;cieux dans ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es pour mod&#xE9;liser des ph&#xE9;nom&#xE8;nes biologiques. Ici, les auteurs pr&#xE9;sentent une plaque bien microfluidique (WPM) dispositif pour r&#xE9;aliser des tests de biologie cellulaire sous &#xE9;coulement de cisaillement. Physiologiques des conditions d&#x26;#39;&#xE9;coulement de cisaillement de l&#x26;#39;adh&#xE9;rence cellule-cellule ou cellule-ligand dans ce dispositif de produire des r&#xE9;sultats avec signification biologique sup&#xE9;rieure &#xE0; classiques plaques de puits. Le format WPM a &#xE9;galement produit d&#x26;#39;importants avantages du flux de travail telles que la manutention rapide de liquide par rapport &#xE0; des essais statiques &#xE0; plaques ainsi. Les auteurs ont utilis&#xE9; le VLA-4-VCAM-1 mod&#xE8;le de l&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire comme base pour une rapide, l&#x26;#39;&#xE9;cran un d&#xE9;bit plus &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;inhibition d&#x26;#39;adh&#xE9;rence des anticorps monoclonaux contre VLA-4. Utilisation de l&#x26;#39;appareil WPM, ils ont g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; CI (50) courbes dose-r&#xE9;ponse 96 fois plus rapide que des cellules d&#x26;#39;&#xE9;coulement conventionnels. Le dispositif a &#xE9;t&#xE9; WPM &#xE9;galement utilis&#xE9; pour &#xE9;tudier la transmigration des cellules mononucl&#xE9;&#xE9;es par le biais des monocouches de cellules endoth&#xE9;liales. Vingt-quatre canaux de donn&#xE9;es de transmigration ont &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s en une seule exp&#xE9;rience.

Plaque de puits coupl&#xE9;s dispositifs microfluidiques Con&#xE7;u pour Cell Adhesion Facile &#xE0; base d&#x26;#39;images et dosages de la Transmigration

Microfluidic Vorrichtungen sind in den letzten Jahren um biologische Ph&auml;nomene zu modellieren unsch&auml;tzbare Werkzeuge geworden. Hier stellen die Autoren ein well Platte mikrofluidische (WPM) Ger&auml;t f&uuml;r die Durchf&uuml;hrung von Zelle Biologie Proben unter Scherung flie&szlig;en. Physiologische Scherung Str&ouml;mungsverh&auml;ltnisse der Zell-Zell und Zelle-Ligand Adh&auml;sion innerhalb dieses Ger&auml;t liefern Ergebnisse mit h&ouml;heren biologischen Bedeutung als konventionelle well Platten. Das WPM-Format produziert auch bedeutende Arbeit flie&szlig;en Vorteile wie schneller liquid-Handling im Vergleich zu statischen well Platte Proben. Die Autoren verwendet das VLA-4-VCAM-1 Zelle Adh&auml;sion Modell als Grundlage f&uuml;r eine schnelle, h&ouml;herer Durchsatz Adh&auml;sion Hemmung Bildschirm monoklonaler Antik&ouml;rper gegen VLA-4. Das WPM-Ger&auml;t verwenden, generiert sie IC (50) Dosis-Wirkungs-Kurven 96-mal schneller als herk&ouml;mmliche Durchflusszellen. Das WPM-Ger&auml;t wurde auch verwendet, um Seelenwanderung mononukle&auml;ren Zellen durch Endothelzellen Monolayers zu studieren. 24 Kan&auml;le Seelenwanderung Daten wurden in einem einzigen Experiment erzeugt.

Gut Platte gekuppelte Microfluidic Vorrichtungen zum oberfl&auml;chlichen bildbasierte Zelladh&auml;sion und Seelenwanderung Proben.

Dispositivi microfluidici sono diventati strumenti di inestimabile valore negli ultimi anni per modellare fenomeni biologici. Qui, gli autori presentano un dispositivo microfluidico (WPM) ben piastra per lo svolgimento di analisi di biologia delle cellule sotto flusso di shear. Condizioni di flusso fisiologico taglio di adesione cellula-cellula e cellula-ligando all&#39;interno di questo dispositivo di producono risultati con maggiore significato biologico pi&ugrave; convenzionali piatti ben. Il formato WPM produsse anche vantaggi flusso significativo lavoro come pi&ugrave; velocemente liquidi manipolazione rispetto ai dosaggi statico piastra ben. Gli autori hanno utilizzato il modello di adesione cellula VLA-4-VCAM-1 come base per uno schermo di inibizione adesione rapida, maggiore velocit&agrave; effettiva degli anticorpi monoclonali VLA-4. Utilizzando il dispositivo WPM, hanno generato le curve dose-risposta IC(50) 96 volte pi&ugrave; veloce rispetto a celle di flusso convenzionale. Il dispositivo WPM &egrave; stato anche utilizzato per studiare la trasmigrazione delle cellule mononucleate attraverso strati monomolecolari delle cellule endoteliali. Venti-quattro canali di trasmigrazione dati generati in un singolo esperimento.

Dispositivi microfluidici bene accoppiato a piastra progettato per trasmigrazione e adesione cellulare facile image-based assays.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x73FE;&#x8C61;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x305B;&#x3093;&#x65AD;&#x6D41;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x6D41;&#x4F53;&#xFF08;WPM&#xFF09;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE; - &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x305B;&#x3093;&#x65AD;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; WPM&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x9759;&#x7684;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x901F;&#x306A;&#x6DB2;&#x4F53;&#x51E6;&#x7406;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;VLA-4&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x63A5;&#x7740;&#x963B;&#x5BB3;&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;VLA-4-VCAM-1&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3002; WPM&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;96&#x500D;&#x9AD8;&#x901F;IC&#xFF08;50&#xFF09;&#x7528;&#x91CF; - &#x53CD;&#x5FDC;&#x66F2;&#x7DDA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; WPM&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5358;&#x5C64;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8F2A;&#x5EFB;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8F2A;&#x5EFB;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;24&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x7C21;&#x4FBF;&#x306A;&#x753B;&#x50CF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x79FB;&#x4F4F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;

&#xBBF8;&#xC138; &#xC7A5;&#xCE58; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD604;&#xC0C1;&#xC744; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD558; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC800;&#xC790; &#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xACB0;&#xD569; (WPM) &#xC7A5;&#xCE58; &#xC804;&#xB2E8; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC218;&#xD589;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC120;&#xBB3C;. &#xC140; &#xBC0F; &#xC140; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC811;&#xCC29;&#xC774;&#xC774; &#xC7A5;&#xCE58; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC804;&#xB2E8; &#xD750;&#xB984; &#xC870;&#xAC74; &#xACB0;&#xACFC;&#xAC00; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xC798; &#xD310; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC758;&#xBBF8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. WPM &#xD615;&#xC2DD; &#xB610;&#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC791;&#xC5C5; &#xD750;&#xB984; &#xC7A5;&#xC810; &#xC815;&#xC801; &#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBE60;&#xB978; &#xC561;&#xCCB4; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB4F1; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC800;&#xC790; VLA 4 VCAM 1 &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBAA8;&#xB378; VLA-4&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC811;&#xCC29; &#xC800;&#xD574; &#xD654;&#xBA74; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;. WPM &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC0DD;&#xC131; IC(50) &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC751;&#xB2F5; &#xACE1;&#xC120; 96 &#xBC88; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD750;&#xB984; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC;. WPM &#xC7A5;&#xCE58;&#xB294; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; monolayers &#xD1B5;&#xD574; &#xC11C; &#xC140;&#xC758; &#xD658;&#xC0DD;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 24 &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C;.

&#xC74C; &#xD310; &#xACB0;&#xD569; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xAE30;&#xBC18; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xD658;&#xC0DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dispositivos de microflu&#xED;dica se han convertido en herramientas muy valiosas en los &#xFA;ltimos a&#xF1;os para modelar los fen&#xF3;menos biol&#xF3;gicos. Aqu&#xED;, los autores presentan un plato as&#xED; de microfluidos (WPM) del dispositivo para la realizaci&#xF3;n de ensayos de biolog&#xED;a celular en el flujo de cortante. Fisiol&#xF3;gicos condiciones de flujo de cizallamiento de adhesi&#xF3;n c&#xE9;lula-c&#xE9;lula y c&#xE9;lula-ligando dentro de este dispositivo producir resultados con mayor importancia biol&#xF3;gica que los convencionales y placas. El formato de embalaje de madera tambi&#xE9;n se producen importantes ventajas de flujo de trabajo como el manejo de l&#xED;quidos m&#xE1;s r&#xE1;pido en comparaci&#xF3;n con los ensayos de placa est&#xE1;tica tambi&#xE9;n. Los autores utilizaron el VLA-4-VCAM-1 modelo de adhesi&#xF3;n celular como la base para una pantalla r&#xE1;pido, un mayor rendimiento inhibici&#xF3;n de la adhesi&#xF3;n de los anticuerpos monoclonales contra VLA-4. Utilizando el dispositivo MEM, generaron CI (50) curvas dosis-respuesta 96 veces m&#xE1;s r&#xE1;pido que las c&#xE9;lulas de flujo convencionales. El dispositivo MEM tambi&#xE9;n se utiliz&#xF3; para estudiar la transmigraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas mononucleares a trav&#xE9;s de monocapas de c&#xE9;lulas endoteliales. Veinte y cuatro canales de datos de transmigraci&#xF3;n se generaron en un solo experimento.

Bien acoplado Plate-dispositivos de microfluidos Dise&#xF1;ado para la adhesi&#xF3;n de la c&#xE9;lula Facile basado en im&#xE1;genes y ensayos Transmigraci&#xF3;n

&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x63A7;&#x5236;&#x9700;&#x8981;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA;&#x6709;&#x6548;&#x9488;&#x5BF9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5E76;&#x9694;&#x79BB;&#x7535;&#x963B;&#x6CC4;&#x9732;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x589E;&#x5F3A;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x8010;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5FEB;&#x901F;&#x7B5B;&#x67E5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5FAE;&#x5B54;&#x677F;&#x597D; &#xFF08;&quot;&#x9759;&#x6001;&quot;&#xFF09; &#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x53EF;&#x7528;&#xFF0C;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7B5B;&#x67E5;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D41;&#x751F;&#x7269;&#x819C; &#xFF08;&quot;&#x6D41;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&quot;&#xFF09; &#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x540E;&#x8005;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x66F4;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5929;&#x7136;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; &#xFF08;HTP&#xFF09; &#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x53EF;&#x53D6;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F7F;&#x7528;&#x8BBE;&#x5907;&#x7531;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x6E20;&#x9053;&#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D41;&#x4F53;&#x6D41;&#x52A8;&#x5230; 96 &#x4E2A;&#x4EBA;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x6C14;&#x52A8;&#x6CF5; (BioFlux) &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x8BBE;&#x5907;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FDB;&#x884C;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6D41;&#x52A8;&#x7387;&#xFF0C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6216;&#x95F4;&#x6B47;&#x7684;&#x6D41;&#x4F53;&#x6D41;&#x91CF;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x5B54;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E0E;&#x677F;&#x8BFB;&#x8005;&#x7684;&#x517C;&#x5BB9;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x7684;&#x4F7F;&#x7528;-&#x8868;&#x793A;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x4E0E;&#x7898;&#x5316;&#x4E19;&#x952D;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x677F;&#x9605;&#x8BFB;&#x5668;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FC5;&#x901F;&#x548C;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x4E0A;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x884C;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x6D3B;&#x529B;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x540C;&#x610F;&#x4E0E;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x8BA1;&#x6570;&#x677F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; BioFlux &#x548C;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x8FC5;&#x901F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x51E0;&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x5BF9;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC; PAO1 &#x6D41;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x7B5B;&#x9009;&#x6D41;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x65B0;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

Control of biofilms requires rapid methods to identify compounds effective against them and to isolate resistance-compromised mutants for identifying genes involved in enhanced biofilm resistance. While rapid screening methods for microtiter plate well ("static") biofilms are available, there are no methods for such screening of continuous flow biofilms ("flow biofilms"). Since the latter biofilms more closely approximate natural biofilms, development of a high-throughput (HTP) method for screening them is desirable. We describe here a new method using a device comprised of microfluidic channels and a distributed pneumatic pump (BioFlux) that provides fluid flow to 96 individual biofilms. This device allows fine control of continuous or intermittent fluid flow over a broad range of flow rates, and the use of a standard well plate format provides compatibility with plate readers. We show that use of green fluorescent protein (GFP)-expressing bacteria, staining with propidium iodide, and measurement of fluorescence with a plate reader permit rapid and accurate determination of biofilm viability. The biofilm viability measured with the plate reader agreed with that determined using plate counts, as well as with the results of fluorescence microscope image analysis. Using BioFlux and the plate reader, we were able to rapidly screen the effects of several antimicrobials on the viability of Pseudomonas aeruginosa PAO1 flow biofilms.

New device for high-throughput viability screening of flow biofilms.

Contr&#xF4;le des biofilms exige des m&#xE9;thodes rapides pour identifier des compos&#xE9;s efficaces contre eux et d&#x26;#39;isoler la r&#xE9;sistance des compromis pour identifier les g&#xE8;nes mutants impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;sistance accrue du biofilm. Bien que les m&#xE9;thodes de d&#xE9;pistage rapide pour plaque de microtitration bien (&#xAB;statique&#xBB;) biofilms sont disponibles, il n&#x26;#39;existe pas de m&#xE9;thodes de d&#xE9;pistage telles des biofilms en flux continu (&#xAB;biofilms flow&#x26;quot;). Depuis les biofilms derniers se rapprochent davantage de biofilms naturels, le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un haut d&#xE9;bit (HTP) proc&#xE9;d&#xE9; pour leur d&#xE9;pistage est souhaitable. Nous d&#xE9;crivons ici une nouvelle m&#xE9;thode utilisant un dispositif compos&#xE9; de canaux microfluidiques et une pompe pneumatique distribu&#xE9;s (BioFlux) qui fournit l&#x26;#39;&#xE9;coulement du fluide &#xE0; 96 biofilms individuels. Ce dispositif permet un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis de l&#x26;#39;&#xE9;coulement du fluide continu ou intermittent sur une large gamme de d&#xE9;bits, et l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un format de plaque ainsi norme offre une compatibilit&#xE9; avec les lecteurs de plaques. Nous montrons que l&#x26;#39;utilisation de la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) exprimant des bact&#xE9;ries, la coloration avec de l&#x26;#39;iodure de propidium, et la mesure de la fluorescence avec un lecteur de plaque permettent une d&#xE9;termination rapide et pr&#xE9;cise de la viabilit&#xE9; du biofilm. La viabilit&#xE9; biofilm mesur&#xE9;e avec le lecteur de plaque d&#x26;#39;accord avec celle d&#xE9;termin&#xE9;e au moyen des chiffres de la plaque, ainsi que avec les r&#xE9;sultats de l&#x26;#39;analyse au microscope image de fluorescence. Utilisation BioFlux et le lecteur de plaque, nous avons pu d&#xE9;pister rapidement les effets de plusieurs antimicrobiens sur la viabilit&#xE9; des biofilms de Pseudomonas aeruginosa PAO1 flux.

Nouveau p&#xE9;riph&#xE9;rique pour le d&#xE9;pistage de la viabilit&#xE9; &#xE0; haut d&#xE9;bit des biofilms de d&#xE9;bit

Kontrolle der Biofilme erfordert schnelle Methoden zur Verbindungen wirksam gegen sie zu identifizieren und Widerstand-gef&auml;hrdet Mutanten zur Identifizierung von Genen, die in erweiterten Biofilm Resistenz zu isolieren. W&auml;hrend schnelle Screening-Methoden f&uuml;r Mikrotiterplatten gut Platte (&quot;statische&quot;) Biofilme stehen, gibt es keine Methoden f&uuml;r solche Screening von kontinuierlichen Fluss Biofilmen (&quot;Fluss Biofilme&quot;). Da die letzteren Biofilme st&auml;rker nat&uuml;rliche Biofilme anzugleichen, ist die Entwicklung einer hohen Durchsatz (SZP) Methode f&uuml;r das screening von ihnen w&uuml;nschenswert. Wir beschreiben hier eine neue Methode, die mit einem Ger&auml;t, bestehend aus mikrofluidische Kan&auml;le und eine verteilte pneumatische Pumpe (BioFlux), die Fl&uuml;ssigkeitsstr&ouml;mung zu 96 einzelne Biofilme bereitstellt. Dieses Ger&auml;t erm&ouml;glicht die Feinsteuerung der kontinuierliche oder intermittierende Fl&uuml;ssigkeitsstr&ouml;mung eine breite Palette von Durchflussmengen und die Verwendung eines standard-well-Platte-Formats bietet Kompatibilit&auml;t mit Platte Leser. Wir zeigen die Verwendung von gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP)-Bakterien ausdr&uuml;ckend, F&auml;rbung mit Propidium Jodid und Messung der Fluoreszenz mit einem Leseger&auml;t erm&ouml;glichen schnelle und genaue Bestimmung der Biofilm Lebensf&auml;higkeit. Die Biofilm-Rentabilit&auml;t gemessen mit dem Leseger&auml;t einigte, die Platte z&auml;hlt ermittelt, sowie mit den Ergebnissen der Fluoreszenz-Mikroskop-Bildanalyse. Mit BioFlux und das Leseger&auml;t, konnten wir schnell die Auswirkungen von mehreren Antibiotika auf die Lebensf&auml;higkeit der Pseudomonas Aeruginosa PAO1 Str&ouml;mung Biofilme Bildschirm.

Neues Ger&auml;t f&uuml;r Lebensf&auml;higkeit Hochdurchsatz-Screening von Str&ouml;mung Biofilme.

Controllo del biofilm richiede metodi rapidi per identificare composti efficaci contro di loro e per isolare mutanti compromessa resistenza per l&#39;identificazione di geni coinvolti nel biofilm una maggiore resistenza. Mentre metodi di screening rapido per microtitolazione piastra ben biofilm (&quot;statico&quot;) sono disponibili, non esistono metodi per tale screening dei biofilm flusso continuo (&quot;biofilm di flusso&quot;). Poich&eacute; i biofilm di quest&#39;ultimo pi&ugrave; strettamente approssimativa di biofilm naturali, lo sviluppo di un metodo (HTP) high-throughput screening li &egrave; auspicabile. Descriviamo qui un nuovo metodo che utilizza un dispositivo composto da canali microfluidici e una pompa pneumatica distribuita (BioFlux) che fornisce il flusso del fluido a 96 biofilm singoli. Questo dispositivo permette un controllo preciso del flusso del fluido continuo o intermittente una vasta gamma di portate, e l&#39;uso di un formato standard piastra ben fornisce compatibilit&agrave; con i lettori di piastra. Ci mostrano che l&#39;uso della proteina fluorescente verde (GFP)-esprimendo batteri, colorazione con ioduro di propidium e misurazione della fluorescenza con un lettore di piastra consentono rapida ed accurata determinazione della redditivit&agrave; di biofilm. La vitalit&agrave; di biofilm misurata con il lettore di piastra concordato con quello determinato utilizzando piastra conteggi, nonch&eacute; con i risultati di analisi di immagine microscopio di fluorescenza. Utilizzando BioFlux e il lettore di piastra, siamo riusciti a schermo rapidamente gli effetti dei diversi antimicrobici sull&#39;attuabilit&agrave; di Pseudomonas aeruginosa PAO1 flusso biofilm.

Nuovo dispositivo per lo screening di alto-rendimento redditivit&agrave; del flusso biofilm.

&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x8010;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x529B;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BF;&#x30A4;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#xFF08; &#x26;quot;&#x9759;&#x7684;&#x26;quot;&#xFF09;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9023;&#x7D9A;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08; &#x26;quot;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x26;quot;&#xFF09;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;HTP&#xFF09;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x304C;&#x671B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;96&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x6563;&#x578B;&#x306E;&#x7A7A;&#x6C17;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#xFF08;BioFlux&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x6D41;&#x91CF;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65AD;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x30E8;&#x30A6;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306F;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x753B;&#x50CF;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x5408;&#x610F;&#x3057;&#x305F;&#x3002; BioFlux&#x3068;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;PAO1&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;

&#xC81C;&#xC5B4; biofilms&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; biofilm &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC800;&#xD56D;-&#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xBE60;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microtiter&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC120;&#xBCC4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC798; &#xD310; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; (&quot;&#xACE0;&#xC815;&quot;) biofilms&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC70;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xC18D; &#xD750;&#xB984; biofilms (&quot;&#xD750;&#xB984; biofilms&quot;)&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; biofilms &#xB354; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC790;&#xC5F0; biofilms &#xB300;&#xB7B5;&#xC801;&#xC778;, &#xC774;&#xD6C4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; (HTP) &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC774; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; 96 &#xAC1C;&#xBCC4; biofilms&#xC5D0; &#xC720;&#xCCB4; &#xD750;&#xB984;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC0B0;&#xB41C; &#xACF5; &#xC555; &#xD38C;&#xD504; (BioFlux)&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C8; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xCE58; &#xD750;&#xB984; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xD5D0;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xCCB4; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xBBF8;&#xC138; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354;&#xC640; &#xD638;&#xD658;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD615;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;-biofilm &#xC0DD;&#xC874;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xD5C8;&#xC6A9; propidium &#xC694;&#xC624;&#xB4DC; &#xD654; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;. &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354; &#xCE21;&#xC815; biofilm &#xC0DD;&#xC874; &#xC811;&#xC2DC; &#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815;&#xD560; &#xADF8; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xD569;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;. BioFlux &#xBC0F; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; PAO1 &#xD750;&#xB984; biofilms&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; antimicrobials&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD750;&#xB984; biofilms&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC2A4;&#xB8E8;&#xD48B; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8; &#xC7A5;&#xCE58;.

Cristian Ionescu-Zanetti

Fluxion Biosciences, Inc.

Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells