在小鼠的 Y-Maze 障碍任务中，慢性应力转移与工作量相关的选择行为

摘要

Y-maze 障碍任务是一种行为测试，用于检查花费精力获得奖励的动机。在这里，我们讨论测试多个经过良好验证的慢性压力，包括慢性皮质酮和社会失败压力与这种行为，以及新的慢性非歧视性社会失败压力（CNSDS），这是有效的女性。

摘要

情绪障碍，包括严重的抑郁症，可以由慢性压力沉淀。Y-maze 障碍任务是一项与努力相关的选择测试，用于衡量花费精力和获得奖励的动机。在小鼠中，慢性压力暴露会显著影响与无压力小鼠相比，价值较低的奖励可获得更高价值奖励的动机。在这里，我们描述了慢性皮质酮管理范式，它产生了在Y-maze屏障任务中努力响应的转变。在 Y-maze 任务中，一只手臂包含 4 个食物颗粒，而另一只手臂只包含 2 粒。在小鼠学会选择高奖励手臂后，在多个测试会话中，随着高度逐渐增大的障碍被引入到高奖励臂中。不幸的是，大多数慢性应激范式（包括皮质酮和社会失败）是在雄性小鼠中发展起来的，在雌性小鼠中效果较低。因此，我们还讨论了慢性非歧视性的社会失败压力（CNSDS），这是我们开发的一种压力范式，对雄性小鼠和雌性小鼠都有效。在雄性小鼠和雌性小鼠中重复具有多个不同慢性应激因素的结果，加上增加使用翻译相关行为任务，将有助于增进对慢性应激如何沉淀情绪障碍的理解。

引言

情绪障碍，如抑郁和焦虑在当今社会非常普遍。几十年的工作不断寻求改进的治疗和相关啮齿动物模型，以研究这些复杂的疾病^1。慢性压力是情绪障碍的一个促成因素，如^{抑郁症2。}因此，慢性应激范式，如慢性社会失败应激（SDS）和慢性皮质酮给药（CORT）在雄性小鼠中发展，现在被广泛用于评估慢性压力暴露的神经生物学和行为效应。用于评估慢性应激影响的最广泛使用的行为测试包括与回避行为相关的任务，如升高加迷宫、开阔场和新奇的抑制喂养，或具有抗抑郁疗效，如强制游泳测试。然而，啮齿动物的这些行为可以说缺乏面子，更重要的是，预测有效性和转化相关性的人类疾病，如抑郁症。

一种流行的慢性应激范式，慢性不可预知的轻度应激（CUMS），已被广泛验证使用的行为，如蔗糖偏好^3。与水相比，CUMS减少了对1%蔗糖溶液的偏好，在历史上被解释为与非同性相关的行为^4,4，5。然而，这种减少蔗糖偏好没有观察到在患有严重抑郁症^{,6，7的人类}。此外，蔗糖的偏好不允许学习努力奖励动机。

最近，一些研究已经把焦点转移到了与动机和奖励^{相关的其他行为上,。}这些任务具有有希望的转化价值，因为在人类和啮齿动物中可以进行相对相似的行为评估。在这里，我们描述了 CORT 和 SDS 范式及其在 Y-maze 障碍行为任务中的影响，该任务衡量了为奖励而付出努力的动机。然后，我们讨论了一个新的慢性压力范式，我们开发了，慢性非歧视性的社会失败压力（CNSDS），这是有效的男性和女性小鼠。

慢性皮质酮给给（CORT）是一种模式，旨在模拟慢性压力，而不用实际压力暴露。通过压力激活下丘脑-垂体-肾上腺轴，导致^人类内源性释放肾上腺类固醇皮质醇^{10、11、1211,12}和皮质酮^{在小鼠13、14。,14}通过^,成年雄性小鼠的饮用水输送皮质酮至少4周，导致在避免任务，如开放领域，高架加迷宫，和新奇抑制喂养10，11，12，13，14，15，16^,14,15的不适应^{10,11行为反应}。^12,13有趣的是，CORT还影响工具任务^{16、17、18、19,17,18,中的奖励处理}。此处描述的 CORT 范式产生的血清浓度一致低于 100 ng/mL CORT，比强迫游泳等急性应激器产生的血清浓度^{低五倍以上}。因此，慢性 CORT 给药不太可能导致高皮质血症。虽然慢性 CORT 只对雄性^{小鼠 20}有效，但我们最近证明，在 Y-maze 屏障任务²¹中，它产生了一个有力的反应。据我们所知，这是研究慢性压力对雄性小鼠21中与努力相关的选择行为的影响的首批^研究之一。先前的一项研究首次证明了急性克制压力对²²大鼠基于努力的决策的影响。在与努力相关的选择行为中，动物选择要么为高价值奖励而付出努力，要么接受更自由获得的价值较低的奖励。在人类中，奖励任务（EEfRT）的工作量支出是一种电脑游戏，它开发起来类似于^老鼠23中的与工作量相关的选择任务。抑郁症导致EEfRT的不适应反应（为高价值奖励选择硬任务的可能性降低）。因此，啮齿动物中与努力相关的选择任务特别有趣，因为它们具有转化相关性。

慢性社会失败压力（SDS）是男性小鼠中应用最广泛的临床前应激模型之一。这是一个为期10天的协议，大型，侵略性退休饲养员CD-1雄性攻击实验鼠，通常C57BL/6J，在5分钟的每日会话^24。这在实验小鼠的子集中产生一个健壮的不适应行为表型。社会相互作用测试用于将小鼠分层为受失败应力的弹性或易感人群，一些研究利用 SDS 的这一独特特性来探索压力依赖和易感性背后的分子和神经回路机制。在这里，我们描述了 CORT 范式的细节及其实现 Y-maze 障碍行为任务。我们还讨论了 Y 迷宫障碍任务中的 SDS 效果。Y-maze障碍任务是基于T-maze障碍任务，它主要用于大鼠，以衡量动机，以花费努力高或低奖励目前在迷宫^{,8，9，2598的两个武器}。这项任务也已被实施，以研究在小鼠施用咖啡因或多巴胺拮抗剂在^{小鼠26的努力反应}。啮齿动物可以通过攀登迷宫中一个臂的逐渐增加高度的障碍物来花费更大的精力，获得更高的奖励价值，通常为 4 个奖励颗粒，或在迷宫的另一个手臂上花费更少的精力，只获得 2 个奖励颗粒⁹。10天的社会失败范式在易感小鼠中产生一个健壮的不良表型，持续约30天，因此我们修改了Y-maze屏障任务，以更快速地训练和测试动物，以便在这30天的时间内^{完成所有实验24。}因此，在这里，我们还详细介绍了Y-maze障碍行为任务协议，其中包含浓缩训练课程和单障碍测试课程，以衡量在慢性压力暴露小鼠中花费精力奖励的动机。

不幸的是，慢性皮质酮和慢性社会失败压力在雄性小鼠中发展，在雌性小鼠中效果较低。这是非常成问题的，因为女性比男性更容易被诊断出患有情绪障碍，如抑郁症^1。巧妙地适应SDS已经允许在雌性小鼠使用，但需要困难的手术或乏味的尿液收集^{26，27。26,}我们最近描述了对SDS范式的简单修改，称为慢性非歧视性社会失败压力（CNSDS）。CNSDS允许对实验雄性小鼠和雌性小鼠进行易感^{和弹性分层}。雌性小鼠和雄性易感小鼠暴露在CNSDS显示，在高架加迷宫中，在开阔的场地和中心，在新奇抑制的喂养中，避免张开双臂的延迟增加。CNSDS 也比对 SDS 的其他修改效率更高，因为两性在失败会话中结合在一起。这导致实验鼠的产量增加，而没有相关的时间和努力增加，需要完成协议。因此，我们以最近发展起来的慢性压力范式来深入介绍本手稿。

研究方案

这些实验是按照NIH实验室动物护理指南进行的，并经罗格斯大学机构动物护理和使用委员会批准。

1. 慢性皮质酮（科特）

1. 随机将小鼠分配给治疗组。随机将成年雄性C57BL/6J小鼠分成车辆和皮质酮（CORT）组。
   1. 将车辆小鼠放在不同的笼子里，而将科特老鼠放在其他笼子里，因为他们的治疗是通过笼子的水瓶进行的。
   2. 将特殊的水卡贴上标签放在笼子里，通知动物护理人员水瓶中含有实验所需的溶液。
2. 通过将 3.375 g 的 β-环糊精溶解到 750 mL 的自来水中，在尺寸为 1 L 的螺丝顶玻璃容器中，制定车辆解决方案。
   1. 用此溶液填充车辆笼式水瓶。确保瓶子不会泄漏以测量液体消耗量。
   2. 标记容器，并在实验室的货架上以室温存放。使用车辆溶液填充笼瓶约 1 周。
   3. 整星期重新灌装车辆瓶。必要时在一周内重新灌装笼瓶1x-2倍。在开始或结束时每周更换1次新鲜瓶子。
      注:一周后，β-环糊精将开始覆盖水瓶内部，使溶液浑浊。
   4. 监测每周两次消耗的液体量并记录。称重每个瓶子并记录下来，小心不要溅出任何液体。重新填充并退回每瓶。
      注:5只老鼠的笼子将在3-4天内饮用80-120mL的液体。
3. 首先将 3.375 g 的 β-环糊精溶解到 750 mL 的自来水中，在尺寸为 1 L 的螺丝顶玻璃容器中，使 CORT 解决方案成为。"然后加入26.25毫克皮质酮。
   1. 声波皮质溶液将COR蒂溶解入水中。将容器放在超声波清洁水浴中。声波在40千赫兹约30分钟或直到皮质酮溶解和液体看起来清晰。
      注:超声波均质器（尖端式）对溶解COR特也非常有效。
   2. 用溶液填充所有 CORT 笼的水瓶。标签容器和储存在室温在实验室的货架。CORT溶液可用于灌装笼瓶约1周。
      注:使用棕色玻璃水瓶或塑料不透明瓶，因为 CORT 对光敏感。
   3. 监测每周两次的液体消耗量并记录。每周称量所有车辆和 CORT 小鼠，将消耗的液体与每个笼内小鼠的重量进行比较。
   4. 要确定消耗的液体量（mL/g/天），请使用以下公式:
      （过去 3-4 天饮用的体积笼） / （笼中小鼠的平均体重） X 自车辆或 CORT 瓶重新填充以来的天数）
      注:平均笼内n=5成年雄性C57BL/6J小鼠将平均消耗0.25~0.30毫克/克/天，这通常保持一致，通过广告利比图姆和食物缺乏的时间段。这些浓度导致大约剂量24毫克/千克/天β-环糊精，和9.5毫克/千克/天^{CORTA15，16,16}。
4. 社会失败压力 （SDS）
   1. 使用标准的社会失败压力协议，如在其他地方的深度描述^{24，29。24,}
5. Y-迷宫障碍任务
   1. Y-maze 屏障任务的食物剥夺
      1. 在完成社交互动测试的第二天，称重所有对照和实验小鼠。这将是他们的自由喂养体重。
         注意:在这里，我们使用"控制"和"实验"来指SDS控制和SDS实验小鼠，以及车辆和CORD管理的小鼠在各自的SDS和CORD范式。
      2. 要食物剥夺小鼠，只删除实验室周从C57BL/6J侧的每个笼子。
      3. 称重所有小鼠，以及每天给予的实验室周量，以便在整个测试过程中将体重适当保持在自由喂养重量的大约 90%。
         注:每只老鼠或老鼠在家庭笼子里提供的食物量将取决于体重波动和Y-maze每天训练或测试时消耗的奖励颗粒量。
      4. 熟悉奖励颗粒。将一小勺20毫克的谷物食品颗粒（Bio-Serv）放入家庭笼子。这将建立熟悉颗粒，并激励小鼠在Y-maze中习惯和初始训练课时食用它们。
6. Y-maze 仪器
   1. 构建一个不透明的白色 3/16" 宽的 Plexiglas 的 Y 迷宫结构，三只手臂长 26 厘米，高 20 厘米，宽 7 厘米。
   2. 使用在 Y-maze 中的插槽之间滑动的分隔线，使研究人员能够关闭最初放置鼠标的启动框，或在选择并进入 Y 迷宫的左臂或右臂后将鼠标控制在一只手臂上。
   3. 为垂直侧创建多个 10、15 和 20 厘米高的 Y 迷宫屏障，并在后角侧以大约 45° 角使用 Plexiglas。这允许 C57BL/6J 小鼠抓住并爬上每个屏障的垂直铁丝网侧，然后沿着障碍物的倾斜 Plexiglas 侧移动。
      1. 在倾斜的一侧添加细步，以更大的牵引力。
7. Y-maze 习惯
   1. 将所有控制和实验小鼠都用于Y-maze仪器。
      1. 食物匮乏后的第二天，将大量20毫克谷物食品颗粒（例如，Bio-Serv）放在50 mL离心管的盖子上，放在Y-maze的每个手臂的末端。这些大写字母作为小鼠的小食物容器，老鼠会很容易学会吃食物颗粒。
      2. 将每只鼠标放在 Y 迷宫的启动框中，将启动框分隔器放置到位。
      3. 几秒钟后，拆下分隔线，允许每只鼠标探索 Y 迷宫 15 分钟。这一时间允许鼠标充分探索迷宫的所有手臂，并建立熟悉设备。
         注:有些老鼠在第一个习惯日可能不摄入任何食物颗粒。
   2. 第二天，使用相同的程序完成第二个 15 分钟 Y-maze 习惯。
      1. 注意任何没有吃过任何颗粒的小鼠。对于这些老鼠，再把一小勺颗粒倒进它们的笼子里。
8. Y-maze 强制选择训练
   1. 为每只鼠标指定高奖励 （HR） 和低奖励 （LR） 手臂。
      1. 随机分配小鼠在控制和实验组左臂作为高奖励 （HR） 手臂和右臂作为低奖励 （LR） 手臂， 反之亦然.因此，在左侧、HR 臂的每个试验中，将有 4 粒，右侧、LR 臂或相反部分提供 2 粒。
      2. 平衡控制和实验组中这些指定的 LR 和 HR 臂，使每组中大约一半的左臂作为 HR 臂，一半以右臂作为 HR 臂。
   2. 强制选择试验
      1. 经过2天的Y-maze习惯，让老鼠开始3天的10次强制选择训练的试验。
      2. 对于每个强制选择试验，将鼠标放在启动框中，然后移除分隔线，允许鼠标 60s 进入左臂或右臂并消耗可用的颗粒。对于每个强制选择试验块关闭相反的手臂与分隔器，迫使鼠标选择另一个手臂。对于 HR 强制选择试用，阻止访问 LR 臂，反之亦然。
      3. 试验后取出鼠标，补充被吃掉的颗粒。
      4. 在每个训练日对每只小鼠进行备用强制选择试验，使小鼠完成 5 HR 和 5 LR 强制选择试验。
         注:强制选择试验训练小鼠将一只手臂与较高的奖励关联，另一只手臂与较低的奖励关联。
      5. 将鼠标放回其主笼中，然后运行不超过3-5个后续小鼠，以便保持每只小鼠5分钟的间隔。
9. Y-maze 自由选择培训
   1. 自由选择试用
      1. 通过 HR 和 LR 臂强制选择试用开始每个自由选择会话。因此，在开始10次自由选择试验之前，小鼠将经历被强迫进入每只手臂。
      2. 将每只鼠标放在启动框中并拆下分隔线。一旦鼠标选择了一只手臂，并穿过它到包含颗粒的杯子的末尾，将臂分隔器放在该侧的位置，锁定在鼠标中，直到它消耗了颗粒。
      3. 将鼠标取出回其主笼，并运行该周期中使用的后续 3-5 只小鼠，以便获得 5 分钟的试验间间隔。
   2. 记录以下数据:选择手臂的延迟、手臂选择和到达颗粒杯的延迟。
      1. 记录鼠标进入并完全穿过颗粒杯的臂。还要记录延迟以选择该臂并到达颗粒杯。
      2. 考虑任何试验，如果鼠标未能选择手臂或不消耗所有4或2粒作为省略的试验。
   3. 70% 自由选择标准
      1. 记录每天为所有 10 个自由选择试用选择的手臂。
      2. 在自由选择培训日（70% 标准）的 10 项试验中，有 7 项选择 HR 臂，则将鼠标移到障碍测试会话中。
         注:继续自由选择培训，直到所有小鼠达到 70% HR 臂标准，以确保对 HR 臂和 LR 臂的充分歧视，并确保小鼠表现出对 HR 臂的同等偏好。
10. Y-maze 障碍测试
    1. 10 厘米障碍测试会话
       1. 将 10 厘米的屏障放在 Y 迷宫中人力资源臂的半路上。
       2. 从两臂的多项强制选择试验开始。耐攀爬障碍的老鼠可以提示一个长，薄的Plexiglas片。
          注:根据经验，我们建议在每次课程开始时，在新的屏障高度下，对 HR 和 LR 臂进行至少 2 次强制选择试验。我们建议记录试验，其中有必要提示鼠标爬过屏障，如果有必要。老鼠通常学会爬过10厘米的屏障，这是不是那么高，他们无法忍受，看到它，在1-2试验。对于以相反手臂为指定人力资源臂的小鼠，必须将屏障放置在另一侧。
       3. 将每只鼠标放在启动框中，取出分隔线，让鼠标穿过迷宫，并选择一只手臂进行 10 个自由选择试验，其中包含 HR 臂中 10 厘米的屏障。
       4. 如果鼠标选择HR侧，它会爬过障碍，以获得更大的回报，4粒。否则，它会选择LR手臂，只需穿过迷宫的地板，获得较小的奖励，2粒。
       5. 记录所选臂，以及选择手臂并到达颗粒杯的所有试验的延迟。同样，每个周期旋转 4-6 只小鼠，以保持 5 分钟的试间间隔。
          注:在 Y-maze 中喷洒 70% 乙醇，并在每只鼠标之间一致地擦干。
    2. 15 厘米障碍测试会话
       1. 第二天完成上述所有步骤（步骤 1.10.1），但人力资源臂有 15 厘米高的屏障。
    3. 20 厘米障碍测试会话
       1. 第二天完成上述所有步骤（步骤 1.10.1），但人力资源臂中有 20 厘米高的屏障。
          注:根据经验，大多数SDS易感或CORT实验鼠（甚至几个对照小鼠）的屏障高度为20厘米，它们会转向LR手臂，因为它们没有足够的动力爬过20厘米高的屏障。此外，Plexiglas 适配器可能需要使用，以防止小鼠从这个屏障的顶部爬到 Y 迷宫壁的边缘。我们不建议建立一个更高的Y-maze，因为实验者将更难在每个杯子中重新填充颗粒，并在每次试验后取出小鼠。
    4. 奖励歧视测试会议
       1. 为了确保对照和实验鼠都表现出足够和相似的奖励歧视杠杆，请进行歧视测试。
       2. 按照上述所有步骤（步骤 1.10.1），但在 LR 臂上放置一个 10 厘米的屏障。现在，两只手臂都含有10厘米的屏障，老鼠需要爬过去才能获得4或2粒的奖励。
       3. 记录所有 10 个试验的延迟和手臂选择。
          注:由于小鼠必须花费同样的精力才能获得任何奖励，因此小鼠在大多数试验中应选择人力资源臂。要检查延迟以选择 HR 和 LR 臂，请计算每个单个鼠标的 HR 臂平均延迟和平均 LR 臂延迟。然后，比较延迟，使用双向混合的 ANOVA 选择两臂，SDS（控制、SDS-可影响、SDS-弹性）作为主体之间的因子，而手臂（HR 臂、LR 臂）作为主体内因子。

2. 长期非歧视性的社会失败压力

1. CD-1 鼠标中攻击性行为的屏幕
   1. 将一只雄性和一只雌性 C57BL/6J 小鼠放入每个 CD-1 的家笼中，使用 180 s，或直到 CD-1 攻击两只小鼠。这些C57BL6/J小鼠不需要天真，不会用于任何进一步的实验。在此侵略者筛选阶段，不要将 C57BL/6J 小鼠与 CD-1 小鼠合二为一。
      1. 记录每个 CD-1 的两个 C57BL/6J 鼠标的延迟。
      2. 在总共 3 次筛查中，选择在连续 60 秒内连续攻击雌性 C57BL/6J 小鼠的所有 CD-1 侵略者。其他可用于家庭笼子中的共住。
         注:社会失败的一个重要警告是，由于身体攻击，造成伤害。在筛查和实验阶段的每只小鼠应检查伤口，如果存在小皮肤病变，应用氯己烷消毒剂进行治疗。任何伤口大于 1 厘米的小鼠都应从实验中去除。
2. 将小鼠分配给对照组和实验组。
   1. 收集所有天真的成年男性和女性C57BL/6J小鼠，以及筛选的退休男性CD-1育种者，以及CD-1雄性用于共同住房。
      1. 随机分配成年男性和女性C57BL/6J小鼠对照或实验条件。在CNSDS实验组，男性和女性将配对参加所有社交失败会议。CNSDS 控制组的男性和女性将每天轮换。
      2. 分配CD-1雄性用于社会失败会议或与实验男性和女性在每一个会话后合住，这将交替每对C57BL/6J男性和女性小鼠。
3. 慢性非歧视性社会失败压力（CNSDS）
   1. 将所有小鼠带到专门的社交失败室，包括所有 CD-1 雄性、CNSDS 控制男性和女性 C57BL/6J 小鼠，以及 CNSDS 实验男性和女性 C57BL/6J 小鼠。
      1. 将 CD-1 雄笼与 C57BL/6J 雄笼与前部 CD-1 笼和后 C57BL/6J 笼对齐。
      2. 使用保持架 ID 标记指示哪个鼠标被攻击，然后与哪个 CD-1 共同存放，以确保组织所有鼠标。
         注:在第一天进行初始化实验后，小鼠可以旋转剩余的9个失败会话，这样每个C57BL/6J的男性和女性对每轮都向左旋转一个笼子。这允许在每个会话中与新颖的 CD-1 进行新的交互。
   2. CNSDS 实验组程序
      1. 将一只成年雄性和一只成年雌性C57BL/6J小鼠放入每个CD-1侵略者雄性的家笼中，进行5分钟的社交失败会议。
      2. 记录雄性和雌性实验C57BL/6J小鼠的攻击延迟和攻击频率。
      3. 5分钟后，取出雄性C57BL/6J小鼠，并放在合用CD-1雄性卡子的笼子里，由一个清晰、穿孔的Plexiglas屏障隔开。单独的攻击 CD-1 和女性 C57BL/6J 鼠标与类似的清晰，穿孔的 Plexiglas 屏障。交替的，无论是男性还是女性C57BL/6J鼠标都安置与侵略者CD-1每天。
         注:每次5分钟互动后，每只小鼠将接受治疗的伤害和伤口（如果小于1厘米）。任何大于 1 厘米的伤口都会导致小鼠被切除并立即安乐死。因此，雄性和雌性实验鼠与CD-1侵略者同居5天，其余5天未在攻击会话中使用的新型CD-1。清晰、穿孔的 Plexiglas 屏障可防止物理交互，但允许在会话之间的 24 小时内与 CD-1 侵略者进行感官接触。阴道熔岩可以在每天失败后大约30分钟在所有雌性小鼠身上进行，如前面^{28日描述的那样}。
   3. CNSDS 控制组程序
      1. 将一只控制雌性在一只控制公 C57BL/6J 鼠标的家用笼中放置。
      2. 5分钟后，将小鼠分开，在小鼠之间放置一个清晰、穿孔的Plexiglas分压器。
      3. 将小鼠返回殖民地房间，并放在单独的架子上，作为CNSDS实验笼。在殖民地房间，我们指定了有压力的老鼠与殖民地房间的其他小鼠分开存放的架子。此外，如果无压力小鼠目睹了侵略的发生，它们可能会看到效果，正如在替代性社会失败范式^{30中所看到的那样。}
      4. 请注意每次控制交互期间的任何攻击或安装行为。
   4. 控制雄性小鼠和雌性小鼠将在随后的日子里被引入一个新的特异性，就像传统的社会失败压力控制组一样。完成连续10天的CNSDS控制和实验会议。
      1. 在完成第 10^次和最后 一次控制或实验性 CNSDS 会话后，将所有小鼠合二为一，并在所有行为测试中维护此共占。每个笼子将由2只老鼠组成，它们被分离在有机玻璃分压器的两侧，以允许感官接触。对照小鼠与其他异性对照小鼠一起安置，而实验鼠则与其他异性实验鼠共同居住。
      2. 每个控制C57BL/6J雌性与控制C57BL/6J雄性，它在第10个^会话 中相互作用，一个明确的，有机玻璃分隔器放置在笼子里，以分离两只小鼠。
      3. 在最后的失败会话后约24小时运行一个标准的社交互动测试，以确定CNSDS是否减少社会行为与新的CD-1鼠标相比对，并分层小鼠"弹性"或"易受"^{的压力24，29。,29}
   5. 测试CNSDS控制和实验雄性及雌性小鼠的其他行为，包括Y-maze屏障任务，并分层到CNSDS-弹性和中枢DS-Susceptible组。
4. 社交互动测试
   1. 社交交互测试的初始设置
      1. 在最终的CNSDS失败会议后24小时，进行社会互动测试。
      2. 将所有对照和实验小鼠，以及一种在CNSDS范式中未使用的新CD-1雄性小鼠，到单独的行为室运行社会互动测试。
      3. 在连接到专用计算机上运行的行为跟踪软件（例如 EthoVision）的摄像机下方设置一个标准的开放场室（75 厘米 x 75 厘米）。
      4. 设置一个新的实验，在互动容器周围设置一个24厘米x24厘米的社会互动区（小，穿孔的Plexiglas容器，测量约10厘米x10厘米x10厘米），将住房新颖的CD-1沿着开放领域的一堵墙，在连续2.5分钟的试验的第二个。因此，一个7厘米宽的相互作用区环绕一个装有新型CD-1鼠标的容器。
   2. 在社交交互测试中运行鼠标
      1. 将每只鼠标放在开放场地的远角，进行 2.5 分钟的试用，没有 CD-1 存在，然后启动录制软件程序。
         注意:请记住，交互容器应放置在开放字段的一堵墙的中心，并且第一次试验不包含 CD-1 鼠标。
      2. 2.5分钟后，将鼠标取出回其家庭笼中。用70%乙醇清洁露天。
      3. 将新颖的 CD-1 雄性放入开放场地一堵墙中间的第二个穿孔 Plexiglas 立方体中。
      4. 再次，将鼠标放在开放字段的一角进行第二次 2.5 分钟的试用，现在 CD-1 在场，然后启动录制软件程序。
      5. 取出鼠标，放回其家庭笼子。取出 CD-1 并将其放回其主笼中。用70%乙醇清洁露天。
   3. 运行剩余的CNSDS控制和实验小鼠，并计算相互作用率。
      1. 与所有其他小鼠重复此程序，以量化在试验 1 和试验 2 中每个 CNSDS 控制和实验小鼠在交互区花费的时间。
      2. 要计算交互比率，请使用以下等式比较试验 2（CD-1 存在）中社交交互区所花费的时间与试验 1（CD-1 缺席）中花费的时间:
         交互比 = （试验 2 中交互区的时间）/（试验 1 中交互区的时间）
   4. 将小鼠分层为"CNSDS 弹性"或"CNSDS-Susceptible"。弹性小鼠的相互作用比为 > 1.0，而易感小鼠的相互作用比为 <=1.0。
      1. 在后续行为测量中，如Y-maze屏障任务或其他行为测试，将CNSDS实验鼠分到这些CNSDS弹性和中枢素易感表型中。
      2. 因此，对于女性，CNSDS控制、CNSDS实验弹性组和中枢DS实验-易感组之间可以进行双向ANOVA，并进行后期比较，以确定各组之间的差异（如果适用）。
      3. 对于性别差异比较，与CNSDS（控制、弹性、易感）和性别（男性、女性）进行双向的ANOVA作为主体之间的因素。在适当时使用临时比较。

结果

慢性 CORT 被管理了 4 周，然后是 Y-maze 屏障训练和测试（图 1A）。在另一组，10天的SDS范式同样是 Y-maze 屏障任务（图1C）的训练和测试，以确定这些慢性压力范式对雄性小鼠与努力相关的选择行为的影响。慢性 CORT 和 SDS 与 T-测试确定的"车辆小鼠"和"SDS"控制小鼠相比，均降低了平均体重（表 1）。在整个测试过程中，这些小鼠的家用?...

讨论

虽然慢性 CORT 模式在饮用水中提供恒定的 CORT 剂量，但根据经验，小鼠的消费量可能会发生一些变化。此外，只能评估总笼的消费量，以及根据笼中小鼠数量进行的平均食用。此外，当称量瓶子、转移小鼠进行行为测试或更换到新鲜笼子时，可能会发生溢出。然而，跟踪车辆和COR蒂消耗仍然是可行和准确的，在数周的治疗和行为测试。我们强烈建议每周更换一次含有车辆或 CORT 的新鲜瓶子，以及?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acrylic Sheet	McMaster Carr	8560K215	Clear, 3/16" thick, 24" X 36"
Beta-cyclodextrin	Sigma-Aldrich	C4767	500 mg
C57BL/6J Mice	Jackson Labs	000664	Adults age 7-8 weeks
Corticosterone	Sigma-Aldrich	C2505 or C27840	100 or 500 mg
Male CD-1 Mice	Charles River	022	"Retired Breeders"
PVC Acrylic Sheet	McMaster Carr	8560K215	White, 3/16" thick, 48" X 48"
Solidstate Ultrasonic Cleaner	Fisher Scientific	FS-28	Must reach 40 kHz
Steel Wire Cloth	McMaster Carr	9219T143	1 ft X 2 ft