鸡皮上皮-间充质重组培养

首先，在加湿的培养箱中孵育受精的鸡蛋。接下来，用 0.25%EDTA 缓冲液制备两次 CMF 生理盐水。然后在HBSS溶液中剥去鸡胚的皮，并在冰上的两倍CMF-EDTA溶液中孵育15至20分钟。

使用一副制表镊子小心地分离上皮细胞和间充质。然后将分离的上皮细胞和间充质转移到含有 HBSS 的单个干净培养皿中。对于重组，将间充质放在含有 HBSS 的培养皿上，然后将上皮放在其上，沿间充质的前/后轴对齐。

或者，将上皮细胞从间充质前后轴旋转 90 度。接下来，将重组的皮肤转移到六个孔培养皿中的培养插入物中。去除重组皮肤周围任何多余的 HBSS。

将含有 10% FBS 的 DMEM 添加到插入物的外部孔中后，将一层薄薄的 DMEM 移液到插入室中，确保外植体保持半水合。最后，将皮肤重组体置于 37 度的培养箱中，在 5% 二氧化碳和 95% 空气的环境中。使用已安装的解剖显微镜使用延时摄影监测初始皮肤发育阶段的表型变化。

新的斑块在重组后不久出现，并在重组后两天发育成短羽毛芽。长长的羽毛芽在四天内发育出来。当上皮细胞旋转90度时，新芽的方向由上皮细胞确定。