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Blood Collection from the American Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

The horseshoe crab has the best-characterized immune system of any long-lived invertebrate.  The study of immunity in horseshoe crabs has been facilitated ...

Hunter College of CUNY

&#x5FAA;&#x73AF;&#x9C8E; amebocytes &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x804C;&#x80FD;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x5BF9;&#x5F71;&#x54CD;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x5728;&#x6536;&#x5230;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9C8E; amebocytes &#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x5C1A;&#x672A;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x5145;&#x5206;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x5BF9;&#x5176;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x800C;&#x8F83;&#x65E9;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x6765;&#x81EA;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C; (TEM) &#x7684;&#x8584;&#x7247;&#x7684;&#x4E3A;&#x6570;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5219;&#x4FDD;&#x7559;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x73B0;&#x5728;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x8C03;&#x67E5; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5728;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B; amebocytes &#x548C;&#x5927;&#x578B;&#x8BD5;&#x5242;&#x4EBA;&#x53E3;&#x524D;&#x548C;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Anti-tubulin &#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x793A;&#x5FAE;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x6700;&#x8349;&#x7A3F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x5FAE;&#x672C;&#x540C;&#x662F;&#x692D;&#x7403;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x5E26; (MB)&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4EA6;&#x53D1;&#x73B0;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x6216;&#x5C16;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#xFF0C;&#x542B;&#x6709;&#x6697;&#x793A;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3001; &#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x5B89;&#x6392;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5FB7;&#x514B;&#x8428;&#x65AF;&#x5DDE;&#x7EA2; phalloidin &#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x4F1A;&#x8BA1; MB &#x548C;&#x9897;&#x7C92;&#x5206;&#x79BB;&#x8840;&#x6D46;&#x819C;&#x6240;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#x8584;&#x7247;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x60F3;&#x7684;&#x8349;&#x7A3F; amebocytes F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5BCC;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C; MB &#x7EF4;&#x62A4;&#x652F;&#x6301;&#x65E9;&#x671F;&#x673A;&#x578B;&#x62FC;&#x5408;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F62;&#x6001;&#x7531;&#x5BF9;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#x65BD;&#x52A0;&#x538B;&#x529B;&#x3002;&#x5F62;&#x72B6;&#x8F6C;&#x6362;&#x540E;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x5C16;&#x548C;&#x4F20;&#x64AD; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5916;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6539;&#x4E3A;&#x626D;&#x66F2;&#x3001; &#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x5173;&#x8054;&#x7A97;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6700;&#x7EC8;&#x6210;&#x4E3A;&#x53EF;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684; mb&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x524D;&#x548C;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x529F;&#x80FD;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x548C;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x9C8E;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x66F4;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x4EE3;&#x8868;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x524D;&#x8EAB;&#x3002;

&#x9C8E; amebocytes &#x524D;&#x548C;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF1A; &#x6BD4;&#x8F83;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

One of the major functions of circulating Limulus amebocytes is to effect blood coagulation upon receipt of appropriate signals. However, the hypothesis that Limulus amebocytes are fundamentally similar to vertebrate thrombocytes and platelets has not been tested sufficiently in previous studies of their cytoskeletal organization. Whereas the earlier data were derived from transmission electron microscopy (TEM) of thin sections of a limited number of cells, improved fluorescence labeling methods that retain cell morphology have now enabled us to survey F-actin and microtubule organization in intact individual amebocytes and in large amebocyte populations pre- and post-activation. Anti-tubulin immunofluorescence showed the marginal band (MB) of microtubules to be ellipsoidal in most unactivated cells, with essentially no other microtubules present. However, minor subpopulations of cells with discoidal or pointed shape, containing corresponding arrangements of microtubules suggestive of morphogenetic intermediates, were also observed. Texas-red phalloidin labeled an F-actin-rich cortex in unactivated amebocytes, accounting for MB and granule separation from the plasma membrane as visualized in TEM thin sections, and supporting earlier models for MB maintenance of flattened amebocyte morphology by pressure against a cortical layer. Shape transformation after activation by bacterial lipopolysaccharide was attributable principally to spiky and spreading F-actin in outer cell regions, with the MB changing to twisted, nuclei-associated forms and eventually becoming unrecognizable. These major pre- and post-activation cytoskeletal features resemble those of platelets and non-mammalian vertebrate thrombocytes, supporting recognition of the Limulus amebocyte as a representative evolutionary precursor of more specialized clotting cell types.

Cytoskeletal organization of limulus amebocytes pre- and post-activation: comparative aspects.

Une des principales fonctions de am&#x153;bocytes Limulus circulant est d&#x26;#39;effectuer la coagulation du sang lors de la r&#xE9;ception des signaux appropri&#xE9;s. Toutefois, l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle am&#x153;bocytes Limulus sont fondamentalement similaires &#xE0; vert&#xE9;br&#xE9;s thrombocytes et les plaquettes n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; suffisamment test&#xE9;es dans des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures de leur organisation du cytosquelette. Consid&#xE9;rant que les donn&#xE9;es ant&#xE9;rieures ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;riv&#xE9;es de la microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission (MET) de lames minces d&#x26;#39;un nombre limit&#xE9; de cellules, l&#x26;#39;am&#xE9;lioration des m&#xE9;thodes d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage de fluorescence qui conservent la morphologie des cellules ont permis d&#x26;#39;&#xE9;tudier la F-actine et l&#x26;#39;organisation des microtubules dans intactes am&#x153;bocytes individuels et dans les grandes populations Amebocyte pr&#xE9;-et post-activation. Anti-tubuline immunofluorescence a montr&#xE9; la bande marginale (MB) des microtubules &#xEA;tre ellipso&#xEF;dale dans les cellules les plus inactiv&#xE9;es, avec pratiquement pas de microtubules d&#x26;#39;autres pr&#xE9;sents. Toutefois, les sous-populations de cellules avec des mineures de forme disco&#xEF;de ou pointus, contenant des dispositions correspondantes de microtubules &#xE9;vocateurs d&#x26;#39;interm&#xE9;diaires morphog&#xE9;n&#xE9;tiques, ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es. Texas-red phallo&#xEF;dine marqu&#xE9;e d&#x26;#39;un cortex d&#x26;#39;actine-F-riche en am&#x153;bocytes non activ&#xE9;es, ce qui repr&#xE9;sente Mo et la s&#xE9;paration des granules &#xE0; partir de la membrane plasmique comme visualis&#xE9; dans TEM lames minces, et en soutenant des mod&#xE8;les ant&#xE9;rieurs pour l&#x26;#39;entretien de la morphologie Mo amibocytes aplatis par la pression contre une couche corticale . Transformation de forme apr&#xE8;s l&#x26;#39;activation par lipopolysaccharide bact&#xE9;rien &#xE9;tait principalement attribuable &#xE0; &#xE9;pi et la diffusion de la F-actine dans les r&#xE9;gions externes des cellules, avec le passage &#xE0; MB tordus, noyaux-formes associ&#xE9;es et &#xE9;ventuellement de devenir m&#xE9;connaissable. Ces grands pr&#xE9;-et post-activation du cytosquelette caract&#xE9;ristiques ressemblent &#xE0; celles des plaquettes et des thrombocytes vert&#xE9;br&#xE9;s non mammif&#xE8;res, en soutenant la reconnaissance de la amibocytes de limule comme un pr&#xE9;curseur de l&#x26;#39;&#xE9;volution de repr&#xE9;sentant plus de types de cellules sp&#xE9;cialis&#xE9;es de la coagulation.

Organisation du cytosquelette d&#x26;#39;am&#x153;bocytes Limulus pr&#xE9;-et post-activation: Aspects comparatifs

Zytoskelett-Organisation von Limulus Am&#xF6;bocyten Pre-und Post-Aktivierung: vergleichende Aspekte.

Una delle funzioni principali di amebociti di Limulus in circolazione &egrave; per la coagulazione del sangue effetto al ricevimento dei segnali appropriati. Tuttavia, l&#39;ipotesi che amebociti di Limulus sono fondamentalmente simili a piastrine e trombociti vertebrati non &egrave; stato testato sufficientemente in precedenti studi della loro organizzazione del citoscheletro. Considerando che i dati precedenti sono stati derivati da microscopia elettronica della trasmissione (TEM) di sezioni sottili di un numero limitato di cellule, metodi d&#39;etichettatura migliorata fluorescenza che conservano la morfologia cellulare ora hanno permesso noi di indagine F-actina e organizzazione dei microtubuli in intatti amebociti individuale ed in popolazioni grande metodo pre- e post-activation. Immunofluorescenza anti-tubulin ha mostrato la banda marginale (MB) di microtubuli per essere ellissoidale in cellule non pi&ugrave; attivate, con essenzialmente no altri microtubuli presenti. Tuttavia, minore sottopopolazioni di cellule con forma trilobozoi o appuntito, contenenti le corrispondenti disposizioni dei microtubuli suggestivi morfogenetica intermedi, sono state osservate. Phalloidin rosso Texas etichettato una corteccia di F-actina-ricco in amebociti unactivated, contabilit&agrave; per MB e granulo separazione dalla membrana del plasma come visualizzato in sezioni sottili di TEM, e supporto modelli precedenti di manutenzione MB di appiattite morfologia metodo di pressione contro uno strato corticale. Trasformazione forma dopo l&#39;attivazione di lipopolisaccaride batterica &egrave; stato attribuibile principalmente a irti e diffusione F-actina in regioni esterne delle cellule, con il MB cambiando forme contorte, nuclei associati e alla fine diventare irriconoscibile. Queste importanti caratteristiche citoscheletriche pre e post-activation somigliano a quelli delle piastrine e dei trombociti vertebrati mammiferi, sostenendo il riconoscimento del metodo Limulus come un precursore evolutivo rappresentativo dei tipi di cella coagulazione pi&ugrave; specializzati.

Organizzazione del citoscheletro di amebociti di limulus pre e post-activation: aspetti comparativi.

&#x5FAA;&#x74B0;&#x30AB;&#x30D6;&#x30C8;&#x30AC;&#x30CB;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;1&#x3064;&#x306F;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x6642;&#x306B;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30D6;&#x30C8;&#x30AC;&#x30CB;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x3092;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6570;&#x306E;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;TEM&#xFF09;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x5927;&#x578B;&#x306E;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8840;&#x7403;&#x96C6;&#x56E3;&#x30D7;&#x30EA;&#xB7;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x6297;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x9650;&#x754C;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#xFF08;MB&#xFF09;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x6955;&#x5186;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x6C7A;&#x3081;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5186;&#x76E4;&#x72B6;&#x306E;&#x5C16;&#x3063;&#x305F;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x306A;&#x4E9C;&#x96C6;&#x56E3;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B5;&#x30B9;&#x8D64;&#x30D5;&#x30A1;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B8;&#x30F3;&#x306F;TEM&#x8584;&#x7247;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x304B;&#x3089;MB&#x306E;&#x4F1A;&#x8A08;&#x3068;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3001;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3092;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C64;&#x306B;&#x200B;&#x200B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x5727;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5E73;&#x3089;&#x306B;&#x8840;&#x7403;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;MB&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x5909;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x3068;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3068;MB&#x304C;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x3001;&#x6838;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5E83;&#x3081;&#x308B;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30EA;&#xB7;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5C02;&#x9580;&#x7684;&#x306A;&#x51DD;&#x56FA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30D6;&#x30C8;&#x30AC;&#x30CB;&#x306E;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30D6;&#x30C8;&#x30AC;&#x30CB;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30EA;&#x3068;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#xFF1A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5074;&#x9762;

Limulus amebocytes &#xC21C;&#xD658;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC989;&#xC2DC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0;&#xB97C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Limulus amebocytes&#xB294; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xCC99;&#xCD94; &#xC751;&#xC9D1;&#xACFC; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xAC00;&#xC124; cytoskeletal &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TEM) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xC758; &#xC587;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC870;&#xC0AC; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBCC4; amebocytes &#xBC0F; &#xD070; amebocyte &#xC778;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xC804; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xC2DC; microtubule &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC774;&#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Anti-tubulin &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xD600; &#xB2E4;&#xB978; microtubules &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xAC00;&#xC7A5; unactivated &#xC140;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xC6D0; &#xC218; microtubules &#xD55C;&#xACC4; &#xBC34;&#xB4DC; (MB)&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, discoidal &#xB610;&#xB294; &#xBFB0;&#xC871;&#xD55C; &#xBAA8;&#xC591;, microtubules &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xC554;&#xC2DC;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xACC4;&#xC57D;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C; &#xBD80;&#xBD84; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD14D;&#xC0AC;&#xC2A4; &#xB808;&#xB4DC; phalloidin &#xB77C;&#xB294; &#xD3B8; &#xC587;&#xC740; &#xB2E8;&#xC6D0;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC73C;&#xB85C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; MB&#xC640;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD68C;&#xACC4; unactivated amebocytes F &#xB9D0;&#xB77C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC774;&#xC804; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; MB &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8; &#xCE35;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC555;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; amebocyte &#xD615;&#xD0DC; &#xACB0;&#xD569;. &#xC138;&#xADE0;&#xC131; lipopolysaccharide&#xAC00; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xD6C4; &#xC170;&#xC774;&#xD504; &#xBCC0;&#xD658; &#xCE7C; &#xB0A0; &#xB2EC;&#xB9B0;&#xC640; &#xD655;&#xC0B0; F-&#xB9D0;&#xB77C; &#xC678;&#xBD80; &#xC140; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAF2C;&#xC778;, &#xD575; &#xAD00;&#xB828; &#xC591;&#xC2DD;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xAD6D; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB418;&#xAE30; mb&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0AC;&#xC804; &#xAC8C;&#xC2DC; cytoskeletal &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2EE;&#xC740; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xBC0F; &#xC751;&#xACE0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC804;&#xBB38;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xC9C4;&#xD654; &#xC804;&#xC870;&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD; Limulus amebocyte&#xC758; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBE44; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCC99;&#xCD94; &#xC751;&#xC9D1;.

Cytoskeletal limulus amebocytes &#xC0AC;&#xC804; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131;: &#xBE44;&#xAD50; &#xCE21;&#xBA74;.

Una de las principales funciones de amebocitos Limulus circulantes es para efectuar la coagulaci&#xF3;n de la sangre tras la recepci&#xF3;n de se&#xF1;ales apropiadas. Sin embargo, la hip&#xF3;tesis de que amebocitos Limulus son fundamentalmente similares a la vertebraci&#xF3;n de los trombocitos y las plaquetas no ha sido lo suficientemente probado en estudios previos de la organizaci&#xF3;n del citoesqueleto. Considerando que los datos anteriores se obtuvieron a partir de microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n (TEM) de secciones delgadas de un n&#xFA;mero limitado de c&#xE9;lulas, la mejora de los m&#xE9;todos de etiquetado de fluorescencia que retienen la morfolog&#xED;a celular han permitido para inspeccionar la F-actina y la organizaci&#xF3;n de microt&#xFA;bulos en intactas amebocitos individuales y en gran las poblaciones de amebocitos de pre-y post-activaci&#xF3;n. Anti-tubulina inmunofluorescencia mostr&#xF3; la banda marginal (MB) de microt&#xFA;bulos ser elipsoidal en c&#xE9;lulas m&#xE1;s unactivated, esencialmente sin microt&#xFA;bulos presentes otros. Sin embargo, las subpoblaciones de c&#xE9;lulas peque&#xF1;as con forma discoidal o en punta, que contiene disposiciones correspondientes de los microt&#xFA;bulos sugieran la presencia de intermediarios morfogen&#xE9;ticos, tambi&#xE9;n fueron observados. Texas-phalloidin etiqueta roja una corteza F-actina-ricos en amebocitos no activados, que representan el MB y la separaci&#xF3;n de los gr&#xE1;nulos de la membrana plasm&#xE1;tica como se visualiza en el TEM secciones delgadas, y el apoyo a los modelos anteriores para el mantenimiento de la morfolog&#xED;a aplanada MB amebocitos por la presi&#xF3;n en contra de una capa cortical . Transformaci&#xF3;n de la forma despu&#xE9;s de la activaci&#xF3;n por lipopolisac&#xE1;rido bacteriano se debi&#xF3; principalmente a la punta y la difusi&#xF3;n de la F-actina en las regiones exteriores de c&#xE9;lulas, con el MB de cambiar a los n&#xFA;cleos asociados retorcidas, las formas y, eventualmente, convertirse en irreconocible. Estos importantes antes y despu&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de las caracter&#xED;sticas del citoesqueleto se asemejan a los de las plaquetas y no mam&#xED;feros vertebrados trombocitos que apoye el reconocimiento de la amebocitos de Limulus como un precursor evolutivo de la representante de m&#xE1;s tipos de c&#xE9;lulas especializadas de la coagulaci&#xF3;n.

Mara Conrad

Department of Biological Sciences

Hunter College of CUNY

Blood Collection from the American Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

Mara Conrad

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Hunter College of CUNY

Blood Collection from the American Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

Department of Biological Sciences