通过培养重组鸡皮进行组织研究

首先，在 38 摄氏度的潮湿培养箱中孵化受精鸡蛋。现在在 HBSS 中解剖 30 至 33 个阶段的鸡胚背皮。然后将果皮与0.25%EDTA的无钙和无镁盐水两倍孵育15至20分钟。

使用钟表匠的镊子小心地分离上皮和间充质，并将分离的材料移动到HBSS中，放在冰上。将分离的间充质收集到15毫升离心管中，并加入两毫升在PBS中制备的0.1%胶原酶胰蛋白酶。然后在水浴中孵育溶液。

接下来，使用巴斯德移液管将皮肤间充质分散到单细胞悬浮液中。然后加入 8 毫升含有 10% 胎牛血清的 DMEM 以停止消化。将细胞以 233G 离心 5 分钟。

然后将沉淀重悬于培养基中。接下来将细胞培养插入物放入六孔培养皿的孔中，将 10 微升的间充质细胞液滴滴到插入物上。在插入物外的孔中，吸取两毫升含有10%胎牛血清的DMEM。

将接种的细胞在装有 5% 二氧化碳和 95% 空气的培养箱中以 37 度孵育一小时。使用一毫升移液管，将完整的上皮转移到铺板的间充质液滴的顶部。将完整的上皮压平在间充质上，形成重建的皮肤外植体。

在插入物上留一层薄薄的培养基，以保持皮肤外植体半湿。提供空气/液体界面，在含有 5% 二氧化碳和 95% 空气环境的培养箱中以 37 度温温孵育重组的皮肤外植体。离体器官培养物起初看起来是均匀的，短羽毛芽在培养两到三天后形成，长羽毛芽在培养四到五天后形成。