这项工作是支持的NIDDK KO1 DK075386授予和美国癌症协会RSG - 09 - 075 - 01 - MBC孙军。

该协议包括三部分：细菌培养，小鼠灌胃，检测和沙门氏菌 。 1。 沙门氏菌的生长条件。 <ol><li>准备沙门氏菌卢里亚Bertani肉汤（LB）板，37℃过夜孵育。 </li><li>从LB平板克隆选择和投入7毫升LB培养基，在12毫升管，并在37 ° C为5小时左右摇晃。 </li><li>固定相的文化和​​孵化用0.05毫升50毫升LB培养基，接种于37 ° C，不摇晃时间约18小时。 </li><li>自旋在室温下过夜的细菌培养，10分钟6000转，暂停使用比率100:3（LB：HBSS）的HBSS的细菌。例如： 每50毫升LB培养将暂停在1.5毫升的HBSS。 </li><li>对于动物灌胃，进一步在1:10的比例稀释的细菌培养。例如： 每1.5毫升LB培养将暂停在15毫升的HBSS。 </li></ol> 2。 沙门氏菌感染模型*. <ol><li>准备链霉素溶液。每个鼠标将在100μL的HBSS 7.5毫克链霉素。例如，准备10只小鼠在1.2毫升的HBSS总链霉素90毫克。准备链霉素溶液时，总是有一些额外的体积。 </li><li>水和食物4小时之前撤回灌胃治疗。 </li><li>链霉素（100μL对照组小鼠的HBSS）7.5毫克链霉素灌胃的小鼠。牢牢抓住用大拇指和中指在鼠标肩的皮肤，舒展的头部和颈部，用食指伸直，使食道。直接喂养针沿口的屋顶，向咽后部的右侧球头，然后轻轻地向下传递到食道，并注入100μL解决方案。应该感到无电阻。 </li><li>链霉素治疗后，被撤回的水和食物与细菌感染小鼠前再次的20小时。 </li><li>灌胃100μL悬浮在HBSS中每个鼠标或用无菌的HBSS（对照组）灌胃治疗。灌胃过程是相同的2.3）灌胃小鼠，用链霉素。 </li></ol> *动物实验，通过使用无特定病原体的雌性C57BL / 6小鼠（泰康利，哈德森，NY）6-7周龄，正如先前所描述的1。该协议被批准，由美国罗切斯特大学委员会的动物资源（UCAR）大学。 3。肠道沙门氏菌检测。 <ol><li>收集小鼠粪便（约100毫克）。 </li><li>粪便样品转移到1.5微离心管中，用1ml PBS和涡大力。 </li><li>离心10分钟800转。上清液转移到一个干净的离心管。 </li><li>离心5分钟转速6000。丢弃上清液200μL的PBS添加到颗粒和振荡。 </li><li>数的200μLPBS与一次性细胞吊具上BBL CHROMagar板检测沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色（上升到紫色，参见图1）。如果200μL产量上盘太多的殖民地，使用100μL或50μL的连胜纪录。 </li></ol> 4。代表性的成果。 鼠伤寒沙门氏菌的定植是正确的协议时，可以在小鼠小肠中检测到6个月以上的沙门氏菌可通过粪便文化检测6个月以上（图1 ）。作为一个典型的出这种模式，车身重量损失和死亡，感染后4个星期内发生。依赖感染沙门氏菌株，有些老鼠可能无法存活超过6个月。 <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="图1" /> 图1。肠道沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色上升到紫色的颜色，由于代谢差异的存在，在选定chromogens的。是抑制其他细菌或产生蓝绿色或无色菌落。 <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="图2" /> 图2。感染沙门氏菌突变株PhoP C，PhoP彗星的小鼠的存活比例阿夫拉， 和 PhoP彗星AvrA-/AvrA + PhoP彗星阿夫拉4周（28天）。 表1。 沙门氏菌感染4周的小鼠的体重。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1个星期</td><td> 2个星期</td><td> 3个星期</td><td> 4周</td></tr><tr><td>控制</td><td> 16.78 ± 1.05 </td><td> 16.91 ± 1.28 </td><td> 18.26 ± 1.23 </td><td> 19.31 ± 1.26 </td><td> 20.26 ± 1.15 </td></tr><tr><td> PhoP 彗星 </TD&gt; <td> 16.89 ± 1.03 </td><td> 17.14 ± 1.19 </td><td> 17.43 ± 1.63 * </td><td> 18.68 ± 1.78 </td><td> 20.05 ± 1.11 </td></tr><tr><td> PhoP 彗星阿夫拉， </td><td> 16.91 ± 1.12 </td><td> 16.96 ± 1.39 </td><td> 17.06 ± 2.14 ** </td><td> 18.71 ± 2.18 </td><td> 20.15 ± 1.56 </td></tr><tr><td> PhoP 彗星 AvrA-/AvrA + </td><td> 16.94 ± 0.96 </td><td> 17.17 ± 1.02 </td><td> 17.63 ± 1.42 * </td><td> 18.44 ± 2.03 </td><td> 20.09 ± 1.17 </td></tr></tbody></table> *与对照组比较P &lt;0.05 **相比，对照组P &lt;0.01 表2。 沙门菌在这项研究中使用。 <table border="1"><tbody><tr><td>名称</td><td>说明</td><td>参考或来源</td></tr><tr><td> 沙门氏菌 14028s </td><td>野生型S.鼠伤寒沙门氏菌 </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP 彗星 </td><td>非致病性的复杂的调节突变</td><td>米勒等人，1990年</td></tr><tr><td> PhoP 彗星阿夫拉， </td><td>阿夫拉的突变</td><td>科利尔- Hyams等，2002年</td></tr><tr><td> PhoP 彗星 AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP 彗星阿夫拉补充质粒编码阿夫拉</td><td>科利尔- Hyams等，2002年</td></tr></tbody></table>

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	<li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation.">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li><li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host.">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li><li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages.">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li><li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection.">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li><li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice.">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li><li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+call-and-response:+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host.">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li><li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection.">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , (2007).</li><li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo.">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , (2010).</li></ol>

使用这个系统，它的研究人员，以了解如何灌胃动物是必要的。我们详细准备细菌培养和灌胃的小鼠的一种方法。我们还展示了如何监测在胃肠道（GI） 的沙门氏菌持久。在这个协议中的关键步骤包括： <ol><li>链霉素预处理：链霉素预处理可以摆脱一些共生的肠道菌群，使小鼠受到沙门氏菌 感染 2 。 </li><li> 沙门氏菌灌胃：对于初学者来说，灌胃可以是具有挑战性?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
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		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>HBSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>ABCD1234</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luria-Bertani broth</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>244610</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Feeding needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Popper &amp; Sons, Inc</td>
<td>7920</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptomycin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP biomedicals, LLC</td>
<td>100556</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BBL CHROMagar Salmonella</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>214983</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Disposable cell spreaders</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biologix research company</td>
<td>65-1010</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

chronic salmonella infected mouse model

细菌感染的小鼠模型是一个强大的模型系统研究，如感染，炎症，免疫学，信号转导和肿瘤等领域。许多研究人员都采取诱导的结肠炎的优势<em&gt;沙门氏菌</em&gt;鼠伤寒沙门氏菌为炎症和感染的早期阶段的研究。然而，只有少数报告的慢性感染<em&gt;在体内</em&gt;。与小鼠<em&gt;沙门氏菌</em&gt;在胃肠道的持续存在，让我们去探索长期的宿主细菌的相互作用，信号转导和肿瘤。我们建立了一种慢性细菌感染小鼠模型<em&gt;沙门氏菌</em在小鼠小肠的鼠伤寒沙门氏菌的定植，6个月以上。使用这个系统，它为研究员，以了解如何准备的细菌培养和灌胃动物是必要的。我们详细准备细菌培养和灌胃小鼠的一种方法。我们还展示了如何检测<em&gt;沙门氏菌</em&gt;在胃肠道的持久性。总体而言，这一协议将有助于研究人员利用细菌感染小鼠模型，以从根本上解决重要的生物学和微生物学的问题。

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Chronic Salmonella Infected Mouse Model

建立一个持久的慢性细菌感染的小鼠模型<em&gt;沙门氏菌</em&gt; 27周鼠伤寒肠道定植。

慢性沙门氏菌感染小鼠模型

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

17.1K 次观看.  University of Rochester. 建立一个持久的慢性细菌感染的小鼠模型沙门氏菌 27周鼠伤寒肠道定植。