Isothermal Titration Calorimetry for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation

首先，为细胞，注射器和清洁准备溶液。将蛋白质或缓冲液样品添加到 96 孔板上的三个连续孔中。现在相应地加入 100%DMSO，使最终浓度为 2%在微量热仪上运行所有四种滴定。

每次滴定应包括以每秒 2 微升的速度初始进样 0.4 微升蛋白质，然后以每秒 2 微升的速度以 120 秒的间隔进样 19 次 2 微升注射器溶液，总共进样 20 次。在 25 摄氏度下执行所有实验，同时以 600 RPM 搅拌。对于数据分析，将数据拟合到单个结合位点模型中，以获得化学计量 n、解离常数和结合焓。

对VHL MZ1二元复合物和VHL MZ1 Brd4复合物进行了表征。观察到积极的合作性。