在横截面和纵向研究中,体内电心图是活斑马鱼中电表表的唯一诊断工具。我们的方法实用、微创且具有成本效益,因为我们为哺乳动物重新使用数据采集系统。我们强调实时ECG解释策略,以早期验证数据质量。
由于人类和斑马鱼心电图相似,体内心电图有助于使用斑马鱼模拟人类心脏生理学以及高通量药物筛查心毒性,如QT延长。正确的潜在顾客定位是成功的关键。因为普通斑马鱼T波是最小的,所以优先优化其振幅,而不是较大的P波和R波。
研究正常和病理心电图模式,以解释您的心电图发现自己。不要仅仅依靠心电图分析软件的自动解释。在实验当天,将斑马鱼从水族馆运送到实验室。
要设置体内心电图记录系统,请连接设备的基本部件,并将 ECG 铅的三个彩色编码不锈钢电极插入放大器的三个颜色匹配的接入门。对于4级麻醉的诱导,将成年斑马鱼浸入含有麻醉剂溶液的盘中,其浓度最低,经机构动物护理和使用委员会批准。一旦斑马鱼保持了3秒钟的麻醉水平,使用一对钝钳立即将鱼转移到一个带缝隙的湿海绵上,腹体表面向上,用于放置三个ECG电极。
轻轻地将正极插入腹中线,在连接两个下边缘的假想线上方一至两毫米。将负极和 0.5 至 1 毫米横向放置到正极,距离大于成年斑马鱼心室的最大基皮巴长度,然后将参考电极定位在肛门区域附近。对于 ECG 记录,启动系统并打开 ECG 数据采集程序。
从下拉菜单中选择范围、低通和高通的所需设置。按"开始"以一千赫的采样率启动连续无间隙心电图记录。要优化引线定位,实现最大信噪比,请按"停止"以停止录制,并在每颗心脏首次尝试录制后很快查看跟踪。
如果心电图预期正常,请确认所有心电图波形都清晰且易于看到,并且 P 波、净 QRS 复合体和 T 波都是正数。最关键的步骤是引线定位,以最大限度地提高信噪比。在第一次ECG记录尝试后,应用我们的四个验证标准,以获得纠正反馈。
如果需要正常的心电图,请根据需要重新定位电极,直到满足这四个验证标准。如果预期为正常 T 波,但 T 波太小,则重新定位电极以最大化 T 波振幅。优化引线定位后恢复 ECG 记录,保存 ECG 扫描以进行后续分析。
在 ECG 记录会议结束时,小心地取出电极,而不会伤害鱼。在生存研究中,将鱼转移到新鲜的、含氧的鱼水中,不含三辛。请注意,在这段视频中,为了方便读者观看鱼从麻醉中恢复,氧气停止。
为了在生存研究中促进从麻醉中恢复,使用巴斯德移液器在刺上大力喷出水,直到鱼恢复正常刺运动或游泳,然后监测鱼从麻醉中完全恢复,然后再将鱼返回到水族馆。当鱼可以直立游至少五秒钟时,它被认为是从麻醉中完全恢复的。要定义分析设置,请打开 ECG 数据分析程序并打开感兴趣的 ECG 文件以显示完整的 ECG 跟踪。
使用鼠标拖出 ECG 跟踪中感兴趣的部分进行分析。从 ECG 分析菜单中,选择 ECG 设置以打开对话框,预先定义各种参数设置以进行软件自动分析。分析心脏节律和速率,并确定心脏节律是否鼻窦,定期或不规律。
要确定心率,请确保软件正确识别所有 P 和 R 波,因为心房和心室速率分别基于 PP 和 RR 间隔。通过将放错位置的游标移动到适当的 P 和 R 波来纠正任何自动识别错误。要计算间隔和波持续时间,请打开心电图分析和平均视图,将多个连续的心脏循环串联到单个平均信号中。
确保软件正确识别 P 波、QRS 复合和 T 波的开始和结束,然后将放错位置的光标移动到适当的位置,以纠正任何自动识别错误。要导出 ECG 测量,请选择"表视图"以查看所有 ECG 测量,然后复制并粘贴到电子表格中以进行后续分析。要导出 ECG 跟踪,请使用放大镜突出显示 ECG 扫描中感兴趣的部分,然后复制并粘贴扫描到所需的文档中。
与人的心脏,它有两个心室和两个心室,斑马鱼的心脏只有一个中庭和一个心室。尽管斑马鱼的心脏在解剖上简单明了,但它与人类心脏具有多种心电图特征。正确的引线放置需要使引线与假定的心脏主轴对齐。
当电极在真皮中插入太表面时,引线被视为间接的,电压信号很小。当电极插入到适当的一毫米深度到胸腔肌肉中时,引线变为半直接,电压信号增加。但是,如果电极插入心室超过一毫米,则引线变为直接,电压信号进一步增加,R 波振幅与电极插入适当深度时相比增加四倍。
来自深度插入电极的ECG微量也揭示了心室心肌损伤的新迹象,例如新的ST凹陷和新的T波反转。如果正极和负极在放置时切换,则观察到所有ECG波形的异常反转。不适当的水平的电前水深也会损害体内心电图记录的质量。
记得麻醉足够深,不动鱼而不杀它。放置电极以最大限度地提高信噪比,避免过度依赖自动软件分析。遵循这种微创生存程序,可以执行其他程序,如部分消融、心脏切除,或在药物反应或纵向研究中进行连续心电图调查。
系统毒性是任何麻醉剂的潜在并发症,包括三元。这些毒性可以通过利用多种麻醉剂的协同作用来降低单个制剂的剂量来降低。