Performing Muscle Cryoinjury on a Zebrafish

要对斑马鱼进行肌冻伤，请使用定制制造的不锈钢冷冻探头。为避免在手术过程中处理探头时冻伤，请将探头手柄插入移液器吸头，并用胶带包裹固定。在开始冷冻损伤程序之前，请准备一个用于麻醉工作溶液的烧杯、一个用于处理鱼的勺子、一个潮湿的海绵和一个装有系统水的水箱，用于手术后恢复鱼。

按照屏幕上显示的步骤准备麻醉储备液。然后将4毫升制备好的储备溶液加入烧杯中的100毫升系统水中，以制备三卡因工作溶液。要开始冷冻损伤程序，请将探头浸入液氮中至少三分钟。

将海绵在系统水中弄湿，然后将其放在平坦的表面上。然后在将一条成年斑马鱼转移到三卡因工作溶液中一到两分钟后，用勺子轻轻触摸鱼来确认其无反应。将麻醉过的鱼放在湿海绵上。

将尾柄定位在臀鳍后方和尾鳍前方。在此阶段，从液氮中取出冷冻探针。轻轻摇动探头，确保尖端上没有残留的液氮。

将铲子的边缘垂直于身体放在尾柄上。将探头保持在这个位置六秒钟而不施加压力，然后再从组织中释放冷冻探头。然后将鱼转移到回收水箱中的系统水中。

在鱼从麻醉中醒来后恢复呼吸和游泳时监测它。如果 30 秒后没有发生眼球运动，通过将系统水移入鳃中来刺激鱼，直到动物自行开始呼吸。在受伤后一天或DPCI对对照和冷冻受伤的鱼进行的视频记录显示，尽管冷冻受伤的鱼游动不太活跃，但它们没有表现出任何异常运动，例如旋转，卷积或平衡降低。

在畜牧系统中，它们在水箱中的位置和食物摄入量与未受伤的鱼相似。如在5 DPCI观察到的那样，正常行为仍然存在，表明冷冻损伤程序并未严重影响动物的健康。