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Quantifying the Frequency of Tumor-propagating Cells Using Limiting Dilution Cell Transplantation in Syngeneic Zebrafish

Self-renewing cancer cells are the only cell types within a tumor that have an unlimited ability to promote tumor growth, and are thus known as ...

Harvard Medical School

&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x5F0F;&#x53D1;&#x5C55;&#x3001; &#x884C;&#x4E3A;&#x3001; &#x75BE;&#x75C5;&#x548C;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F18;&#x70B9;&#x662F;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x4E0A;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BD5;&#x9A8C; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x6D3B;&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5EFA;&#x7B51;&#x53D1;&#x5149;&#x4E8C;&#x6781;&#x7BA1; (LED) &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B83;&#x6765;&#x540C;&#x65F6;&#x56FE;&#x50CF;&#x8FBE; 30 transgenically &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x6216;&#x6807;&#x8BB0;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x5F39;&#x6027;&#x4F53;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x534F;&#x8BAE;&#x663E;&#x793A; LED &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E94;&#x79CD;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#x591A;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x901A;&#x9053; unanesthetized &#x7684;&#x6E38;&#x6CF3;&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x3002;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x80FD;&#x591F;&#x8FDB;&#x884C;&#x751F;&#x6210;&#x548C;&#x7528;&#x4E8E;&#x6210;&#x50CF; 1 &#x5929;&#x4E4B;&#x5185;&#xFF0C;&#x800C;&#x521B;&#x5EFA;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x6709;&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x9700;&#x8981; 1 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5230;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6708;&#xFF0C;&#x5177;&#x4F53;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6240;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;LED &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x3001; &#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5FEB;&#x901F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6210;&#x4EBA;&#x8367;&#x5149;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x548C;&#x5B83;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x52A8;&#x7269;&#x3001; &#x690D;&#x5165;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x7B5B;&#x9009;&#x3001; &#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x957F;&#x671F;&#x5206;&#x6790;&#x4E2A;&#x522B;&#x9C7C;&#x3002;

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x6210;&#x4EBA;&#x8367;&#x5149;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E0E; LED &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

Zebrafish are a useful vertebrate model for the study of development, behavior, disease and cancer. A major advantage of zebrafish is that large numbers of animals can be economically used for experimentation; however, high-throughput methods for imaging live adult zebrafish had not been developed. Here, we describe protocols for building a light-emitting diode (LED) fluorescence macroscope and for using it to simultaneously image up to 30 adult animals that transgenically express a fluorescent protein, are transplanted with fluorescently labeled tumor cells or are tagged with fluorescent elastomers. These protocols show that the LED fluorescence macroscope is capable of distinguishing five fluorescent proteins and can image unanesthetized swimming adult zebrafish in multiple fluorescent channels simultaneously. The macroscope can be built and used for imaging within 1 day, whereas creating fluorescently labeled adult zebrafish requires 1 hour to several months, depending on the method chosen. The LED fluorescence macroscope provides a low-cost, high-throughput method to rapidly screen adult fluorescent zebrafish and it will be useful for imaging transgenic animals, screening for tumor engraftment, and tagging individual fish for long-term analysis.

High-throughput imaging of adult fluorescent zebrafish with an LED fluorescence macroscope.

Le poisson z&#xE8;bre constituent un mod&#xE8;le vert&#xE9;br&#xE9; utile pour l&#x26;#39;&#xE9;tude du d&#xE9;veloppement, le comportement, la maladie et le cancer. Un avantage majeur de poisson z&#xE8;bre est qu&#x26;#39;un grand nombre d&#x26;#39;animaux peut &#xEA;tre &#xE9;conomiquement utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;exp&#xE9;rimentation, mais, &#xE0; haut d&#xE9;bit pour le poisson-z&#xE8;bre m&#xE9;thodes d&#x26;#39;imagerie porno en direct n&#x26;#39;avait pas &#xE9;t&#xE9; mis au point. Ici, on d&#xE9;crit les protocoles pour la construction d&#x26;#39;une diode &#xE9;lectroluminescente (DEL) macroscope de fluorescence et pour l&#x26;#39;utiliser &#xE0; la fois sur l&#x26;#39;image jusqu&#x26;#39;&#xE0; 30 animal adulte que transg&#xE9;nique exprimant une prot&#xE9;ine fluorescente, sont marqu&#xE9;es par fluorescence transplant&#xE9; avec des cellules tumorales ou sont &#xE9;tiquet&#xE9;s avec des &#xE9;lastom&#xE8;res fluorescente. Ces protocoles montrent que le macroscope de fluorescence LED est capable de distinguer cinq prot&#xE9;ines fluorescentes et peut l&#x26;#39;image du poisson z&#xE8;bre non anesth&#xE9;si&#xE9; adultes nageant dans de multiples canaux fluorescentes simultan&#xE9;ment. Le macroscope peut &#xEA;tre construit et utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;imagerie dans un jour, alors que la cr&#xE9;ation de poisson z&#xE9;br&#xE9; adulte marqu&#xE9; par fluorescence n&#xE9;cessite 1 heure &#xE0; plusieurs mois, en fonction de la m&#xE9;thode choisie. Le macroscope LED fluorescence fournit un faible co&#xFB;t, &#xE0; haut d&#xE9;bit m&#xE9;thode pour d&#xE9;pister rapidement le poisson-z&#xE8;bre fluorescent et des adultes, il sera utile pour les animaux transg&#xE9;niques d&#x26;#39;imagerie, le d&#xE9;pistage de la prise de greffe tumorale, et le poisson marquage individuel pour analyse &#xE0; long terme.

&#xC0; haut d&#xE9;bit d&#x26;#39;imagerie de poisson-z&#xE8;bre fluorescent adultes avec un macroscope fluorescence LED

Zebrafish sind ein n&uuml;tzliches vertebrate Modell f&uuml;r die Erforschung der Entwicklung, Verhalten, Krankheiten und Krebs. Ein gro&szlig;er Vorteil der Zebrab&auml;rbling ist, dass die gro&szlig;e Zahl von Tieren wirtschaftlich f&uuml;r Experimente verwendet werden kann; Hochdurchsatz-Methoden f&uuml;r imaging Leben erwachsen Zebrafisch hatte jedoch nicht entwickelt worden. Hier beschreiben wir die Protokolle f&uuml;r den Aufbau einer Leuchtdiode (LED)-Fluoreszenz-Makroskop und f&uuml;r benutzen, um gleichzeitig bis zu 30 Erwachsene Tiere Bild, die transgenically express ein fluoreszierendes Protein, mit Leuchtstoff beschriftetem Tumorzellen transplantiert werden oder werden mit fluoreszierenden Elastomere gekennzeichnet. Diese Protokolle zeigen, dass die LED-Fluoreszenz-Macroscope geeignet seien f&uuml;nf fluoreszierende Proteine und unanesthetized Schwimmen Erwachsene Zebrafisch in mehrere fluoreszierende Kan&auml;le gleichzeitig Bild kann. Das Makroskop kann gebaut und verwendet f&uuml;r imaging innerhalb eines Tages, Erstellen von fluorescently beschriftete Erwachsenen Zebrafisch 1 Stunde bis zu mehreren Monaten, abh&auml;ngig von der gew&auml;hlten Methode erfordert werden. Die LED-Fluoreszenz-Macroscope bietet eine kosteng&uuml;nstige, Hochdurchsatz-Methode, um schnell Bildschirm Erwachsenen fluoreszierende Zebrafisch, und es wird f&uuml;r imaging transgene Tiere, screening f&uuml;r Tumor-Verteilung und Kennzeichnung der einzelnen Fische f&uuml;r langfristige Analyse hilfreich sein.

Hochdurchsatz-Bildgebung der Erwachsenen fluoreszierende Zebrafish mit einer LED-Fluoreszenz-Makroskop.

Zebrafish sono un modello di vertebrati utile per lo studio di sviluppo, comportamento, malattia e cancro. Dei vantaggi principali di zebrafish &egrave; che un gran numero di animali pu&ograve; essere economicamente utilizzato per la sperimentazione; Tuttavia, non erano stati sviluppati metodi di high-throughput per l&#39;imaging di zebrafish adulto dal vivo. Qui, descriviamo i protocolli per la costruzione di un macroscopio fluorescenza light - emitting diode (LED) e per il suo utilizzo a immagine contemporaneamente fino a 30 animali adulti che transgenically esprimono una proteina fluorescente, sono trapiantati con cellule tumorali fluorescente contrassegnati o sono contrassegnati con elastomeri fluorescenti. Questi protocolli mostrano che il macroscopio fluorescenza LED &egrave; in grado di distinguere cinque proteine fluorescenti e pu&ograve; contemporaneamente l&#39;immagine unanesthetized nuoto zebrafish adulto in pi&ugrave; canali fluorescente. Il macroscopio pu&ograve; essere costruito e utilizzato per l&#39;imaging entro 1 giorno, considerando che la creazione con l&#39;etichetta fluorescente zebrafish adulto richiede 1 ora per diversi mesi, a seconda del metodo scelto. Il macroscopio fluorescenza LED fornisce un basso costo, metodo high-throughput rapidamente schermo adulti fluorescente zebrafish e sar&agrave; utile per imaging animali transgenici, lo screening per l&#39;attecchimento del tumore e tagging singoli pesci per analisi a lungo termine.

Imaging high-throughput di zebrafish adulto fluorescente con un LED fluorescenza macroscopio.

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x9054;&#x3001;&#x884C;&#x52D5;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x3084;&#x764C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x304C;&#x7D4C;&#x6E08;&#x7684;&#x306B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x7528;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x5149;&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C9;&#xFF08;LED&#xFF09;&#x86CD;&#x5149;macroscope&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6700;&#x5927;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;30&#x306E;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x79FB;&#x690D;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;LED&#x86CD;&#x5149;macroscope&#x306F;&#x3001;5&#x3064;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x753B;&#x50CF;&#x7121;&#x9EBB;&#x9154;&#x30B9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4F5C;&#x6210;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x6570;&#x30F6;&#x6708;&#x306B;1&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;macroscope&#x306F;&#x3001;1&#x65E5;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; LED&#x86CD;&#x5149;macroscope&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x52D5;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x9B5A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3001;&#x4F4E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LED&#x86CD;&#x5149;Macroscope&#x6210;&#x4EBA;&#x86CD;&#x5149;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

Zebrafish&#xB294; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xD589;&#xB3D9;, &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xC554; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. Zebrafish&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC774;&#xC810;&#xC740; &#xC774;&#xB2E4; &#xB9CE;&#xC740; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC2E4;&#xD5D8;;&#xC5D0; &#xACBD;&#xC81C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC29;&#xBC95; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC131;&#xC778; zebrafish &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBE5B; &#xBC1C;&#xAD11; &#xB2E4;&#xC774;&#xC624;&#xB4DC; (LED) &#xD615;&#xAD11; macroscope&#xC744; &#xAD6C;&#xCD95; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; transgenically &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;, &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; &#xD0DC;&#xADF8; &#xD615;&#xAD11; &#xD0C4;&#xC131; &#xCCB4;&#xC640; &#xADF8; &#xCD5C;&#xB300; 30 &#xC131;&#xC778; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; LED &#xD615;&#xAD11; macroscope 5 &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; unanesthetized &#xC218;&#xC601; &#xC131;&#xC778; zebrafish &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD615;&#xAD11; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Macroscope &#xAD6C;&#xCD95; &#xD558; &#xACE0; &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC131;&#xC778; zebrafish &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xD544;&#xC694; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBA87; &#xAC1C;&#xC6D4;&#xC744; 1 &#xC2DC;&#xAC04; 1 &#xC77C; &#xC774;&#xB0B4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; LED &#xD615;&#xAD11; macroscope, &#xB192; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD654;&#xBA74; &#xC131;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; zebrafish&#xB97C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;, &#xC885;&#xC591; engraftment&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

LED &#xD615;&#xAD11; macroscope&#xC640; &#xC131;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; zebrafish&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC2A4;&#xB8E8;&#xD48B; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Zebrafish son un modelo vertebrado &#xFA;til para el estudio del desarrollo, el comportamiento, la enfermedad y el c&#xE1;ncer. Una de las principales ventajas del pez cebra es que un gran n&#xFA;mero de animales se puede utilizar econ&#xF3;micamente para la experimentaci&#xF3;n, sin embargo, m&#xE9;todos de alto rendimiento para el pez cebra im&#xE1;genes en vivo para adultos no se hab&#xED;an desarrollado. A continuaci&#xF3;n, describimos los protocolos para la construcci&#xF3;n de un diodo emisor de luz (LED) macroscopio de fluorescencia y para el uso de la imagen a la vez un m&#xE1;ximo de 30 animales adultos que transg&#xE9;nicamente expresan una prote&#xED;na fluorescente, se trasplantan con la etiqueta fluorescente las c&#xE9;lulas tumorales o con una etiqueta fluorescente de elast&#xF3;meros. Estos protocolos muestran que el macroscopio de fluorescencia LED es capaz de distinguir cinco prote&#xED;nas fluorescentes y pueden tomar im&#xE1;genes sin anestesia adultos de pez cebra de nataci&#xF3;n en varios canales al mismo tiempo fluorescentes. El macroscopio puede ser construido y utilizado para obtener im&#xE1;genes de menos de 1 d&#xED;a, mientras que la creaci&#xF3;n de pez cebra marcada con fluorescencia adulto requiere 1 hora a varios meses, dependiendo del m&#xE9;todo elegido. El macroscopio de fluorescencia proporciona un LED de bajo costo y alto rendimiento m&#xE9;todo de cribado r&#xE1;pido pez cebra fluorescente de adultos y que ser&#xE1; &#xFA;til para obtener im&#xE1;genes de animales transg&#xE9;nicos, la detecci&#xF3;n de injerto del tumor, y el pescado etiquetado individual para an&#xE1;lisis a largo plazo.

Sali Liu

Department of Molecular Pathology,
Massachusetts General Hospital,
Department of Molecular Pathology, Massachusetts General Hospital

Harvard Medical School

Quantifying the Frequency of Tumor-propagating Cells Using Limiting Dilution Cell Transplantation in Syngeneic Zebrafish

Sali Liu

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular Pathology,Massachusetts General Hospital,Department of Molecular Pathology, Massachusetts General Hospital

Harvard Medical School

Quantifying the Frequency of Tumor-propagating Cells Using Limiting Dilution Cell Transplantation in Syngeneic Zebrafish

Department of Molecular Pathology,
Massachusetts General Hospital,
Department of Molecular Pathology, Massachusetts General Hospital