组织纤维化是器官随着时间的推移而失效的主要方式，以响应慢性炎症或衰老。事实上，我认为，如果你不死于传染性病原体或癌症，你很可能会死于器官纤维化，随着年龄的增长。不幸的是，没有很多伟大的小鼠模型来模仿人体组织纤维化。
因此，我们开发的是克罗恩病的小鼠模型，这是一种人类疾病，导致肠道纤维化，基本上无法治疗。事实上，唯一的治疗方式是通过手术切除纤维组织和肠的重新连接。我们模型的优点是，它在所有小鼠菌株中完全具有素化性，并且非常密切地模仿人类克罗恩病，纤维化持续一个多月，这真是一个健壮的模型。
这个程序中最具挑战性的部分是小鼠的处理，特别是口腔的格夫，因为这需要大量的实践特殊认证。首次执行此程序时，应注意使用沙门氏菌需要适当的安全预防措施和无菌技术。在实验之前，应计划对废物和细菌进行处理。
这个程序的视觉演示是非常重要的，因为它涉及到沙门氏菌的处理，需要特殊的安全预防措施，以及适当的无菌技术。为了开始这个程序，请用每毫升100微克的浓度设置一个含有链霉素的LB汞板。使用无菌接种回路，用S型三角箭头的冷冻甘油库存条纹板。
在37摄氏度下孵育过夜。条纹板可以在四摄氏度下储存一周。感染前一天，在2.5毫升水中溶解0.5克链霉素，准备抗生素。
过滤器对链霉素溶液进行消毒。然后，使用一个灯泡尖的22量表加夫针与一毫升注射器口头打磨小鼠与100微升链霉素溶液。接下来，将含有链霉素的三毫升 LB 肉汤加入培养管，浓度为每毫升 50 微克。
使用接种循环，用单个菌落为LB汤接种。在37摄氏度下在37摄氏度下进行有氧孵育，在200转/小时时摇晃。在感染当天，连续两次使用无菌PBS稀释隔夜沙门氏菌培养物，以准备最终感染剂量。
这导致一个100微升的内分，包含大约300万个菌落形成单位。在此之后，使用灯泡尖的22量量格维奇针与毫升注射器，用100微升的准备好沙门氏菌每只鼠标。首先，设置两毫升安全锁圆底微管，添加一毫升无菌PBS和一个自动 <3> <3>开锁的不锈钢珠到每个管。
在组织收集之前预称管。对小鼠实施安乐死后，重新校正其脑电和脑组织，确保从单个动物身上收集组织，放入单独的管子中。称重每个管以确定组织重量。
使用搅拌机设备以 30 赫兹使组织均质 15 分钟。然后，将 900 微升 PBS 转移到 96 井两毫升巨型块的每个井中。移液器100微升的组织均匀化成第一个井，并混合良好。
通过向后续孔添加 100 微升来进行串行稀释，直到获得 10 到负的第六次稀释。板 10 微升每次稀释三钙到含有链霉素的 LB agar 上。然后，计算平均菌落形成单位，并确定每克组织形成的菌落单位，如文本协议中所述。
打开斐济，这是一个开源的成像软件，并拖放到工具栏上的tif图像文件。在菜单栏上，选择"图像、类型"和"RGB"堆栈，将图像拆分为红色、绿色和蓝色通道。滑动面板底部的水平条，将通道设置为绿色。
打开图像，调整，阈值工具。调整最小和最大限制以消除任何背景信号。设置所需阈值后，关闭阈值工具，然后转到"分析"、设置测量、检查"面积、面积分数、阈值限制"和"显示"标签。
使用徒手选择或多边形选择工具获取组织选择，并单击"分析"，"测量"来测量胶原蛋白的正百分比区域。然后，将胶原蛋白染色的绝对区域正化为组织区域。链霉素治疗，然后口服感染S酪虫三角洲箭头导致强健的肠道炎症和纤维化，特别是在塞库姆。
典型的病原体负担为1亿至10亿个菌落形成单位，可从受感染的动物身上每克聚居地中回收一万个菌群形成单位，而每克脾脏通常可回收1万个菌落形成单位。对皮罗西里乌斯红色染色的脑油部分的纤维化评估表明感染后21天出现纤维化高峰，而大部分病理学在感染后第42天就解决了。材料的彻底准备至关重要，因为这个实验需要多天时间进行。
LB板和沙门氏菌和链霉素的制备都应该无菌完成。在实验之前，确保实验者熟悉动物协议以及安全隐患。在评估胶原蛋白负担时，实验者可以选择进行其他生物测定，如RNA测序，以评估基因表达特征或流动细胞学以评估免疫细胞子集或组织ELISA来评估细胞因子图谱。
因此，我们的模型特别擅长模仿一种叫做克罗恩病的人类疾病，在那里你得到肠道纤维化，这在很大程度上是无法治疗的，唯一的治疗方式是去除肠道的一部分，并缝合在一起，希望它不会回来。我们的模型非常健壮，我们已经表明，针对先天淋巴细胞类型三，一个称为原始α的转录因子，或白细胞间17可刺激疾病，并防止纤维化。我们的模型特别善于识别克罗恩病和肠道纤维化发病机制中起作用的因素，我们已经在确定一些靶点的道路上，这些靶点可以通过治疗来缓解炎症性肠病。
我们的模型已经进入相同的ILC3或α NIL17访问可能在其他纤维病发挥作用，其中包括像银屑病，多发性硬化症，特发性肺纤维化的东西。因此，针对这些相同的因素可能减轻这些疾病的纤维化。虽然突变沙门氏菌流不是致命的，但必须遵守工厂给出的标准生物危害安全协议。
此外，由于甲醛蒸汽已知具有致癌性，因此在固定步骤中，在烟气罩后面工作非常重要。
