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这项研究提出了初级小鼠子宫内膜基质和上皮细胞的分离和培养,可以在一个共同培养系统中使用体外蜕膜研究的标准化和验证的方法。
蜕膜是子宫内膜间质细胞的孕酮依赖性分化过程,并且是成功的胚胎植入的先决条件。虽然已经进行了许多努力,以揭示蜕膜的基本机制,这是在与胚胎和底层基质细胞接触的上皮细胞之间的精确信令仍然知之甚少。因此,在一个同时的上皮细胞和间质细胞到能提高对蜕膜的分子细节的知识的方式学习蜕膜。为了这个目的, 在人工蜕膜的体内模型是生理最相关;然而,细胞间通信的操作受到限制。目前, 在子宫内膜间质细胞的体外培养物正在使用的几种信号分子,调查蜕膜的调制。通常,人或小鼠子宫内膜基质细胞用过的。然而,人样品的可用性经常受到限制。此外,使用鼠组织的是伴随着在培养的方法中的品种。这项研究提出了一个有效的和标准化的方法来获得纯子宫内膜上皮细胞(EEC),并使用用雌激素治疗,连续三天的成年小鼠完好基质细胞(ESC)的文化。该协议被优化以提高产量,活力,细胞的纯度和为了研究蜕膜中欧洲经济共同体和ESC的共培养,进一步延长。该模型可以是适合于利用在蜕膜两种细胞类型的重要性,并评估细胞间通信期间由EEC或ESC分泌显著信号分子的贡献。
人子宫内膜子宫内膜和经历击穿和修理的每月的周期作为可能怀孕的制剂。它由上皮细胞衬子宫腔和根据卵巢激素的雌激素和孕激素的波动厚度而变化下面的基质的单层的。在黄体期,在排卵后孕酮浪涌会诱发子宫内膜间质细胞分化成较大,圆形蜕膜细胞,一个称为蜕膜1,2的过程。在人的,这种现象会出现自发形成predecidua,而是成为在胚胎着床更加明显。蜕膜的功能性后果是,子宫暂时变成接受胚胎着床。这个间隔被标记为"植入窗口"。在胚胎着床的初期,蜕膜ê包围植入胚胎ndometrial基质细胞将提供一个屏障,以防止有害物质的通道的胚胎3。在怀孕期间,这将蜕膜对发育中的胎儿提供营养胎盘已经发生之前,稍后会形成胎盘4的母体部分。
道德和实际的考虑限制人类研究的设计,调查蜕膜的进程,并促使用动物模型。作为hemochorial胎组的成员,啮齿动物的子宫内膜也将经历前胎5蜕膜。在啮齿动物,然而,蜕膜处理的执行依赖于在子宫腔囊胚的存在,这表明一个额外的刺激是必要触发蜕膜响应6。这意味着日之间错综复杂的通信Ë具有与胚泡直接接触子宫内膜上皮细胞,和底层基质细胞。然而,蜕膜可人为使用刺激机械划伤或油中激素催芽子宫灌注诱导。虽然在体内研究采用人工蜕膜化模型使我们能够改善我们的见解蜕膜中的复杂的信号处理,机械深入的研究, 例如,上皮细胞和间质细胞之间的通信不可缺少的调查,是有限的。因此, 在体外蜕膜研究可以用于操纵重要途径和研究基本过程。为此,主子宫内膜间质细胞培养物可以从人或啮齿动物子宫内膜建立。用人鼠类同意使用转基因动物的研究感兴趣的特定蛋白在蜕膜化过程中的作用。然而,不成熟,prepuberTY小鼠经常使用,以避免在发情周期的并发症,而在其他情况下,子宫从动情周期,这导致在培养一个异质的所有阶段收集。此外,蜕膜的过程已经在不同的协议, 例如,研究了通过(i)补充激素(雌激素,孕激素或环磷酸腺苷(cAMP)的),以在培养介质中,或由(ⅱ)在蜕膜细胞的分离从小鼠(伪)怀孕,其需求插头检查和输精管结扎男性额外需要4.5日子。这些限制展示出一种标准化方法的必要性在体外蜕膜化学习。在这项研究中,生理模型来研究体外蜕膜从成年起,无(假)孕鼠将提交。在该方法中,每日注射17β雌二醇(E2)的会诱发子宫内膜细胞的增殖,导致均匀和p增加的产量URE细胞群。此外,使用的共培养系统的允许上皮 - 间质串扰和操纵不同层次蜕膜的过程的能力的研究。
AlexaFluor
这项研究的所有动物实验由鲁汶(比利时)(项目P174 / 2013)的伦理审查委员会的批准。小鼠在标准条件下收容,与食物小丸随意访问和自来水,并保持在受控条件(23±1.5℃,相对湿度40 - 60%,12/12光/暗循环)下。
1.小鼠
2.准备
3.筹备24小时之前分离所需要的
4.分离(MEEC)鼠标子宫内膜上皮细胞的培养和小鼠子宫内膜基质细胞(MESC)
5.波形蛋白/角蛋白双染纯MEEC和卓制文化的验证
6. 在体外蜕膜在共同培养体系
注:四到五只动物中需要一个24孔板以建立共培养系统。用在无菌环境下协议继续,优选在层流柜中。
蜕膜的7.Validation定量RT-PCR
注:对于通过qRT-PCR的蜕膜的验证,所以建议以执行,以便接收单元的足够量的RNA分析中重复所有的试验条件。
如。德克拉克等人先前所述进行定量RT-PCR。 8。
简单来说:
协议的总体概述
图1A示出了协议的一般概述。每日注射E2(100毫微克),连续三天被用于同步动物和规范发情周期的阶段。动情周期可以通过阴道灌洗进行评估,并分为发情前期,发情,发情间期,并动情后期阶段。周期相可以根据在灌洗脱落细胞,它们经受荷尔蒙的变化的比例来指定。增加雌激素水平会使得动物进化到发情期。这个阶段可以容易地通过仅仅角化上皮细胞的存在和不存在的白细胞( 图1B)来检测。在第4天,动物是在发情期的子宫被收集和MEEC和卓制隔离( 图1C)。蜕膜ç一个通过在5天的孵化期加入0.5毫cAMP和1μM的MPA到2%FBS培养基来诱导。
MEEC和卓制文化的质量控制
初级细胞培养物的纯度可以通过在波形蛋白和细胞角蛋白表达的差异进行评估。波形蛋白是间充质细胞中表达,因此,在子宫内膜间质细胞的中间丝。角蛋白是在上皮组织的细胞骨架中找到的中间丝。 图2A示出了使用QRT-PCR中MEEC和卓制波形蛋白和细胞角蛋白的mRNA表达水平进行评估。波形蛋白水平在卓制高和低MEEC(2.2倍高,P <0.001),而细胞角蛋白水平在MEEC高和低卓制(高36倍,P <0.001)。执行了波形/角蛋白双染,并指出,基质细胞表达波形蛋白,而epithelial细胞表达细胞角蛋白( 图2B,C)。没有初级抗体被用作免疫染色( 图2D,E)的阴性对照。这些免疫组织学染色显示,无论子宫内膜细胞培养物(MEEC和卓制)具有高达90%的纯度。
蜕膜在MEEC / MESC共培养
分离后,小鼠子宫内膜癌和基质细胞的共培养系统接种以模仿内膜环境。细胞培养,直至上皮细胞中的细胞培养插管形成单层(800 TEER值 - 1,000 /孔),和间质细胞达到亚铺满状态。蜕膜是在基质细胞用0.5mM cAMP的应用和1μM的MPA诱导。温育后的五天,催乳素mRNA水平在所述基质细胞通过qRT-PCR评估作为decid的指示ualization( 图3A)。催乳素水平在经受激素和检测不到与对照培养基(P <0.01)温育的细胞的细胞中高表达。
由于上皮细胞是难以在细胞培养插入物内部可视化,生存力测定五天潜伏期( 图3B)后立即进行。正常生长介质和存活力试剂的混合物加入到孔中,并孵育一段最小8 - 12小时。颜色从蓝色转变为明亮的粉红色表示可行的上皮细胞的存在。注意,当活细胞存在色移才会发生。
图1:协议的总体概述。 (A)开始的三个隔离协议方案雌激素注射的连续天。在第3天,进行必要的准备,应制备。在第4天,发情期通过执行阴道灌洗评价(由星号表示)。卓制和MEEC使用不同的消化步骤孤立。在第6天,或者当细胞汇合时,蜕膜可以在共培养系统中加入cAMP和MPA到介质和五天的潜伏期( - 11 6天)诱导。 (B)中的发情期在阴道灌洗特征在于角化上皮细胞的存在的代表性图(放大率10X)。 (C)和卓制MEEC的代表图(放大率20X,比例尺:100微米)。 请点击此处查看该图的放大版本。
的图2:免疫染色和定量RT-PCR检测波形蛋白和细胞角蛋白在MEEC和卓制。 ( 一 )波形蛋白和细胞角蛋白表达的信使RNA水平,表明文化的纯洁性。 RNA水平相对定量来持家基因ACTB和TBP的几何平均值。数据显示为平均值±SEM表示。上海卓制培养(B)和MEEC文化(C)波形/角蛋白双染。插入左侧显示了63X放大视图。阴性对照,省略了卓制(D)和MEEC(E)的第一抗体(比例尺:50微米)。 ***:P <0.001与Bonferroni校正多个测试双向ANOVA。 请点击此处查看该图的放大版本。
图3:通过RT-PCR蜕膜验证。在间质细胞催乳素表达(A)mRNA水平来评价蜕膜。 RNA水平相对定量来持家基因PGK1和TBP的几何平均值。在控制或蜕膜培养基中培养的细胞的倍数变化表示为平均值±SEM表示。 (B)的前(上)和后(底)蜕膜刺激基质细胞的说明性图片。右边的插入物示出了蜕膜间质细胞的倍率。蜕膜的特征在于多核细胞的存在,由黑色箭头指示。 (C)的上皮细胞活力在测定后插入物评估的代表性图像。照片中的生存能力试剂的管理(Prestoblue)(0 h)和歼之后马上拍摄ollowing上午(ON)。 **:P <0.01曼 - 惠特尼U检验。 ON:过夜。比例尺:100微米。 请点击此处查看该图的放大版本。
蜕膜是子宫内膜间质细胞的孕酮依赖性分化成圆形分泌蜕膜细胞。在人类,该方法在月经周期的黄体期自发发生,并且在围绕血管细胞以形成predecidua基质细胞被启动。然而,在啮齿动物中,胚泡的存在是必要的,以诱导蜕膜。该蜕膜仅与子宫内膜上皮细胞接触后发生的事实意味着,重要的因素是由上皮细胞分泌诱导蜕膜在下面的基质。虽然在蜕膜过程开始这种差异应该承认,即人的蜕膜变得在胚胎着床更健壮的事实表明,类似的机制可以参与。 体外细胞培养物经常用于研究蜕膜的过程中特定分子的效果。尽管如此,可收集的可用性和人体组织的量通常是有限的,并伴随着变化, 例如,周期相,怀孕次数和妇科疾病,如子宫内膜异位症或子宫腺肌病存在。许多这些问题都可以通过使用鼠组织容易触及和独立周期阶段来预防。用小鼠组织的另一个强大的优势是使用转基因老鼠的机会,并有可能建立了大量的实验。此刻,许多不同的隔离协议已经在文献中,在动物的年龄高变异性,并在使用的时刻在发情期的期间中所述。
这项研究提出了基质和上皮细胞,其中的优势是由现有的隔离每日注射雌激素所取的标准化发情周期的初级内膜共培养物的新方法。此外,雌激素为known诱导增殖的上皮和间质细胞,这进一步增加每隔离的产率。本文中所描述的隔离协议基于Grant 等。 7,但是,被包括进一步的优化步骤,以提高产率,纯度,以及不同的细胞培养物的生存力。首先,HBSS总是补充有抗生素,以避免原代培养的污染。期间MEEC的隔离,一个温度适应已完成(在37℃下15分钟),以增加所述第一消化过程中的上皮细胞的收获。接着,一个附加的步骤中包括通过加入培养基含有FBS的以抑制其活性的胰蛋白酶消化后回火酶活性。此外,MEECs是通过一个过滤器的网孔比是通常描述(100微米),因为它们常常是在集群和细胞片较大传递。此外,通过基质细胞污染减少了执行一个附加itional步骤,其中MEECs和MESCs是基于重力沉降分离出来。最后,MEECs接种在胶原包被的盖玻片,以增加细胞对盖玻片附件,因为很明显,附着到未涂覆或PLL涂覆的玻璃盖玻片是不够的。期间MESCs的隔离,胶原酶(1毫克/毫升)进行了补充,以改善消化。此外,该消化步骤重复进行,以避免残留MEECs的污染。所有这些额外的步骤导致同质细胞群的纯净和可行的文化。
细胞群的纯度用免疫染色和定量RT-PCR,使用波形蛋白作为基质标记物和细胞角蛋白作为上皮标记物进行了评价。显然,在MEEC和卓制观察波形蛋白和细胞角蛋白的相对表达模式。然而,可以注意到,波形蛋白和细胞角蛋白的相对mRNA表达是在MEEC培养物相似。 Simil芳结果由其他研究小组发表的,其中上皮细胞中培养的获取波形蛋白表达9。更重要的是在波形蛋白和如在不同的细胞群的免疫组织学染色观察细胞角蛋白之间的蛋白表达的差异。双重染色显示,EECS阳性细胞角蛋白和ESC呈阳性波形。在免疫染色中使用这些标记物的是一个既定的方法和标准地用于指示细胞类型10。
虽然大量的研究已在卓制的蜕膜进行,所以该上皮细胞在此模型中的存在可能会改变蜕膜的结果仍然是可能的。首先,已经表明,如果MEEC生长到单层中卓制条件培养基的存在下或在共培养设置,该单层具有改进的上皮细胞的跨上皮电阻(TEER),由卓制7分泌的因素造成。此外,Pierro 等。 11提供的证据表明,上皮细胞增殖,通过17β雌二醇的影响,可能会被从所述基质细胞分泌的因子介导的,并且可替代地,上皮细胞可以释放该调制基质蜕膜12,13的因素。总体而言,很明显,上皮 - 间质共培养环境提供了更多的生理状况,它允许旁分泌相互作用和通信。被描述采用一个插入共培养系统中培养两种不同的细胞类型的方法更早14,15和被改编为使用鼠原代细胞。由检测催乳素mRNA水平作为读出对蜕膜的,所描述的技术具有可和允许非常可重复的读出为蜕膜Ş从而蜕膜化过程中的上皮 - 间质关系的研究。从MEEC介导的旁分泌信号可能改变蜕膜化程度的间质细胞。此外,该模型允许上皮侧的特定调制而不直接影响基质细胞。因此,MEEC和卓制的此共培养提供了评估激素,细胞因子等对上皮细胞上的基质蜕膜一个读出的效果的理想工具。此共培养体系的另一个优点是,它允许研究人员研究的特定蛋白在蜕膜过程中任一上皮或间质隔室通过使用从转基因动物分离的细胞的参与。此外,这种技术将是非常有益的,调查胚泡粘合性评价通过上皮细胞的胚泡的存在下分泌的旁分泌因子是否足以诱导底层基质的蜕膜细胞。在滋养细胞浸润的一个重要步骤相关的细胞外基质降解,这是由蛋白水解酶的作用介导的。所提出的技术也可应用于作为体外模型来研究胚泡,上皮细胞和支承基质之间的串扰。
然而,此刻知之甚少的上皮细胞可以是如腺以及管腔的起源。因此,需要的上皮细胞的遗传和分子分布的进一步表征。此外,所描述的方法是在对上皮细胞的偏振的可用知识的限制。此刻,上皮细胞的偏振没有考虑。然而,在膜蛋白表达的差异在顶和基膜进行说明。上皮细胞层的不适当偏振可能对epitheli之间的旁分泌相互作用的冲击人与基质细胞。然而,方法获得极化上皮细胞中已被描述,并且可以包括在所描述的技术15,16。
总之,所描述的协议提出的技术成功建立小鼠子宫内膜上皮细胞和基质细胞原代细胞培养。这种技术在纯细胞培养物的结果通过qRT-PCR和波形蛋白和细胞角蛋白的免疫染色证实。最终来说,上皮细胞和基质共培养引进,允许通过任何MEEC和/或卓制在蜕膜过程介导的旁分泌信号的调查。
作者什么都没有透露。
这项工作是由来自研究基金会 - 弗兰德(FWO G.0856.13N)和鲁汶研究理事会(OT / 13/113)资助。 KDC由比利时FWO资助。 AH被OT /一百十三分之十三资助。我们要感谢的鲁汶(http://gbiomed.kuleuven.be/english/corefacilities/microscopy/cic/cic.htm)的细胞成像核心设施的利用共聚焦显微镜。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
ThinCert Tissue culture insert for 24 well plates; 1 µm pore size; transparant | Greiner Bio-one | 662610 | Inserts are also provided for other multiwell plates and/or other pore sizes. Other suppliers: Merck Millipore. https://shop.gbo.com/en/row/articles/catalogue/article/ 0110_0110_0090_0030/13408/ |
Nunc Cell culture treated 24 well plates | Thermo Scientific | 142475 | http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/142475 |
8-Bromoadenosine 3′,5′-cyclic monophosphate sodium salt | Sigma Aldrich | B7880 | Prepare a stock solution of 100 mM in Milli Q water. Store aliquots at -20 °C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b7880?lang=en®ion=BE |
Medroxyprogesterone 17-acetate | Sigma Aldrich | M1629 | Prepare a stock solution of 250 µM in ethanol. Store aliquots at -20 °C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m1629?lang=en®ion=BE |
Arachis oil | Supermarket | Standard cooking arachis oil that can be found in every supermarket is used | |
PrestoBlue cell viability reagent | Thermo Scientific | A13261 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A13261?ICID=cvc-prestoblue-c1t1 |
HBSS 1x, no calcium, no magnesium, no phenol red | Gibco | 14175-046 | Store in fridge as long as possible. Use cold HBSS+ during the protocol. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14175046 |
17-β Estradiol | Sigma Aldrich | E8875 | Prepare a stock solution of 1 mg/mL in EtOH before diluting in arachis oil (1:1,000). http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/e8875?lang=en®ion=BE |
Cell medium filter Stericup, 0.22 µm, polyethersulfone, 500 mL, radio-sterilized | Merck Millipore | SCGPU05RE | http://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Stericup-GP%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-500%C2%A0mL%2C-radio-sterilized,MM_NF-SCGPU05RE |
Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL) | Gibco | 15070-063 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15070063?ICID=search-15070-063 |
DMEM/F12, phenol red, L-glutamine, HEPES | Gibco | 11330-032 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/11330057?ICID=search-11330-057 |
Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, E.U.-approved, South America Origin | Gibco | 10500-056 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10500064?ICID=search-10500-064 |
Amphotericin B | Gibco | 15290-018 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15290018?ICID=search-15290-018 |
Gentamicin (50 mg/mL) | Gibco | 15750-037 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15750037?ICID=search-15750-037 |
DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red | Sigma Aldrich | D5921 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5921?lang=en®ion=BE |
MCDB-105 | Sigma Aldrich | M6395 | Dilute in Milli Q water, adjust pH to 7 with NaOH and filter before use. Store in the dark. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6395?lang=en®ion=BE |
Insulin from bovine pancreas | Sigma Aldrich | I1882 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/i1882?lang=en®ion=BE |
Coverslips, glass, 18 mm Ø | Glaswarenfabrik Karl Hecht | 1001/18 | http://www.hecht-assistent.de/187/?L=1&tx_rmproducts_pi1[g]=937 &tx_rmproducts_pi1[p]=3504 &tx_rmproducts_pi1[v]=20088 &cHash=abd12065683fe74b00eaa 5e562824d06 |
Poly-L-lysine | Sigma Aldrich | P2636 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p2636?lang=en®ion=BE |
Collagenase type IA from Clostridium histolyticum | Sigma Aldrich | C2674 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2674?lang=en®ion=BE |
DPBS, no calcium, no magnesium | Gibco | 14190-094 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14190094?ICID=search-14190-094 |
Trypsin from bovine pancreas | Sigma Aldrich | T7409 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t7409?lang=en®ion=BE |
Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red | Gibco | 25300-054 | Warm to room temperature before use. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/25300054?ICID=search-25300-054 |
Cell strainer, 40 µm mesh, disposable | BD Falcon | 352340 | https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680 |
Cell strainer, 100 µm mesh, disposable | BD Falcon | 352360 | https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680 |
Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22 µm, polyethersulfone, 33 mm, gamma sterilized | Merck Millipore | SLGP033RS | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Millex-GP-Syringe-Filter-Unit%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-33%C2%A0mm%2C-gamma-sterilized,MM_NF-SLGP033RS?bd=1 |
Acetic acid (glacial) 100% | Merck Millipore | 1.00063 | https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Acetic-acid-%28glacial%29-100%25,MDA_CHEM-100063 |
Collagen I | Corning | 354236 | From rat tail. https://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-BR/Shopping/ProductDetails.aspx?categoryname=& productid=354236%28 Lifesciences%29# |
Pancreatin from porcine pancreas | Sigma Aldrich | P3292 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p3292?lang=en®ion=BE |
35 mm Tissue Culture Dishes, Polystyrene, Sterile | BD Falcon | 353001 | https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4675630 |
Ethanol absolute AnalaR NORMAPUR ACS, Reag. Ph. Eur. analytical reagent | VWR Chemicals | 20821296 | https://uk.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=20821.310DP |
monoclonal rabbit anti-human vimentin (D21H3) | Cell Signalling Tech | #5741 | Use 1/500. http://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/vimentin-d21h3-xp-rabbit-mab/5741 |
monoclonal mouse anti-human pan cytokeratin | Sigma Aldrich | C2562 | Use 1/1,000. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2562?lang=en®ion=BE |
Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS | Affymetrix | 19943 | http://www.affymetrix.com/catalog/130621/USB/Paraformaldehyde+Solution+4+percent+in+PBS#1_1 |
Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/SIAL/X100?lang=en®ion=BE&gclid= Cj0KEQjwhN-6BRCJsePgxru9iIw BEiQAI8rq 879lESeuIU4N4AEQRLNEXj4f 8z65KkD-q8Xr35sQDRgaAp-k 8P8HAQ |
Goat serum | Sigma Aldrich | G9023 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g9023?lang=en®ion=BE |
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Thermo Scientific | A-11034 | http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=488& resultPage=1& resultsPerPage=15& autocomplete=& searchMode=keyword& productTypeSelect=antibody& targetTypeSelect =antibody_secondary& species=ltechall&keyword= 488#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Oryctolagus%20cuniculus\%22$;;conjugates:^\%22Alexa%20Fluor®%20488\%22$;; |
Goat anti-mouse Alexa Fluor 594 | Thermo Scientific | A-11032 | http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=594& resultPage=1& resultsPerPage=15& autocomplete=& priorSearchTerms=& searchMode=keyword& productTypeSelect=antibody& targetTypeSelect= antibody_secondary& species=ltechall& keyword=594#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Mus%20musculus\%22$;; |
VECTASHIELD mounting medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | http://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium-with-dapi.html |
DPBS, with calcium and magnesium | Gibco | 14040174 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14040133 |
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