首先制备 1 至 20 稀释的黑色印度墨水和甘油系统缓冲液,然后在室温下以 15, 000g 离心 10 分钟。向 384 孔板的第一部分加入 40 微升墨水溶液和甘油系统缓冲液。现在向所有稀释的一孔中加入 25 微升甘油系统缓冲液,向所有稀释的二孔、三孔和四孔中加入 40 微升甘油系统缓冲液。
将 25 微升提取的聚糖样品加入稀释一个孔中,以一比一的比例稀释样品。通过将 10 微升从稀释 1 转移到稀释 2 孔中,连续稀释每个样品四次,然后使用移液管轻轻混合。通过将 10 微升样品从稀释 2 孔转移到稀释 3 孔来重复该过程。
重复稀释四孔的过程后,从中丢弃 10 微升,使所有孔的最终体积为 40 微升。向最终板中加入 40 微升墨水溶液和甘油系统缓冲液。然后用粘合剂盖住板,然后在室温下以 3000g 离心 10 分钟。
要在硝酸纤维素膜上打印样品,首先用甘油系统缓冲液多次吹扫打印头和毛细管。通过单独加载带有缓冲液的板来启动测试打印运行。要将仪器配置为直接从干净的缓冲液储液槽打印,请单击“文件”,然后单击“新建”,然后选择“打印运行”。
选择微孔板类型并相应地更改载玻片设置。接下来,在编辑现成属性设置之前更改迷你阵列设置。单击“概述”选项卡以查看板。
最后,在“选项”选项卡下,选择“使用缓冲区”并计算打印时间,然后再分配文件位置以保存文件。保存位置后,按“开始打印运行”以继续运行。在打印提取的聚糖样品时,像以前一样对系统进行编程。
在“选项”选项卡下,单击“使用源微孔板”。最后,保存为打印的微阵列芯片生成的唯一网格文件,以便进行下游分析。确定的聚糖标准品也作为阳性对照包含在打印的微阵列中。
为所选聚糖标准品获得的图谱结合谱与先前报道的表位特异性相对应。