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Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

Functional inactivation of gene expression in mammalian cells is crucial for the study of the contribution of a protein of interest to various ...

Technion - Israel Institute of Technology

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x4F11;&#x6B62;&#x671F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E; S &#x6BB5;&#x968E;&#x306B; G0 &#x3068; G1 &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;S &#x671F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x76CA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E1A&#x3001;E1B&#x3001;E4 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E1A &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 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Adenovirus infection of quiescent cells induces transition from G0 or G1 into the S phase of the cell cycle and allows cellular proliferation. This is beneficial for the virus since cells in S phase provide optimal conditions for viral replication. Adenovirus E1A, E1B and E4 gene products contribute to cell cycle deregulation. E1A proteins inactivate the pRb checkpoint, allowing the E2F transcription factor to activate genes involved in nucleotide metabolism and DNA replication, which are required in S phase. E1A also interacts with transcriptional modulators, including histone acetyltransferases, histone deacetylases, and other chromatin remodeling factors. These interactions affect transcription of several cellular and viral genes, some of which are involved in cell cycle regulation. Cell cycle deregulation by E1A results in stabilization and accumulation of p53. To prevent cell cycle arrest and apoptosis that would be triggered by p53, the adenovirus E1B and E4orf6 gene products employ various mechanisms to inactivate the tumor suppressor. Additional E4 gene products also interact with and modulate cell cycle regulators. Cell cycle checkpoints targeted by adenovirus proteins are often compromised in human tumors as well. Thus, understanding the interactions between adenovirus and the cell cycle has facilitated the generation of adenovirus mutants, which can replicate only in cells with inactivated checkpoints. Such "oncolytic" viruses are being tested for their ability to specifically replicate in and lyse cancer cells.

Adenovirus and cell cycle control.

Infection par ad&eacute;novirus de cellules quiescentes induit une transition de G0 ou G1 &agrave; la phase S du cycle cellulaire et permet la prolif&eacute;ration cellulaire. Cela est b&eacute;n&eacute;fique pour le virus &eacute;tant donn&eacute; que les cellules en phase S offrent des conditions optimales pour la r&eacute;plication virale. Produits de g&egrave;ne E1A de l&#39;ad&eacute;novirus, E1B et E4 contribuent &agrave; la d&eacute;r&eacute;gulation du cycle cellulaire. Les prot&eacute;ines E1A inactivent le checkpoint de pRb, ce qui permet du facteur de transcription E2F activer des g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans le m&eacute;tabolisme des nucl&eacute;otides et de r&eacute;plication de l&#39;ADN, qui sont n&eacute;cessaires dans la phase S. E1A interagit &eacute;galement avec modulateurs transcriptionnels, y compris les histones ac&eacute;tyltransf&eacute;rases, histones d&eacute;sac&eacute;tylases et autre facteurs de remodelage de la chromatine. Ces interactions affectent la transcription de plusieurs g&egrave;nes virus et cellulaires, dont certains sont impliqu&eacute;s dans la r&eacute;gulation du cycle cellulaire. D&eacute;r&eacute;gulation du cycle cellulaire par E1A r&eacute;sultats dans la stabilisation et l&#39;accumulation de p53. Pour emp&ecirc;cher l&#39;arr&ecirc;t du cycle cellulaire et l&#39;apoptose qui pourrait &ecirc;tre d&eacute;clench&eacute; par p53, l&#39;ad&eacute;novirus E1B et les produits du g&egrave;ne E4orf6 emploient divers m&eacute;canismes pour inactiver le suppresseur de tumeur. Produits du g&egrave;ne E4 suppl&eacute;mentaires &eacute;galement interagissent avec et de modulent les r&eacute;gulateurs du cycle cellulaire. Points de contr&ocirc;le de cycle cellulaire cibl&eacute;s par les prot&eacute;ines de l&#39;ad&eacute;novirus sont souvent compromises dans les tumeurs humaines. Ainsi, la compr&eacute;hension des interactions entre l&#39;ad&eacute;novirus et le cycle cellulaire a facilit&eacute; la g&eacute;n&eacute;ration de mutants d&#39;ad&eacute;novirus, qui peuvent se r&eacute;pliquer uniquement dans les cellules avec des points de contr&ocirc;le inactiv&eacute;s. Ces virus &laquo; oncolytiques &raquo; sont test&eacute;s pour leur capacit&eacute; &agrave; reproduire en sp&eacute;cifiquement et &agrave; lyser les cellules canc&eacute;reuses.

L&#39;ad&eacute;novirus et le contr&ocirc;le du cycle cellulaire.

Adenovirus-Infektion der Ruhezustand Zellen induziert &Uuml;bergang von G0 oder G1 in die S-Phase des Zellzyklus und zellul&auml;re Vermehrung erm&ouml;glicht. Dies ist vorteilhaft f&uuml;r das Virus, da Zellen in der S-Phase sorgen f&uuml;r optimale Bedingungen f&uuml;r die virale Replikation. Adenovirus E1A, E1B und E4 Gen-Produkte tragen zur Deregulierung des Zellzyklus. E1a Proteine inaktivieren pRb Checkpoint, wodurch den Transkriptionsfaktor E2F zur Aktivierung von Genen, die in Nukleotid-Stoffwechsel und DNA-Replikation, die in S-Phase ben&ouml;tigt werden. E1a interagiert auch mit transkriptionelle Modulatoren, Histon Acetyltransferases Histon Deacetylases und andere Faktoren Umbau Chromatin. Diese Interaktionen beeinflussen Transkription mehrere zellul&auml;re und virale Gene, von die einige in Zellzyklusregulation beteiligt sind. Zellzyklus Deregulierung von E1A f&uuml;hrt zu Stabilisierung und Akkumulation von p53. Um zu verhindern, Verhaftung des Zellzyklus und Apoptose, die durch p53 ausgel&ouml;st werden w&uuml;rde, setzen die Adenoviren E1B und E4orf6 Genprodukten verschiedene Mechanismen, um die Tumorsuppressor inaktivieren. Zus&auml;tzliche E4-Genprodukte auch interagieren mit und Regulatoren des Zellzyklus zu modulieren. Zellzyklus Checkpoints gezielt durch Adenoviren Proteine sind h&auml;ufig in menschlichen Tumoren sowie beeintr&auml;chtigt. Daher hat die Interaktionen zwischen Adenovirus und Zellzyklus verstanden die Generation der Adenovirus-Mutanten, erleichtert, die nur in Zellen mit inaktivierten Checkpoints replizieren kann. Solche &quot;Onkolytische&quot;-Viren sind f&uuml;r ihre F&auml;higkeit, speziell replizieren und l&ouml;sen Krebszellen getestet.

Adenovirus und Zellzyklus-Kontrolle.

Infezione da Adenovirus di cellule quiescenti induce la transizione da G0 o G1 alla fase S del ciclo cellulare e consente la proliferazione cellulare. Ci&ograve; &egrave; vantaggioso per il virus, dato che le cellule in fase S offrono condizioni ottimali per la replicazione virale. Prodotti del gene dell&#39;adenovirus E1A, E1B ed E4 contribuiscono alla deregolazione del ciclo cellulare. E1A proteine inattivano il checkpoint pRb, permettendo che il fattore di trascrizione E2F attivare i geni coinvolti nel metabolismo del nucleotide e la replicazione del DNA, che sono richiesti nella fase S. E1A interagisce anche con modulatori trascrizionali, istone acetiltransferasi, deacetylases dell&#39;istone e altre fattori di rimodellamento di cromatina. Queste interazioni possono influenzare la trascrizione di numerosi geni cellulari e virali, alcuni dei quali sono coinvolti nella regolazione del ciclo cellulare. Deregolazione del ciclo cellulare da E1A risultati nella stabilizzazione e l&#39;accumulo di p53. Per evitare l&#39;arresto del ciclo cellulare e apoptosi che avrebbero innescato da p53, l&#39;adenovirus E1B e prodotti del gene E4orf6 impiegano vari meccanismi per inattivare il soppressore del tumore. Ulteriori prodotti del gene E4 anche interagiscano con e modulano i regolatori del ciclo cellulare. Checkpoint ciclo delle cellule bersagliato di proteine adenovirus sono spesso compromesse in tumori umani pure. Cos&igrave;, la comprensione delle interazioni tra adenovirus e il ciclo cellulare ha facilitato la generazione di mutanti dell&#39;adenovirus, che pu&ograve; replicare solo nelle cellule con checkpoint inattivato. Tali virus &quot;oncolytic&quot; sono essere testati per la loro capacit&agrave; specificamente replicare e lisare cellule tumorali.

Adenovirus e controllo del ciclo cellulare.

&#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xC140;&#xC758; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; G0 &#xB610;&#xB294; G1 &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC758; S &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xC804;&#xD658; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC140; S &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E1A/E1B, E4 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;. E1A &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; E2F &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; S &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xB300;&#xC0AC;&#xC640; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; pRb &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;. E1A &#xB610;&#xD55C; transcriptional &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;, histone acetyltransferases, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylases &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; chromatin &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC911; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. E1A &#xACB0;&#xACFC; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xBC0F; p53&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD574;&#xC81C;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAC80;&#xAC70;&#xC640; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB418;&#xB294; apoptosis&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30;&#xB97C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E1B &#xBC0F; E4orf6 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;. &#xCD94;&#xAC00; E4 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC870;&#xC808;&#xAE30;&#xB97C; &#xC870;&#xC808;. &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xC0AC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xBCF5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &quot;oncolytic&quot; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lyse &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC911;&#xC778;.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Infecci&oacute;n del adenovirus de c&eacute;lulas quiescentes induce la transici&oacute;n de G0 o G1 a la fase S del ciclo celular y permite la proliferaci&oacute;n celular. Esto es beneficioso para el virus, ya que las c&eacute;lulas en fase S proporcionan las condiciones &oacute;ptimas para la replicaci&oacute;n viral. Productos del gen E1A de adenovirus y E1B E4 contribuyen a la desregulaci&oacute;n del ciclo celular. Prote&iacute;nas E1A inactivan el puesto de control de pRb, permitiendo que el factor de transcripci&oacute;n E2F activar genes implicados en el metabolismo de nucle&oacute;tidos y replicaci&oacute;n del ADN, que son requeridos en la fase S. E1A tambi&eacute;n interact&uacute;a con moduladores transcripcionales, incluyendo histona Acetiltransferasas histonas deacetilasas y otra factores de remodelaci&oacute;n de la cromatina. Estas interacciones afectan la transcripci&oacute;n de varios genes celulares y virales, algunas de las cuales est&aacute;n implicados en la regulaci&oacute;n del ciclo celular. Desregulaci&oacute;n del ciclo celular por E1A resultados en la estabilizaci&oacute;n y la acumulaci&oacute;n de p53. Para evitar la detenci&oacute;n del ciclo celular y apoptosis que se activar&aacute; por p53, el adenovirus E1B y productos del gen E4orf6 emplean diversos mecanismos para inactivar el supresor del tumor. Productos adicionales de gene E4 tambi&eacute;n interact&uacute;an con y modulan los reguladores del ciclo celular. A menudo est&aacute;n en peligro puestos de control de ciclo celular por prote&iacute;nas de adenovirus en tumores humanos as&iacute;. As&iacute;, la comprensi&oacute;n de las interacciones entre adenovirus y el ciclo celular ha facilitado la generaci&oacute;n de mutantes de adenovirus, que puede replicar solamente en c&eacute;lulas con puestos de control inactivadas. Estos virus &quot;oncol&iacute;ticos&quot; est&aacute;n siendo analizados por su capacidad de replicar y lisar las c&eacute;lulas cancerosas.

Adenovirus y control del ciclo celular.

RR &#x5236;&#x5EA6;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x672A;&#x77E5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x5728;&#x4E8E;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x627E;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7531;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;RR &#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x76F8;&#x8F85;&#x76F8;&#x6210;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x9274;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528; Ras &#x62DB;&#x8058;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6; PP2A B55 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

The RRS system facilitated the discovery of hitherto unknown interactions with the PP2A-B55 subunit. The advantages of the system lie in its ability to identify interactions that may not be detected by traditional yeast two-hybrid systems. The RRS can thus provide a complementary genetic approach to the identification of protein-protein interactions.

Using the Ras Recruitment System to identify PP2A-B55-interacting proteins.

Le syst&egrave;me d&#39;enregistrements de ressources a facilit&eacute; la d&eacute;couverte de l&#39;inconnu interactions avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55. Les avantages du syst&egrave;me r&eacute;sident dans sa capacit&eacute; &agrave; identifier les interactions qui ne sont pas d&eacute;tect&eacute;es par les syst&egrave;mes de deux-hybride de levure traditionnelle. Les enregistrements de ressources peuvent ainsi fournir une approche compl&eacute;mentaire de g&eacute;n&eacute;tique &agrave; l&#39;identification d&#39;interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine.

En utilisant le syst&egrave;me de recrutement de Ras pour identifier des prot&eacute;ines interagissant avec PP2A-B55.

Das RRS-System erleichtert die Entdeckung der bisher unbekannten Wechselwirkungen mit der PP2A-B55-Untereinheit. Die Vorteile des Systems liegen in ihrer F&auml;higkeit, Interaktionen zu identifizieren, die nicht durch traditionelle Hefe-zwei-Hybrid-Systeme nachgewiesen werden kann. Die RRS bieten somit einen erg&auml;nzenden genetischen Ansatz zur Identifizierung von Protein-Protein Interaktionen.

Verwenden die Ras-Rekrutierungssystem, PP2A-B55-Interaktion Proteine zu identifizieren.

Il sistema RRS ha facilitato la scoperta delle interazioni finora sconosciute con la subunit&agrave; PP2A-B55. I vantaggi del sistema si trovano nella sua capacit&agrave; di identificare le interazioni che non possono essere rilevate dai sistemi di due ibridi di lievito tradizionale. La RRS &egrave; in grado di fornire cos&igrave; un approccio genetico complementare per l&#39;identificazione delle interazioni proteina-proteina.

Utilizzando il sistema di reclutamento Ras per identificare le proteine interagenti PP2A-B55.

RR &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x5F93;&#x6765;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RR &#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ras &#x52DF;&#x96C6;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PP2A B55 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RR &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; PP2A-B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAE4C;&#xC9C0;&#xB294; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC9D3;&#xB9D0;. RR &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC644; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ras &#xCC44;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; PP2A B55 &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xBCC4;.

El sistema RRS facilit&oacute; el descubrimiento de las interacciones hasta ahora desconocidas con la subunidad PP2A-B55. Las ventajas del sistema radican en su capacidad para identificar las interacciones que no puedan ser detectadas por los sistemas de dos h&iacute;bridos de levadura tradicional. As&iacute;, los RR pueden proporcionar un enfoque gen&eacute;tico complementario a la identificaci&oacute;n de las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na.

Utilizando el sistema de contrataci&oacute;n de Ras para identificar prote&iacute;nas PP2A-B55-interactuando.

&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A (PP2A&#xFF09; &#x662F;&#x5176;&#x4E09;&#x8054;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x4E0D;&#x5305;&#x62EC;&#x811A;&#x624B;&#x67B6; A &#x4E9A;&#x57FA;&#x3001; &#x50AC;&#x5316; C &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x76D1;&#x7BA1; B &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x9176; (B&#x3001; B &#x548C; B &#39;)&#x3002;E4orf4 &#x86CB;&#x767D;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5C06;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; B &#x6216; B &#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E; PP2A &#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4E0E;&#x79EF;&#x6781;&#x7684; PP2A &#x4EA4;&#x4E92;&#x542B; B &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x6216;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;Cdc55&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x902E;&#x6355;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;Cdc55 &#x968F;&#x673A;&#x8BF1;&#x53D8;&#x7C73;&#x4F4E;&#x4FDD;&#x771F; PCR &#x6269;&#x589E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5931;&#x53BB;&#x80FD;&#x529B;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x53F7; E4orf4 &#x7684; Cdc55 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x88AB;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x6240;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6291;&#x5236; Cdc55 &#x4E0E; E4orf4&#xFF0C;&#x6216;&#x8005;&#x4E0E; PP2A &#x4EA4;&#x6D41;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x6216;&#x4E24;&#x8005;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6CDB;&#x51FD;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED1;&#x5B9A; Tpd3&#x3001; &#x9175;&#x6BCD; A &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Cdc55 tpd3Delta &#x80CC;&#x666F;&#x4E0B;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x9ED1;&#x8179;&#x3002;&#x672C;&#x534F;&#x4F1A;&#x8981;&#x6C42; C &#x4E9A;&#x57FA;&#x7FA7;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x4E0E; Cdc55 Tpd3 &#x5982;&#x679C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x7EF4;&#x6301;&#x90E8;&#x5206;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E3B;&#x8F74;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;

Cdc55 &#x51FD;&#x6570;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E3B;&#x8F74;&#x68C0;&#x67E5;&#x7AD9;&#x548C;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x811A;&#x624B;&#x67B6; A/Tpd3 &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x9AD8;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Protein serine/threonine phosphatase 2A (PP2A) is a multifunctional enzyme whose trimeric form consists of a scaffolding A subunit, a catalytic C subunit, and one of several regulatory B subunits (B, B', and B''). The adenovirus E4orf4 protein associates with PP2A by directly binding the B or B' subunits. An interaction with an active PP2A containing the B subunit, or its homologue in yeast, Cdc55, is required for E4orf4-induced apoptosis in mammalian cells and for induction of growth arrest in Saccharomyces cerevisiae. In this work, Cdc55 was randomly mutagenized by low-fidelity PCR amplification, and Cdc55 mutants that lost the ability to transduce the E4orf4 toxic signal in yeast were selected. The mutations obtained by this protocol inhibited the association of Cdc55 with E4orf4, or with the PP2A-AC subunits, or both. Functional analysis revealed that a mutant that does not bind Tpd3, the yeast A subunit, as well as wild type Cdc55 in a tpd3Delta background, can form a heterodimer with the catalytic subunit. This association requires C subunit carboxyl methylation. The residual phosphatase activity associated with Cdc55 in the absence of Tpd3 is sufficient to maintain a partially active spindle checkpoint and to prevent cytokinesis defects.

The scaffolding A/Tpd3 subunit and high phosphatase activity are dispensable for Cdc55 function in the Saccharomyces cerevisiae spindle checkpoint and in cytokinesis.

Prot&eacute;ine s&eacute;rine/thr&eacute;onine phosphatase 2 a (PP2A) est une enzyme multifonctionnelle dont la forme trim&egrave;re se compose d&#39;une sous-unit&eacute; d&#39;&eacute;chafaudage A une sous-unit&eacute; C et celui de plusieurs sous-unit&eacute;s r&eacute;gulatrices de B (B et B&#39; B &#39;). L&#39;adenovirus E4orf4 prot&eacute;ine associe &agrave; PP2A en liant directement les sous-unit&eacute;s de la B ou B&#39;. Une interaction avec un PP2A active contenant la sous-unit&eacute; B, ou son homologue chez la levure, Cdc55, est n&eacute;cessaire pour l&#39;apoptose induite par les E4orf4 dans les cellules de mammif&egrave;res et pour l&#39;induction de l&#39;arr&ecirc;t de la croissance chez Saccharomyces cerevisiae. Dans ce travail, Cdc55 a &eacute;t&eacute; mutag&eacute;nis&eacute;es tant au hasard par amplification PCR peu d&eacute;taill&eacute;e, et des mutants de Cdc55 qui a perdu la capacit&eacute; &agrave; transmettre le signal toxique E4orf4 chez la levure ont &eacute;t&eacute; s&eacute;lectionn&eacute;s. Les mutations obtenues par le pr&eacute;sent protocole a inhib&eacute; l&#39;association des Cdc55 avec E4orf4, ou avec les sous-unit&eacute;s PP2A-AC, ou les deux. L&#39;analyse fonctionnelle a r&eacute;v&eacute;l&eacute; qu&#39;un mutant qui ne lie pas le Tpd3, la sous-unit&eacute; de la levure A, ainsi que de type sauvage Cdc55 dans un contexte de tpd3Delta, peut se former un h&eacute;t&eacute;rodim&egrave;re avec la sous-unit&eacute; catalytique. Cette association requiert la m&eacute;thylation de carboxyle C sous-unit&eacute;. L&#39;activit&eacute; de la phosphatase r&eacute;siduelle associ&eacute;e &agrave; Cdc55 en l&#39;absence de Tpd3 est suffisante pour maintenir un point de contr&ocirc;le de broche partiellement actif et &agrave; pr&eacute;venir les anomalies de la cytokin&egrave;se.

La sous-unit&eacute; A/Tpd3 &eacute;chafaudage et une forte activit&eacute; de phosphatase sont superflues pour la fonction Cdc55 dans le poste de contr&ocirc;le broche de Saccharomyces cerevisiae en cytokin&egrave;se.

Protein-Serin/Threonin-Phosphatase-2A (PP2A) ist ein multifunktionales Enzym, dessen Trimere Form aus einem Ger&uuml;st A-Untereinheit, eine katalytische Untereinheit C und eine verschiedene regulatorische B-Untereinheiten besteht (B, B und B&#39;&#39;). Der Adenovirus E4orf4 Protein ordnet PP2A durch direkt binden die B oder B Untereinheiten. Eine Interaktion mit einem aktiven PP2A, enth&auml;lt die B-Untereinheit, oder seine Homologe in der Hefe, Cdc55, ist erforderlich f&uuml;r E4orf4-induzierten Apoptose in den S&auml;ugetier-Zellen und Induktion von Wachstumanhalten in Saccharomyces Cerevisiae. In dieser Arbeit Cdc55 wurde nach dem Zufallsprinzip durch Low-Fidelity PCR Verst&auml;rkung mutagenized und Cdc55-Mutanten, die die F&auml;higkeit verloren, das giftige E4orf4-Signal in der Hefe zur&uuml;ckwirken ausgew&auml;hlt wurden. Die Mutationen, die durch dieses Protokoll hemmte die Vereinigung der Cdc55 mit E4orf4 oder die PP2A-AC-Untereinheiten oder beides. Funktionale Analyse ergab, dass eine Mutante, die nicht Tpd3, die Hefe A Untereinheit sowie Wildtyp Cdc55 in einem tpd3Delta Hintergrund, bindet ein Heterodimer mit der katalytischen Untereinheit bilden kann. Diese Zuordnung erfordert C Untereinheit Karboxyl-Methylierung. Die residual-Phosphatase-Aktivit&auml;t zugeordnet Cdc55 Mangels Tpd3 ist ausreichend, teilweise aktiv Spindel Checkpoint beizubehalten und Zellteilung defekte auszuschlie&szlig;en.

Die Ger&uuml;ste A/Tpd3 Untereinheit und hohe Phosphatase-Aktivit&auml;t sind entbehrlich f&uuml;r Cdc55 Funktion in Saccharomyces Cerevisiae Spindel Checkpoint und Zellteilung.

Proteina serina/treonina fosfatasi 2A (PP2A) &egrave; un enzima multifunzionale cui forma trimeric consiste di una subunit&agrave; di ponteggi A, una subunit&agrave; catalitica di C e delle diverse normative subunit&agrave; B (B, B&#39; e B &#39;). Adenovirus proteina E4orf4 associa PP2A legandosi direttamente la B o B&#39; subunit&agrave;. Un&#39;interazione con un attivo PP2A contenenti la subunit&agrave; B, o il suo omologo nel lievito, Cdc55, &egrave; necessaria per E4orf4-induced apoptosis in cellule di mammifero e per l&#39;induzione dell&#39;arresto della crescita in Saccharomyces cerevisiae. In questo lavoro, Cdc55 era mutagenized casualmente dall&#39;amplificazione di PCR di bassa fedelt&agrave; e Cdc55 mutanti che hanno perso la capacit&agrave; di trasdurre il segnale tossico E4orf4 in lievito sono stati selezionati. Le mutazioni ottenute da questo protocollo inibiscono l&#39;associazione di Cdc55 con E4orf4, o con la subunit&agrave; PP2A-AC, o entrambi. Analisi funzionale hanno rivelato che un mutante che non legano il Tpd3, la subunit&agrave; A lievito, cos&igrave; come wild type Cdc55 in uno sfondo di tpd3Delta, pu&ograve; formare un eterodimero con la subunit&agrave; catalitica. Questa associazione richiede metilazione di carbossilico subunit&agrave; C. L&#39;attivit&agrave; fosfatasica residuo connesso con Cdc55 in assenza di Tpd3 &egrave; sufficiente per mantenere un checkpoint mandrino parzialmente attivo e per evitare difetti di Citocinesi in.

La subunit&agrave; A/Tpd3 di ponteggio e l&#39;elevata fosfatasi attivit&agrave; sono dispensabili per la funzione Cdc55 in checkpoint Saccharomyces cerevisiae mandrino e Citocinesi in.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; 2A (PP2A) &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8DB3;&#x5834; A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92; C &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E; B &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x9175;&#x7D20; (B&#x3001;B&#39;&#x3001;B &#39;)&#x3002;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; E4orf4 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; PP2A B &#x307E;&#x305F;&#x306F; B&#39; &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;B &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0; Cdc55&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; PP2A &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x505C;&#x6B62;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;Cdc55 &#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x4F4E;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6; PCR &#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; E4orf4 &#x306E;&#x6709;&#x6BD2;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5931;&#x3063;&#x3066; Cdc55 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x9078;&#x3070;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570; Cdc55 &#x306E; E4orf4&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F; PP2A AC &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Tpd3&#x3001;&#x9175;&#x6BCD; A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Cdc55 tpd3Delta &#x306E;&#x80CC;&#x666F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x306F;&#x3001;C &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Cdc55 &#x3068; Tpd3 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x7559;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB; &#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x8DB3;&#x5834; A/Tpd3 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027; Cdc55 &#x95A2;&#x6570;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED; &#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB; &#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2A (PP2A)&#xB294; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; trimeric &#xD3FC; &#xC2A4; &#xCE90; &#xD3F4;&#xB529; A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;, &#xCD09;&#xB9E4; C &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xADDC;&#xC81C; B &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xD6A8;&#xC18C; (B, B&#39;&#xC640; B &#39;). &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; B &#xB610;&#xB294; B&#39; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; pp2a&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. B &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB610;&#xB294; &#xADF8; homologue &#xD6A8; &#xBAA8;, Cdc55&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD65C;&#xC131; pp2a&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; apoptosis E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC720;&#xB3C4; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC80;&#xAC70;&#xC758; &#xD544;&#xC694;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; cdc55&#xB294; &#xC784;&#xC758;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; PCR &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558; &#xC5EC; mutagenized &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; E4orf4 &#xB3C5;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; transduce &#xB2A5;&#xB825; &#xC783;&#xC5C8;&#xB2E4; Cdc55 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC120;&#xC815; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BB;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC800;&#xD574; Cdc55 E4orf4, &#xB610;&#xB294; PP2A AC &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xB2E4;&#xC758; &#xD611;&#xD68C;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Tpd3, &#xACE0; &#xD6A8; A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; Cdc55 tpd3Delta &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; heterodimer&#xC744; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD611;&#xD68C; C &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; carboxyl &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xAC00; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tpd3 &#xC5C6;&#xC774; cdc55&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC794;&#xC5EC; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xCCB4;&#xD06C; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; cytokinesis &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4; &#xCE90; &#xD3F4;&#xB529; A/Tpd3 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; Saccharomyces cerevisiae &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xBC0F; cytokinesis Cdc55 &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prote&iacute;na Serina/Treonina fosfatasa 2A (PP2A) es una enzima multifuncional cuya forma trim&eacute;rica consiste en una subunidad del andamio A una subunidad catal&iacute;tica de la C y de varias subunidades reguladoras de la B (B, B&#39; y B&#39;&#39;). El adenovirus E4orf4 prote&iacute;na asocia PP2A enlazando directamente a la B o B&#39; subunidades. Una interacci&oacute;n con una PP2A activo que contiene la subunidad B, o su hom&oacute;logo en la levadura, PP2ACdc55, se requiere para la apoptosis inducida por E4orf4 en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero y para la inducci&oacute;n de la detenci&oacute;n del crecimiento en Saccharomyces cerevisiae. En este trabajo, PP2ACdc55 fue mutagenized al azar por la amplificaci&oacute;n de PCR de baja fidelidad, y seleccionaron PP2ACdc55 mutantes que perdieron la capacidad de transducir la se&ntilde;al de E4orf4 t&oacute;xica en la levadura. Las mutaciones obtenidas por este protocolo inhibici&oacute;n la Asociaci&oacute;n de PP2ACdc55 con E4orf4, o con las subunidades PP2A-AC, o ambos. An&aacute;lisis funcional revel&oacute; que un mutante que no ata Tpd3, la subunidad A la levadura, as&iacute; como tipo salvaje PP2ACdc55 en un fondo de tpd3Delta, puede formar un heterod&iacute;mero con la subunidad catal&iacute;tica. Esta asociaci&oacute;n requiere metilaci&oacute;n de carboxilo de subunidad C. La actividad de la fosfatasa residual asociada con PP2ACdc55 en la ausencia de Tpd3 es suficiente para mantener un puesto de control del huso parcialmente activo y para prevenir defectos de la citocinesis.

La subunidad de A/Tpd3 andamios y actividad de la fosfatasa alta son prescindibles para la funci&oacute;n de PP2ACdc55 en el puesto de control del huso Saccharomyces cerevisiae y citocinesis.

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; E4orf4 (&#x65E9;&#x671F; 4 &#x533A;&#x57DF;&#x5F00;&#x653E;&#x8BFB;&#x6846; 4&#xFF09; &#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A &#x4F9D;&#x8D56;&#x975E;&#x7ECF;&#x5178;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x6076;&#x6027;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684;&#x589E;&#x654F; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x63ED;&#x9732;&#x7684; E4orf4 &#x7F51;&#x7EDC;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x53CA;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9644;&#x52A0;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x6765;&#x9009;&#x62E9;&#x8D4B;&#x4E88; E4orf4 &#x6297;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x5931;&#x3002;&#x5220;&#x9664; YND1&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x4E00;&#x79CD;&#x9175;&#x6BCD;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x82F7;&#x8D4B;&#x4E88; E4orf4 &#x90E8;&#x5206;&#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Ynd1p &#x82F7;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x6240;&#x9700;&#x7684; E4orf4 &#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x3002;Ynd1p &#x548C; Cdc55p&#xFF0C;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A B &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8D21;&#x732E; E4orf4 &#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F34;&#x968F;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5220;&#x9664;&#x5176;&#x4ED6;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7684;&#x5229;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;YND1 &#x548C; CDC55 &#x4E5F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0; CDC20 &#x4E0E; CDH1/HCT1&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x540E;&#x671F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x590D;&#x6742;/cyclosome &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;Ynd1p &#x548C; Cdc55p &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7269;&#x7406;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86; E4orf4&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Ynd1p &#x548C; Cdc55p &#x5206;&#x4EAB;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5176;&#x5E73;&#x8861;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; E4orf4 &#x4F19;&#x4F34;&#x662F;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5E73;&#x8861;&#x7684; E4orf4 &#x7684;&#x4E2D;&#x65AD;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;NTPDase-4/Lalp70/UDPase&#xFF0C;&#x6700;&#x63A5;&#x8FD1;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684; Ynd1p&#xFF0C;&#x4E0E; E4orf4 &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x660E;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5236;&#x5EA6;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

YND1 &#x4E0E; CDC55 &#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x65B0;&#x578B; E4orf4 &#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x3002;

Adenovirus E4orf4 (early region 4 open reading frame 4) protein induces protein phosphatase 2A-dependent non-classical apoptosis in mammalian cells and irreversible growth arrest in Saccharomyces cerevisiae. Oncogenic transformation sensitizes cells to E4orf4-induced cell death. To uncover additional components of the E4orf4 network required for induction of its unique mode of apoptosis, we used yeast genetics to select gene deletions conferring resistance to E4orf4. Deletion of YND1, encoding a yeast Golgi apyrase, conferred partial resistance to E4orf4. However, Ynd1p apyrase activity was not required for E4orf4-induced toxicity. Ynd1p and Cdc55p, the yeast protein phosphatase 2A-B subunit, contributed additively to E4orf4-induced toxicity. Furthermore, concomitant overexpression of one and deletion of the other was detrimental to yeast growth, demonstrating a functional interaction between the two proteins. YND1 and CDC55 also interacted genetically with CDC20 and CDH1/HCT1, encoding activating subunits of the anaphase-promoting complex/cyclosome. In addition to their functional interaction, Ynd1p and Cdc55p interacted physically, and this interaction was disrupted by E4orf4, which remained associated with both proteins. The results suggested that Ynd1p and Cdc55p share a common downstream target whose balanced modulation by the two E4orf4 partners is crucial to viability. Disruption of this balance by E4orf4 may lead to cell death. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, the closest mammalian homologue of Ynd1p, associated with E4orf4 in mammalian cells, suggesting that the results in yeast are relevant to the mammalian system.

YND1 interacts with CDC55 and is a novel mediator of E4orf4-induced toxicity.

E4orf4 de l&#39;ad&eacute;novirus (trame d&eacute;but de lecture ouverte r&eacute;gion 4 4) prot&eacute;ine induit la prot&eacute;ine phosphatase 2 a-dependent non-classique apoptose dans les cellules de mammif&egrave;res et arr&ecirc;t de la croissance irr&eacute;versible chez Saccharomyces cerevisiae. Transformation oncog&eacute;nique sensibilise les cellules &agrave; l&#39;apoptose induite par le E4orf4. Afin de d&eacute;couvrir des &eacute;l&eacute;ments suppl&eacute;mentaires du r&eacute;seau E4orf4 requis pour l&#39;induction de son unique mode de l&#39;apoptose, nous avons utilis&eacute; la g&eacute;n&eacute;tique de la levure pour s&eacute;lectionner les destructions de g&egrave;nes conf&eacute;rant une r&eacute;sistance &agrave; la E4orf4. Suppression de YND1, codant une levure apyrase Golgi, a conf&eacute;r&eacute; une r&eacute;sistance partielle &agrave; E4orf4. Toutefois, l&#39;activit&eacute; apyrase Ynd1p n&#39;&eacute;tait pas n&eacute;cessaire pour la toxicit&eacute; induite par le E4orf4. Ynd1p et Cdc55p, de la levure prot&eacute;ine phosphatase 2 a et B sous-unit&eacute;, contribu&eacute; additivement &agrave; la toxicit&eacute; induite par le E4orf4. En outre, la surexpression concomitante d&#39;un et de la suppression de l&#39;autre &eacute;taient pr&eacute;judiciables &agrave; la croissance de la levure, ce qui d&eacute;montre une interaction fonctionnelle entre les deux prot&eacute;ines. YND1 et CDC55 &eacute;galement des interactions g&eacute;n&eacute;tiquement avec CDC20 et HCT1/CDH1, encodage activation des sous-unit&eacute;s de la promotion de l&#39;anaphase complexe/cyclosome. En plus de leur interaction fonctionnelle, Ynd1p et Cdc55p interagissent physiquement, et cette interaction a &eacute;t&eacute; perturb&eacute;e par les E4orf4, qui est rest&eacute; associ&eacute; &agrave; ces deux prot&eacute;ines. Les r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les Ynd1p et Cdc55p partagent un objectif commun en aval, dont modulation &eacute;quilibr&eacute;e par les deux partenaires E4orf4 est cruciale pour la viabilit&eacute;. Perturbation de cet &eacute;quilibre par E4orf4 peut conduire &agrave; la mort cellulaire. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, l&#39;homologue mammalien plus proche de Ynd1p, associ&eacute; &agrave; E4orf4 dans les cellules de mammif&egrave;res, ce qui sugg&egrave;re que les r&eacute;sultats chez les levures sont pertinents dans le syst&egrave;me des mammif&egrave;res.

YND1 interagit avec CDC55 et est un nouveau m&eacute;diateur de la toxicit&eacute; induite par le E4orf4.

Adenovirus-E4orf4 (fr&uuml;he Region 4 offene Leseraster 4) Protein induziert Protein Phosphatase 2A-abh&auml;ngigen nicht-klassischen Apoptosis in den S&auml;ugetier-Zellen und irreversiblen Wachstumanhalten in Saccharomyces Cerevisiae. Onkogene Transformation sensibilisiert Zellen zu E4orf4-induced Zellentod. Um zus&auml;tzliche Komponenten des E4orf4 Netzwerks f&uuml;r die Induktion von seiner einzigartigen Modus von Apoptosis zu diagnostizieren, verwendet wir Hefe-Genetik gen-Deletionen, die eine Resistenz gegen E4orf4 verleihen. L&ouml;schen von YND1, Codierung eine Hefe Golgi Apyrase, &uuml;bertragenen partielle Resistenz gegen E4orf4. Ynd1p Apyrase T&auml;tigkeit war jedoch nicht f&uuml;r E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t erforderlich. Ynd1p und Cdc55p, die Hefe Protein Phosphatase 2A-B-Untereinheit, Additiv zur E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t beigetragen. Au&szlig;erdem war damit einhergehende eine &Uuml;berexpression von eins und L&ouml;schung des anderen Nachteil der Hefe Wachstum, demonstriert eine funktionelle Interaktion zwischen den beiden Proteinen. YND1 und CDC55 interagierte auch genetisch mit CDC20 und CDH1/HCT1, aktivierende Untereinheiten der Anaphase-promoting Complex/Cyclosome-Codierung. Neben ihrer funktionalen Interaktion Ynd1p und Cdc55p interagiert physisch, und diese Interaktion wurde durch E4orf4, die beide Proteine zugeordnet blieben gest&ouml;rt. Die Ergebnisse vorgeschlagen, dass Ynd1p und Cdc55p ein h&auml;ufiges Ziel der nachgelagerten teilen deren ausgewogene Modulation durch die beiden E4orf4-Partner f&uuml;r Lebensf&auml;higkeit entscheidend ist. St&ouml;rung dieses Gleichgewichts von E4orf4 kann zu Zelltod f&uuml;hren. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, die n&auml;chste S&auml;ugetier-Homolog von Ynd1p, E4orf4 in den S&auml;ugetier-Zellen, was darauf hindeutet, dass die Ergebnisse in der Hefe auf das S&auml;ugetier-System zugeordnet.

YND1 interagiert mit CDC55 und ist ein neuartiger Vermittler der E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t.

E4orf4 adenovirus (primi regione 4 open reading frame 4) proteina induce la proteina fosfatasi 2A-dipendente non-classica apoptosis in cellule di mammifero e arresto di crescita irreversibile in Saccharomyces cerevisiae. Trasformazione oncogenica sensibilizza le cellule morte cellulare indotta da E4orf4. Per scoprire ulteriori componenti della rete E4orf4 necessaria per l&#39;induzione del suo modo unico di apoptosi, abbiamo utilizzato la genetica del lievito per selezionare delezioni del gene che conferisce resistenza alla E4orf4. Eliminazione di YND1, che codifica un lievito apyrase di Golgi, conferito resistenza parziale all&#39;E4orf4. Tuttavia, Ynd1p apyrase attivit&agrave; non era richiesto per la tossicit&agrave; indotta da E4orf4. Ynd1p e Cdc55p, la subunit&agrave; lievito proteina fosfatasi 2A-B, additivamente contribuito alla tossicit&agrave; indotta da E4orf4. Inoltre, concomitante sovraespressione di uno e l&#39;eliminazione degli altri &egrave; stato dannosi per la crescita del lievito, dimostrando un&#39;interazione funzionale tra le due proteine. YND1 e CDC55 anche interagito geneticamente con CDC20 e CDH1/HCT1, attivazione subunit&agrave; del complesso/cyclosome anafase-promozione. Oltre alla loro interazione funzionale, Ynd1p e Cdc55p hanno interagito fisicamente, e questa interazione &egrave; stata interrotta da E4orf4, che &egrave; rimasto associato con entrambe le proteine. I risultati ha suggerito che Ynd1p e Cdc55p condividono un obiettivo comune a valle cui modulazione equilibrata dai due partner E4orf4 &egrave; fondamentale per la redditivit&agrave;. Rottura di questo equilibrio di E4orf4 pu&ograve; portare alla morte delle cellule. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, l&#39;omologo mammifero pi&ugrave; vicino di Ynd1p, associato a E4orf4 in cellule di mammifero, suggerendo che i risultati in lievito sono rilevanti per il sistema dei mammiferi.

YND1 interagisce con CDC55 ed &egrave; un mediatore del romanzo di tossicit&agrave; indotta da E4orf4.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; E4orf4 (&#x521D;&#x671F;&#x9818;&#x57DF; 4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2A &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x505C;&#x6B62;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x4E00;&#x7FA9;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; E4orf4 &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; E4orf4 &#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53; apyrase &#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;YND1 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x90E8;&#x5206;&#x62B5;&#x6297; E4orf4 &#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;Ynd1p apyrase &#x6D3B;&#x52D5;&#x306F; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x306F;&#x4E0D;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Ynd1p &#x3068; Cdc55p&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; 2 a B &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x548C; &#xFF08;&#xFF09; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x524A;&#x9664;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x6709;&#x5BB3;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;YND1 &#x3068; CDC55 &#x3082;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684; CDC20 &#x3068; CDH1/HCT1 &#x306E;&#x5F8C;&#x671F;&#x4FC3;&#x9032;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;/cyclosome &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066; Ynd1p &#x3068; Cdc55p &#x3092;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x4E21;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Ynd1p &#x3068; Cdc55p &#x305D;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x53D6;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E; E4orf4 &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NTPDase-4/Lalp70/UDPase&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x8FD1;&#x3044;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D50;&#x679C;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; E4orf4 &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; Ynd1p

YND1 &#x306F;&#x3001;CDC55 &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;E4orf4 &#x8A98;&#x767A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 (&#xCD08;&#xAE30; &#xC9C0;&#xC5ED; 4 &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2A &#xC885;&#xC18D; &#xC544;&#xB2CC; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; apoptosis&#xC640; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC80;&#xAC70;. &#xAE08;&#xD558;&#xB294; &#xBCC0;&#xD658; sensitizes &#xC140; E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744;. &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC720;&#xC804;&#xD559; apoptosis&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; E4orf4 &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD788;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; e4orf4&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;. YND1, &#xD6A8; &#xBAA8; Golgi apyrase &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBD80;&#xBD84; &#xC800;&#xD56D; E4orf4 &#xC218; &#xC5EC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Ynd1p apyrase &#xD65C;&#xB3D9; E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. Ynd1p &#xBC0F; Cdc55p, &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2A-B &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; additively E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBD80;&#xC218;&#xC801;&#xC778; overexpression &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xCE58; &#xBA85; &#xD0C0;. Ynd1&#xC640; cdc55&#xB3C4; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC720;&#xC804;&#xC790; CDC20 &#xBC0F; CDH1/HCT1, anaphase &#xD64D;&#xBCF4; &#xBCF5;&#xC7A1;/cyclosome&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; subunits &#xC778;&#xCF54;&#xB529;. &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Ynd1p &#xBC0F; cdc55p&#xC744; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xD638;&#xC774; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xAD00; e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; ynd1p&#xC640; Cdc55p &#xB450; E4orf4 &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8; &#xADE0;&#xD615;&#xC7A1;&#xD78C;&#xB41C; &#xBCC0;&#xC870;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACF5;&#xD1B5; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; &#xACF5;&#xC720;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. E4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xADE0;&#xD615;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, Ynd1p, &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAD00;&#xB828; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; e4orf4&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologue.

YND1 cdc55&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; e4orf4&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

E4orf4 adenovirus (primera regi&oacute;n 4 bastidor de lectura abierto 4) prote&iacute;na induce la prote&iacute;na fosfatasa 2A-dependiente no cl&aacute;sicas apoptosis en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero y detenci&oacute;n del crecimiento irreversible en Saccharomyces cerevisiae. Transformaci&oacute;n oncog&eacute;nica sensibiliza las c&eacute;lulas a la muerte celular inducida por E4orf4. Para descubrir los componentes adicionales de la red de E4orf4 necesaria para la inducci&oacute;n de su &uacute;nico modo de apoptosis, utilizamos gen&eacute;tica de levadura para seleccionar deleciones de genes que confieren resistencia a E4orf4. Eliminaci&oacute;n de YND1, codificaci&oacute;n de una levadura apyrase de Golgi, confiere resistencia parcial a E4orf4. Sin embargo, Ynd1p apyrase actividad no era necesario para la toxicidad inducida por E4orf4. Ynd1p y Cdc55p, la levadura prote&iacute;na fosfatasa 2A-B subunidad aditiva contribuyeron a la toxicidad inducida por E4orf4. Adem&aacute;s, concomitante sobreexpresi&oacute;n de uno y la eliminaci&oacute;n del otro eran perjudiciales para el crecimiento de la levadura, demostrando una interacci&oacute;n funcional entre las dos prote&iacute;nas. YND1 y PP2ACdc55 tambi&eacute;n interactuaban gen&eacute;ticamente con CDC20 y CDH1/HCT1, codifican subunidades de activaci&oacute;n de la promoci&oacute;n de la anafase complejo/cyclosome. Adem&aacute;s de su interacci&oacute;n funcional, Ynd1p y Cdc55p interactuaron f&iacute;sicamente, y esta interacci&oacute;n fue interrumpida por el E4orf4, que segu&iacute;a siendo asociado de ambas prote&iacute;nas. Los resultados sugirieron que Ynd1p y Cdc55p comparten un objetivo com&uacute;n de aguas abajo cuya modulaci&oacute;n equilibrado por los dos socios de E4orf4 es crucial para la viabilidad. Interrupci&oacute;n de este equilibrio por E4orf4 puede llevar a la muerte celular. NTPDase-4/Lalp70/UDPase, el hom&oacute;logo mam&iacute;fero m&aacute;s cercano de Ynd1p, asociados con E4orf4 en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, lo que sugiere que los resultados en la levadura son relevantes para el sistema mam&iacute;fero.

YND1 interact&uacute;a con PP2ACdc55 y es un nuevo mediador de la toxicidad inducida por E4orf4.

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; E4 &#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; (E4orf4) 4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x4E24;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x63A7;&#x5236;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x665A;&#x671F;&#x5206;&#x6CCC;&#x53C2;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x5F53;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x7531;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; MYC &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; c-Myc&#xFF09; &#x662F;&#x7F16;&#x7801;&#x540E;&#x7684; E4orf4 &#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x65E9;&#x671F;&#x3002;&#x5176;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#xFF0C;Myc &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x51CF;&#x5C11; E4orf4 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;MYC &#x4E0B;&#x8C03;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E24;&#x8005;&#x65F6; E4orf4 &#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x72EC;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;E4orf4 &#x964D;&#x4F4E;&#x4E86; MYC &#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F38;&#x957F;&#x6216; RNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x8981;&#x6C42;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; MYC &#x7684; E4orf4 &#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Myc &#x8868;&#x8FBE;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x6291;&#x5236;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; Myc &#x7684; E4orf4 &#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x6548;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; E4orf4 &#x75C5;&#x6BD2; MYC &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) protein is a multifunctional viral regulator that is involved in the temporal regulation of viral gene expression by modulating cellular and viral genes at the transcription and translation levels and by controlling alternative splicing of adenoviral late mRNAs. When expressed individually, E4orf4 induces apoptosis in transformed cells. Using oligonucleotide microarray analysis, validated by quantitative real time PCR, we found that MYC (also known as c-Myc) is downregulated early after the induction of E4orf4 expression. As a result, Myc protein levels are reduced in E4orf4-expressing cells. MYC downregulation is observed both when E4orf4 is expressed individually and within the context of viral infection. E4orf4 reduces MYC transcription but does not affect transcriptional elongation or RNA stability. An interaction with the PP2A-B55 subunit is required for the downregulation of MYC by E4orf4. Since Myc overexpression was previously shown to inhibit adenovirus replication, the downregulation of Myc by E4orf4 would contribute to efficient virus infection.

Adenovirus E4orf4 protein downregulates MYC expression through interaction with the PP2A-B55 subunit.

L&#39;ad&eacute;novirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) prot&eacute;ine est un d&eacute;tendeur multifonctions viral qui est impliqu&eacute; dans la r&eacute;gulation temporelle de l&#39;expression des g&egrave;nes viraux en modulant les niveaux de transcription et la traduction des g&egrave;nes virus et cellulaires et en contr&ocirc;lant l&#39;&eacute;pissage des ARNm fin ad&eacute;noviraux. Lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e individuellement, E4orf4 induit l&#39;apoptose dans les cellules transform&eacute;es. &Agrave; l&#39;aide d&#39;oligonucleotide microarray analysis, valid&eacute;s par PCR, quantitative en temps r&eacute;el, nous avons trouv&eacute; que MYC (&eacute;galement connu sous le nom de c-Myc) est diminu&eacute;e au d&eacute;but apr&egrave;s l&#39;induction de l&#39;expression E4orf4. En cons&eacute;quence, les taux de prot&eacute;ines Myc sont r&eacute;duits dans les cellules exprimant le E4orf4. MYC downregulation on observe les deux lorsque E4orf4 est exprim&eacute; individuellement et dans le contexte de l&#39;infection virale. E4orf4 r&eacute;duit la transcription MYC mais n&#39;affecte pas l&#39;&eacute;longation transcriptionnelle ou stabilit&eacute; RNA. Une interaction avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55 est n&eacute;cessaire pour la r&eacute;gulation n&eacute;gative de MYC par E4orf4. &Eacute;tant donn&eacute; que la surexpression de Myc a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e pour inhiber la r&eacute;plication de l&#39;ad&eacute;novirus, la r&eacute;gulation n&eacute;gative de Myc par E4orf4 contribuerait &agrave; l&#39;infection de virus efficace.

Ad&eacute;novirus E4orf4 primaire MYC expression de la prot&eacute;ine par l&#39;interaction avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55.

Die Adenoviren E4 offene Frame 4 (E4orf4) zu lesen ist Protein multifunktionale virale Regulator, der bei der zeitlichen Regelung der viralen Genexpression durch Modulation der zellul&auml;ren und virale Gene auf der Transkription und &Uuml;bersetzung und durch alternatives Splei&szlig;en adenoviral sp&auml;ten mRNAs Kontrolle beteiligt ist. Wenn individuell ausgedr&uuml;ckt, induziert E4orf4 Apoptosis in den transformierten Zellen. Mit Oligonukleotid-Microarray-Analyse, validiert durch quantitative Real-Time PCR, fanden wir, dass MYC (auch bekannt als c-Myc) Downregulated fr&uuml;h nach der Induktion der E4orf4 Ausdruck ist. Infolgedessen werden die Myc-Protein-Ebene in E4orf4 Ausdr&uuml;cken Zellen reduziert. MYC Heraufregulation wird beide eingehalten, wenn E4orf4 individuell und im Rahmen einer Virusinfektion ausgedr&uuml;ckt wird. E4orf4 reduziert MYC Transkription aber hat keine Auswirkungen auf die transkriptionelle Dehnung oder RNA-Stabilit&auml;t. Eine Interaktion mit der PP2A-B55-Untereinheit ist erforderlich f&uuml;r das Medikament von MYC durch E4orf4. Da Myc &Uuml;berexpression zuvor gezeigt wurde, Adenovirus-Replikation zu hemmen, w&uuml;rde das Medikament von Myc von E4orf4 zur effizienten Virusinfektion beitragen.

Adenovirus E4orf4 Downregulates MYC Proteinexpression durch Interaktion mit der PP2A-B55-Untereinheit.

Adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) proteine sono un regolatore multifunzionale virale che &egrave; coinvolto nella regolazione temporale dell&#39;espressione del gene virale modulando geni cellulari e virali a livello di trascrizione e traduzione e controllando splicing alternativo dei mRNAs tardo adenovirali. Quando espressa individualmente, E4orf4 induce apoptosi nelle cellule trasformate. Utilizzando l&#39;analisi di microarray oligonucleotidici, convalidato da quantitative real time PCR, abbiamo trovato che MYC (noto anche come c-Myc) &egrave; downregolata presto dopo l&#39;induzione dell&#39;espressione di E4orf4. Di conseguenza, i livelli di proteina Myc sono ridotti nelle cellule che esprimono E4orf4. Downregulation MYC &egrave; osservata sia quando E4orf4 &egrave; espressa individualmente e all&#39;interno del contesto dell&#39;infezione virale. E4orf4 riduce la trascrizione MYC ma non influisce sul allungamento trascrizionale o RNA stabilit&agrave;. Un&#39;interazione con la subunit&agrave; PP2A-B55 &egrave; richiesta per il downregulation di MYC da E4orf4. Poich&eacute; la sovraespressione di Myc precedentemente &egrave; stato indicato per inibire la replicazione dell&#39;adenovirus, il downregulation di Myc da E4orf4 contribuirebbe a infezione da virus efficiente.

Adenovirus E4orf4 sottoregola MYC espressione della proteina attraverso l&#39;interazione con la subunit&agrave; PP2A-B55.

&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4 (E4orf4) &#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3084;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5909;&#x8ABF;&#x3068;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A; Mrna &#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x3059;&#x3068;&#x3001;E4orf4 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; MYC &#xFF08;&#x5225;&#x540D; C-myc) downregulated E4orf4 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F8C;&#x65E9;&#x671F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;Myc &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; E4orf4 &#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E4orf4 &#x306F;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D; MYC &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E21;&#x65B9;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E4orf4 &#x306F;&#x3001;MYC &#x8EE2;&#x5199;&#x306F;&#x6E1B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x307E;&#x305F;&#x306F; RNA &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;MYC &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; E4orf4 &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Myc &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x4EE5;&#x524D;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x7981;&#x3058;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;E4orf4 &#x3067; Myc &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4orf4 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F; MYC &#x5F0F; PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4 &#xC624;&#xD508; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4 (E4orf4)&#xB97C; &#xC77D;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0; adenoviral &#xB2A6;&#xC740; Mrnas&#xC758; &#xB300;&#xCCB4; &#xC811;&#xD569; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xADDC;&#xC815; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; E4orf4 &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC591;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR, &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; oligonucleotide microarray &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; MYC (c Myc) downregulated E4orf4 &#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6C4; &#xC77C;&#xCC0D;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC;, Myc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB808;&#xBCA8; &#xC140; E4orf4 &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MYC downregulation&#xB294; e4orf4&#xC740; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. E4orf4 MYC &#xC804;&#xC0AC; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xC9C0;&#xB9CC; transcriptional &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; RNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PP2A-B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; MYC&#xC758; downregulation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. Myc overexpression &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC92C;&#xB358;, &#xC774;&#xD6C4; downregulation e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Myc&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PP2A B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; downregulates MYC &#xC2DD;.

El adenovirus E4 abierto leyendo el cap&iacute;tulo 4 (E4orf4) prote&iacute;na es un regulador viral multifuncional que participa en la regulaci&oacute;n temporal de la expresi&oacute;n g&eacute;nica viral modulando genes celulares y virales en los niveles de transcripci&oacute;n y traducci&oacute;n y controlando el empalme alternativo de mRNAs finales adenoviral. Cuando se expresa individualmente, E4orf4 induce apoptosis en las c&eacute;lulas transformadas. Usando an&aacute;lisis de microarrays de oligonucle&oacute;tidos, validado por PCR cuantitativa en tiempo real se encontr&oacute; que MYC (tambi&eacute;n conocido como c-Myc) es regulada temprano despu&eacute;s de la inducci&oacute;n de la expresi&oacute;n de E4orf4. Como resultado, se reducen los niveles de la prote&iacute;na Myc en c&eacute;lulas de E4orf4-expresi&oacute;n. MYC downregulation ambos se observa cuando E4orf4 se expresa individualmente y en el contexto de la infecci&oacute;n viral. E4orf4 reduce la transcripci&oacute;n de MYC pero no afecta a la elongaci&oacute;n transcripcional o estabilidad de RNA. Una interacci&oacute;n con la subunidad PP2A-B55 es necesaria para la regulaci&oacute;n a la baja de MYC por E4orf4. Puesto que la sobreexpresi&oacute;n de Myc previamente fue demostrada para inhibir la replicaci&oacute;n de adenovirus, la regulaci&oacute;n a la baja de Myc por E4orf4 contribuir&iacute;a a la infecci&oacute;n del virus eficiente.

Adenovirus E4orf4 algo MYC expresi&oacute;n de la prote&iacute;na a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n con la subunidad PP2A-B55.

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; E4 &#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; (E4orf4) 4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x5F53;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;E4orf4 &#x662F;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x975E;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8F6C;&#x6362;&#x540E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x81F3;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x57FA;&#x7840; E4orf4 &#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x5747;&#x53D7;&#x5230;&#x4FDD;&#x80B2;&#x4ECE;&#x9175;&#x6BCD;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A &#x4E0E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4EA4;&#x6D41;&#x7684; E4orf4 &#x7684;&#x8981;&#x6C42; (PP2A&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5C4F;&#x5E55;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x82F7; Ynd1 E4orf4 &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; E4orf4 &#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E0E; Ynd1 &#x82F7;&#x6D3B;&#x52A8;&#x65E0;&#x5173;&#x3002;Ynd1 &#x548C; PP2A &#x6240;&#x793A;&#x52A0;&#x8D21;&#x732E; E4orf4 &#x81F4;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x8EAB;&#x4F53;&#x3002;&#x8868;&#x660E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; Ynd1 orthologue &#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; E4orf4 &#x786E;&#x8BA4;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x517B;&#x62A4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684; E4orf4 &#x6709;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x89E3;&#x4E0E; E4orf4 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6807;&#x8BC6; Ynd1 &#x6E38;&#x79BB;&#x5C3E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53C8;&#x663E;&#x793A; E4orf4 &#x5C06;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF09; &#x5728;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x8138;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;E4orf4 &#x662F;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; Ynd1&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5176;&#x4ED6;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x8C03;&#x89E3; E4orf4 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x548C;&#x524D;&#x4E00;&#x4EFD;&#x62A5;&#x544A;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684; Ynd1 &#x86CB;&#x767D;&#x4F19;&#x4F34;&#x96C6;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; Ynd1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5C3E;&#x5145;&#x5F53;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x3001; &#x4EA4;&#x4E92; multi-protein &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x5176;&#x9488;&#x5BF9;&#x7684; E4orf4 &#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x82F7; Ynd1 &#x6E38;&#x79BB;&#x5C3E;&#x4ECB;&#x5BFC; E4orf4 &#x81F4;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;

The adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) protein contributes to regulation of the progression of virus infection. When expressed individually, E4orf4 was shown to induce non-classical transformed cell-specific apoptosis in mammalian cells. At least some of the mechanisms underlying E4orf4-induced toxicity are conserved from yeast to mammals, including the requirement for an interaction of E4orf4 with protein phosphatase 2A (PP2A). A genetic screen in yeast revealed that the Golgi apyrase Ynd1 associates with E4orf4 and contributes to E4orf4-induced toxicity, independently of Ynd1 apyrase activity. Ynd1 and PP2A were shown to contribute additively to E4orf4-induced toxicity in yeast, and to interact genetically and physically. A mammalian orthologue of Ynd1 was shown to bind E4orf4 in mammalian cells, confirming the evolutionary conservation of this interaction. Here, we use mutation analysis to identify the cytosolic tail of Ynd1 as the protein domain required for mediation of the E4orf4 toxic signal and for the interaction with E4orf4. We also show that E4orf4 associates with cellular membranes in yeast and is localized at their cytoplasmic face. However, E4orf4 is membrane-associated even in the absence of Ynd1, suggesting that additional membrane proteins may mediate E4orf4 localization. Based on our results and on a previous report describing a collection of Ynd1 protein partners, we propose that the Ynd1 cytoplasmic tail acts as a scaffold, interacting with a multi-protein complex, whose targeting by E4orf4 leads to cell death.

The cytosolic tail of the Golgi apyrase Ynd1 mediates E4orf4-induced toxicity in Saccharomyces cerevisiae.

L&#39;ad&eacute;novirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) prot&eacute;ines contribue &agrave; la r&eacute;gulation de la progression de l&#39;infection par le virus. Exprim&eacute; individuellement, E4orf4 a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour induire l&#39;apoptose de cellules sp&eacute;cifiques transform&eacute; non-classique en cellules mammif&egrave;res. Au moins certains des m&eacute;canismes qui sous-tendent la toxicit&eacute; induite par le E4orf4 sont conserv&eacute;es de la levure pour les mammif&egrave;res, y compris l&#39;exigence d&#39;une interaction entre E4orf4 et la prot&eacute;ine phosphatase 2 a (PP2A). Un d&eacute;pistage g&eacute;n&eacute;tique chez la levure a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;apyrase Golgi Ynd1 associe E4orf4 et contribue &agrave; la toxicit&eacute; induite par le E4orf4, ind&eacute;pendamment de l&#39;activit&eacute; apyrase Ynd1. Ynd1 et PP2A apparaissaient additivement contribuer &agrave; la toxicit&eacute; induite par le E4orf4 chez les levures et interagissent physiquement et g&eacute;n&eacute;tiquement. Un orthologue de mammif&egrave;res de Ynd1 s&#39;est av&eacute;r&eacute; lier E4orf4 dans les cellules de mammif&egrave;res, confirmant la conservation &eacute;volutive de cette interaction. Ici, nous utilisons analyse de mutation pour identifier la queue cytosolique de Ynd1 comme &eacute;tant l&#39;apanage de prot&eacute;ines n&eacute;cessaire &agrave; la m&eacute;diation du signal E4orf4 toxique et pour l&#39;interaction avec les E4orf4. Nous montrons &eacute;galement que E4orf4 s&#39;associe &agrave; des membranes cellulaires dans la levure et est localis&eacute;e &agrave; leur face cytoplasmique. Cependant, E4orf4 est associ&eacute;e &agrave; la membrane m&ecirc;me en l&#39;absence de Ynd1, ce qui sugg&egrave;re que les prot&eacute;ines membranaires suppl&eacute;mentaires pourraient v&eacute;hiculer E4orf4 localisation. Bas&eacute;e sur nos r&eacute;sultats et sur un pr&eacute;c&eacute;dent rapport, qui d&eacute;crit un ensemble de partenaires prot&eacute;iques Ynd1, nous proposons que la queue cytoplasmique Ynd1 agit comme un &eacute;chafaudage, interagissant avec un complexe de multi-prot&eacute;ine, dont le ciblage par E4orf4 conduit &agrave; la mort cellulaire.

La queue cytosolique de l&#39;apyrase Golgi Ynd1 intervient dans la toxicit&eacute; induite par le E4orf4 chez Saccharomyces cerevisiae.

Die Adenoviren E4 offene Lesung Frame 4 (E4orf4) tr&auml;gt Protein zur Verordnung der Progression einer Virusinfektion. Wenn individuell ausgedr&uuml;ckt, wurde E4orf4 gezeigt, um nicht-klassischen transformierten zellspezifische Apoptose in den S&auml;ugetier-Zellen hervorzurufen. Zumindest einige der zugrunde liegenden E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t Mechanismen sind konserviert aus Hefe bis zu den S&auml;ugetieren, einschlie&szlig;lich die Anforderung f&uuml;r eine Interaktion von E4orf4 mit Protein Phosphatase 2A (PP2A). Ein genetischer Schirm in der Hefe ergab, dass die Golgi-Apyrase Ynd1 E4orf4 ordnet und zur E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t, unabh&auml;ngig von Ynd1 Apyrase Aktivit&auml;t tr&auml;gt. Ynd1 und PP2A wurden nacheinander Beitrag zur E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t in der Hefe und genetisch und k&ouml;rperlich Interaktion gezeigt. Ein S&auml;ugetier-Orthologue von Ynd1 wurde gezeigt, um E4orf4 in den S&auml;ugetier-Zellen, best&auml;tigt die evolution&auml;re Erhaltung dieser Interaktion zu binden. Hier verwenden wir Mutationsanalyse den Zytosolische Schwanz Ynd1 wie die Proteindom&auml;ne ben&ouml;tigt, f&uuml;r die Vermittlung des Signals E4orf4 giftig und f&uuml;r die Interaktion mit E4orf4 zu identifizieren. Wir zeigen auch, dass E4orf4 Zellmembranen in Hefe ordnet und ist bei ihrem zytoplasmatischen Gesicht lokalisiert. Allerdings ist E4orf4 Membran-assoziierte auch in Abwesenheit des Ynd1, was darauf hindeutet, dass zus&auml;tzliche Membranproteine E4orf4 Lokalisierung vermitteln k&ouml;nnen. Basierend auf unsere Ergebnisse und einen Bericht beschreibt eine Auflistung von Ynd1-Protein-Partner, schlagen wir vor, der Ynd1 zellplasmatische Schwanz fungiert als ein Ger&uuml;st, Interaktion mit einem multi-protein Komplex, dessen Ausrichtung von E4orf4 zum Zelltod f&uuml;hrt.

Der Zytosolische Schwanz die Golgi-Apyrase Ynd1 vermittelt E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t in Saccharomyces Cerevisiae.

Adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) proteine contribuiscono alla regolazione della progressione dell&#39;infezione da virus. Quando espressa individualmente, E4orf4 &egrave; stato indicato per indurre classico trasformato cellule specifiche apoptosis in cellule di mammifero. Almeno alcuni dei meccanismi sottostanti la tossicit&agrave; indotta da E4orf4 sono conservati da lievito di mammiferi, tra cui il requisito per un&#39;interazione del E4orf4 con la proteina fosfatasi 2A (PP2A). Uno schermo genetico nel lievito ha rivelato che il apyrase di Golgi Ynd1 associates con E4orf4 e contribuisce alla tossicit&agrave; indotta da E4orf4, indipendentemente dall&#39;attivit&agrave; apyrase Ynd1. Ynd1 e PP2A sono stati mostrati additivamente contribuire alla tossicit&agrave; indotta da E4orf4 in lievito e di interagire fisicamente e geneticamente. Un mammifero orthologue di Ynd1 &egrave; stato indicato per legarsi E4orf4 in cellule di mammifero, confermando la conservazione evolutiva di questa interazione. Qui, usiamo analisi di mutazione per identificare la coda citosolica di Ynd1 come il dominio della proteina necessario per la mediazione del segnale E4orf4 tossico e per l&#39;interazione con E4orf4. Mostriamo anche che E4orf4 associa le membrane cellulari di lievito ed &egrave; localizzato a loro faccia citoplasmatica. Tuttavia, E4orf4 &egrave; membrana-associato anche in assenza di Ynd1, suggerendo che le proteine di membrana supplementari possono mediare la localizzazione E4orf4. Basato sui nostri risultati e su una precedente relazione che descrive un insieme di partner della proteina Ynd1, proponiamo che la coda citoplasmatica Ynd1 agisce come un&#39;impalcatura, interagendo con un complesso multi-protein, cui mira di E4orf4 conduce alla morte delle cellule.

La coda citosolica dell&#39;apyrase di Golgi Ynd1 media tossicit&agrave; indotta da E4orf4 in Saccharomyces cerevisiae.

&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4 (E4orf4) &#x3092;&#x8AAD;&#x3093;&#x3067;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x3059;&#x3068;&#x3001;E4orf4 &#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x56FA;&#x6709;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; E4orf4 &#x8A98;&#x767A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x304B;&#x3089;&#x9175;&#x6BCD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2 a &#x3068; E4orf4 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (PP2A)&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x753B;&#x9762;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; apyrase Ynd1 E4orf4 &#x3068;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059; Ynd1 apyrase &#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E; E4orf4 &#x8A98;&#x767A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;Ynd1 &#x3068; PP2A &#x548C; &#xFF08;&#xFF09; &#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D; E4orf4 &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x76F4;&#x7CFB;&#x306E; Ynd1 &#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ynd1 &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068; E4orf4 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB; E4orf4 &#x6709;&#x6BD2;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F; E4orf4 &#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x9854;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;E4orf4 &#x3055;&#x3089;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; E4orf4 &#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x4ECB;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3067;&#x3059;&#x819C; Ynd1 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x3082;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068; Ynd1 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Ynd1 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53; apyrase Ynd1 &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4 &#xC624;&#xD508; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4 (E4orf4)&#xB97C; &#xC77D;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; E4orf4 &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBE44; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140; &#xD2B9;&#xC815; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2a&#xC640; e4orf4&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; (PP2A). &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD654;&#xBA74; &#xACF5;&#xAC1C; Golgi apyrase ynd1&#xC640; e4orf4&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; Ynd1 apyrase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;. Ynd1 &#xBC0F; PP2A additively &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Ynd1&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; orthologue&#xC774; &#xC0C1;&#xD638;&#xC774; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; E4orf4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; E4orf4 &#xB3C5;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC640; e4orf4&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; ynd1&#xC758; cytosolic &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; e4orf4&#xC640; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC5BC;&#xAD74;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, e4orf4&#xC740; Ynd1&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xCD94;&#xAC00; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; E4orf4 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ynd1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xBC0F; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; Ynd1 &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBE44; &#xACC4; &#xC5ED;&#xD560;&#xB3C4; multi-protein &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

Golgi apyrase Ynd1 cytosolic &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB97C; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; E4orf4 &#xC720;&#xBC1C; &#xB3C5;&#xC131; &#xC911;&#xC7AC;.

El adenovirus E4 abierto leyendo el cap&iacute;tulo 4 (E4orf4) prote&iacute;na contribuye a la regulaci&oacute;n de la progresi&oacute;n de la infecci&oacute;n por el virus. Cuando se expresa individualmente, E4orf4 mostr&oacute; induce la apoptosis de c&eacute;lulas espec&iacute;ficas transformada no cl&aacute;sicas en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros. Por lo menos algunos de los mecanismos subyacentes de la toxicidad inducida por E4orf4 se conservan de la levadura a mam&iacute;feros, incluido el requisito de una interacci&oacute;n de E4orf4 con la prote&iacute;na fosfatasa 2A (PP2A). Una pantalla gen&eacute;tica en levaduras revel&oacute; que el apyrase de Golgi Ynd1 asocia E4orf4 y contribuye a la toxicidad inducida por E4orf4, independientemente de la actividad de apyrase Ynd1. Ynd1 y PP2A mostraron aditiva contribuyen a la toxicidad inducida por el E4orf4 en la levadura y relacionarse gen&eacute;ticamente y f&iacute;sicamente. Un mam&iacute;fero orthologue de Ynd1 fue demostrado al lazo E4orf4 en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, confirmando la conservaci&oacute;n evolutiva de esta interacci&oacute;n. Aqu&iacute;, utilizamos el an&aacute;lisis de la mutaci&oacute;n para identificar la cola citos&oacute;lica de Ynd1 como el dominio de la prote&iacute;na necesario para la mediaci&oacute;n de la se&ntilde;al de E4orf4 t&oacute;xica y la interacci&oacute;n con E4orf4. Tambi&eacute;n demostramos que la E4orf4 se asocia con las membranas celulares de levadura y se localiza en la cara citoplasm&aacute;tica. Sin embargo, E4orf4 es membrana asociada incluso en la ausencia de Ynd1, sugiriendo que las prote&iacute;nas de membrana adicional pueden mediar localizaci&oacute;n E4orf4. Basados en nuestros resultados y en un informe anterior que describe una colecci&oacute;n de socios de prote&iacute;na Ynd1, proponemos que la Cola citoplasm&aacute;tica Ynd1 act&uacute;a como un andamio, interactuando con un complejo multi-prote&iacute;na, cuya orientaci&oacute;n por E4orf4 conduce a la muerte celular.

La cola citos&oacute;lica de la apyrase de Golgi Ynd1 media toxicidad inducida por E4orf4 en Saccharomyces cerevisiae.

The adenovirus E4 open-reading-frame 4 (E4orf4) protein regulates the progression of viral infection and when expressed individually it induces non-classical apoptosis in transformed cells. Here we show that E4orf4 associates with the ATP-dependent chromatin-remodeling factor ACF that consists of a sucrose non fermenting-2h (SNF2h) ATPase and an Acf1 regulatory subunit. Furthermore, E4orf4 targets protein phosphatase 2A (PP2A) to this complex and to chromatin. Obstruction of SNF2h activity inhibits E4orf4-induced cell death, whereas knockdown of Acf1 results in enhanced E4orf4-induced toxicity in both mammalian and yeast cells, and Acf1 overexpression inhibits E4orf4's ability to downregulate early adenovirus gene expression in the context of viral infection. Knockdown of the Acf1 homolog, WSTF, inhibits E4orf4-induced cell death. Based on these results we suggest that the E4orf4-PP2A complex inhibits ACF and facilitates enhanced chromatin-remodeling activities of other SNF2h-containing complexes, such as WSTF-SNF2h. The resulting switch in chromatin remodeling determines life versus death decisions and contributes to E4orf4 functions during adenovirus infection.

The adenovirus E4orf4 protein targets PP2A to the ACF chromatin-remodeling factor and induces cell death through regulation of SNF2h-containing complexes.

E4 &#x5F00;&#x653E;&#x8BFB;&#x6846; 4 (E4orf4) &#x86CB;&#x767D;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x89C4;&#x8303;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#x65F6;&#x5B83;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x975E;&#x7ECF;&#x5178;&#x8F6C;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; E4orf4 &#x5C06;&#x4E0E; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x56E0;&#x5B50;&#x7531;&#x975E;&#x8517;&#x7CD6;&#x53D1;&#x9175;-2 h (SNF2h) ATPase &#x548C; Acf1 &#x8C03;&#x8282;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; ACF &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;E4orf4 &#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A (PP2A&#xFF09; &#x8FD9;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x3002;SNF2h &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6897;&#x963B;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x800C;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; Acf1 &#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x589E;&#x5F3A; E4orf4 &#x81F4;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; Acf1 &#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x65E9;&#x671F;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x2477; Acf1 &#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;WSTF&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; E4orf4 PP2A &#x590D;&#x6742;&#x6291;&#x5236; ACF &#x548C;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x542B;&#x6709; SNF2h &#x7684;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; WSTF SNF2h &#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6709;&#x6240;&#x52A0;&#x5F3A;&#x3002;&#x9020;&#x6210;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x786E;&#x5B9A;&#x751F;&#x547D;&#x4E0E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x671F;&#x95F4;&#x8D21;&#x732E; E4orf4 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;

E4orf4 &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; PP2A &#x5230;&#x6D3B;&#x6027;&#x78B3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x901A;&#x8FC7; SNF2h &#x5305;&#x542B;&#x7269;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

L&#39;ad&eacute;novirus prot&eacute;ine de E4 treillis-lecture 4 (E4orf4) r&eacute;glemente la progression de l&#39;infection virale et lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e individuellement il induit l&#39;apoptose non classiques dans les cellules transform&eacute;es. Nous montrons ici que E4orf4 associe le facteur d&eacute;pendant de l&#39;ATP de remodelage de la chromatine ACF qui se compose d&#39;un saccharose non ATPase de fermentation - 2 h (SNF2h) et une sous-unit&eacute; r&eacute;gulatrice Acf1. En outre, E4orf4 cible prot&eacute;ine phosphatase 2 a (PP2A) de ce complexe et &agrave; la chromatine. Entrave &agrave; l&#39;activit&eacute; SNF2h inhibe la mort cellulaire induite par le E4orf4, alors que knockdown de Acf1 r&eacute;sultats dans accrue induite par le E4orf4 toxicit&eacute; chez les mammif&egrave;res et les cellules de levure, et Acf1 surexpression emp&ecirc;che de E4orf4 de downregulate d&eacute;but ad&eacute;novirus expression g&eacute;nique dans le contexte de l&#39;infection virale. Pr&eacute;cipitation de l&#39;homologue de Acf1, WSTF, inhibe la mort cellulaire induite par le E4orf4. Selon ces r&eacute;sultats, nous sugg&eacute;rons que le complexe E4orf4-PP2A inhibe l&#39;ACF et facilite les activit&eacute;s de remodelage de la chromatine am&eacute;lior&eacute;es d&#39;autres complexes contenant de le SNF2h, comme WSTF-SNF2h. Le commutateur qui en r&eacute;sulte dans le remodelage de la chromatine d&eacute;termine la vie contre la mort et contribue aux fonctions E4orf4 au cours de l&#39;infection &agrave; ad&eacute;novirus.

La prot&eacute;ine ad&eacute;novirus E4orf4 cible PP2A au facteur de remodelage de la chromatine ACF et provoque la mort cellulaire par le biais de r&eacute;glementation des complexes contenant SNF2h.

Die Adenoviren E4 offene Leseraster 4 (E4orf4) Protein reguliert das Fortschreiten der Virusinfektion und individuell ausgedr&uuml;ckt es nicht-klassischen Apoptose in transformierten Zellen induziert. Hier zeigen wir, dass der ATP-abh&auml;ngigen Chromatin-Umbau Faktor ACF E4orf4 zuordnet, der eine Saccharose nicht g&auml;renden - 2H (SNF2h)-ATPase und ein Acf1 regulatorische Untereinheit besteht. Dar&uuml;ber hinaus zielt E4orf4 Protein Phosphatase 2A (PP2A) an diesem komplexen und Chromatin. Behinderung der SNF2h Aktivit&auml;t hemmt E4orf4-induced Zellentod, w&auml;hrend Niederschlag von Acf1 f&uuml;hrt E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t im S&auml;ugetier- und Hefezellen verst&auml;rkt und Acf1 &Uuml;berexpression E4orf4s F&auml;higkeit, gulieren fr&uuml;hen Adenovirus Genexpression im Rahmen einer Virusinfektion hemmt. Niederschlag von Acf1 Homolog, WSTF, hemmt E4orf4-induced Zellentod. Basierend auf diesen Ergebnissen empfehlen wir der E4orf4-PP2A-Komplex hemmt ACF und erleichtert die erh&ouml;hte Aktivit&auml;ten im Chromatin-Umbau von anderen SNF2h-haltigen komplexen, wie WSTF-SNF2h. Der resultierende Schalter in Chromatin Umbau bestimmt Leben versus Tod Entscheidungen und tr&auml;gt zur E4orf4 Funktionen w&auml;hrend der Adenovirus-Infektion.

Das E4orf4 Adenovirus-Protein zielt auf PP2A zum ACF-Chromatin-Umbau-Faktor und induziert Zelltod durch Regulierung der SNF2h-haltigen komplexe.

Adenovirus proteina di E4 open-lettura-frame 4 (E4orf4) regola la progressione dell&#39;infezione virale e quando espressa individualmente induce classico apoptosis in cellule trasformate. Qui vi mostriamo che E4orf4 associates con il trifosfato di Adenosina-dipendente-rimodellamento della cromatina fattore ACF che consiste di un saccarosio non fermentazione-2 h (SNF2h) ATPasi e una subunit&agrave; di regolamentazione Acf1. Inoltre, E4orf4 gli obiettivi della proteina fosfatasi 2A (PP2A) a questo complesso e a cromatina. Ostruzione dell&#39;attivit&agrave; SNF2h inibisce la morte cellulare indotta da E4orf4, mentre atterramento di Acf1 risultati in enhanced E4orf4-indotto tossicit&agrave; nei mammiferi sia le cellule di lievito, e Acf1 sovraespressione inibisce la capacit&agrave; di E4orf4 di sottoregola precoce dell&#39;adenovirus espressione genica nel contesto dell&#39;infezione virale. Atterramento dell&#39;omologo Acf1, FSMT, inibisce la morte cellulare indotta da E4orf4. Sulla base di questi risultati consigliamo il complesso E4orf4-PP2A inibisce ACF e facilita l&#39;attivit&agrave; di rimodellamento della cromatina avanzata di altri complessi contenenti SNF2h, come SNF2h FSMT. L&#39;interruttore risultante nel rimodellamento della cromatina determina la vita contro le decisioni di morte e contribuisce alla E4orf4 funzioni durante l&#39;infezione da adenovirus.

La proteina dell&#39;adenovirus E4orf4 PP2A si rivolge al fattore di rimodellamento della cromatina ACF e induce la morte cellulare attraverso il regolamento di complessi contenenti SNF2h.

E4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x8AAD;&#x66F8;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4 (E4orf4) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; E4orf4 &#x306E;&#x4EF2;&#x9593;&#x3068; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x306E;&#x975E;&#x767A;&#x9175; 2 h (SNF2h) &#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; ACF &#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x793A;&#x3059; ATPase &#x3068; Acf1 &#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2 a &#x306E; E4orf4 &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; (PP2A) &#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3002;SNF2h &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x9589;&#x585E;&#x306F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3067; Acf1 &#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x3001;Acf1 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x521D;&#x671F;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; E4orf4 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x30BA;, Acf1 &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; E4orf4 PP2A &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; ACF &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x30BA; SNF2h &#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; SNF2h &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306F;&#x751F;&#x547D;&#x5BFE;&#x6B7B;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x4E2D;&#x306B; E4orf4 &#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4orf4 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; PP2A ACF &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3057;&#x3001;SNF2h &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4 &#xC624;&#xD508; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4 (E4orf4) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC544;&#xB2CC; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; E4orf4 ATP &#xC885;&#xC18D; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xC694;&#xC18C; ATPase &#xBC1C;&#xD6A8;-2 h (SNF2h)&#xC640; Acf1 &#xADDC;&#xC815; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBE44; &#xC790;&#xB2F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xD53C; &#xC624;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2A &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; E4orf4 (PP2A)&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC744; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xACE0; chromatin. SNF2h &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBC29;&#xD574; &#xCD5C;&#xC800; acf1&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC640; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; e4orf4&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; Acf1 overexpression e4orf4&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; downregulate &#xCD08;&#xAE30; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC5B5;&#xC81C;. Acf1 &#xCCB4;, WSTF, &#xCD5C;&#xC800; E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; E4orf4 PP2A &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD53C; &#xC624;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; SNF2h &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;, WSTF SNF2h &#xB4F1;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC8FD;&#xC74C; &#xACB0;&#xC815; &#xB300; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; E4orf4 &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xD53C; &#xC624; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; pp2a&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; snf2h&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

El adenovirus prote&iacute;na E4 marco de lectura abierto de 4 (E4orf4) regula la progresi&oacute;n de la infecci&oacute;n viral y cuando expresan individualmente induce apoptosis no cl&aacute;sicas en las c&eacute;lulas transformadas. Aqu&iacute; mostramos que E4orf4 se asocia con el factor de remodelaci&oacute;n de la cromatina dependiente de ATP ACF que consiste en una sacarosa no ATPasa de fermentaci&oacute;n - 2 h (SNF2h) y una subunidad reguladora de Acf1. Adem&aacute;s, E4orf4 dirige la prote&iacute;na fosfatasa 2A (PP2A) a este complejo y a la cromatina. Obstrucci&oacute;n de la actividad de SNF2h inhibe la muerte celular inducida por el E4orf4, mientras que la ca&iacute;da de Acf1 da lugar a mayor toxicidad inducida por E4orf4 tanto en mam&iacute;feros como en las c&eacute;lulas de levadura y sobreexpresi&oacute;n de Acf1 inhibe la capacidad de E4orf4 de regular a la baja temprana adenovirus expresi&oacute;n g&eacute;nica en el contexto de la infecci&oacute;n viral. Ca&iacute;da de la Acf1 hom&oacute;logo, WSTF, inhibe la muerte celular inducida por E4orf4. Basado en estos resultados nos sugieren que el complejo E4orf4-PP2A inhibe la ACF y facilita las actividades de remodelaci&oacute;n de la cromatina mejoradas de otros complejos que contienen SNF2h, como WSTF-SNF2h. El interruptor resultante en la remodelaci&oacute;n de la cromatina determina la vida frente a las decisiones de la muerte y contribuye a E4orf4 funciones durante la infecci&oacute;n por adenovirus.

La prote&iacute;na de adenovirus E4orf4 PP2A dirige al factor de remodelaci&oacute;n de la cromatina ACF e induce muerte celular mediante la regulaci&oacute;n de los complejos que contienen SNF2h.

Tamar Kleinberger

Department of Molecular Microbiology,
Faculty of Medicine,
Department of Molecular Microbiology, Faculty of Medicine

Technion - Israel Institute of Technology

Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

Tamar Kleinberger

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular Microbiology,Faculty of Medicine,Department of Molecular Microbiology, Faculty of Medicine

Technion - Israel Institute of Technology

Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

Department of Molecular Microbiology,
Faculty of Medicine,
Department of Molecular Microbiology, Faculty of Medicine