要对 VHL-MZ1 相互作用执行 SPR，首先按照制造商的说明激活链霉亲和素芯片 要获得最高浓度，请向 MZ1 中添加不含 DMSO 的缓冲液以确保 2% DMSO 浓度。现在将 50 微升最高浓度溶液移液到含有 100 微升电泳缓冲液的孔中。充分混合以达到第二高浓度。
然后，将 50 微升溶液转移到接下来的 100 微升电泳缓冲液中，充分混合以制备第三高浓度，依此类推。使用与聚丙烯微孔板相容的自粘透明塑料箔覆盖板。使用多周期设置启动 SPR。
将模式设置为高性能，将接触时间设置为 120 秒，将解离时间设置为 300 秒，将流速设置为每分钟 50 微升。使用仪器制造商提供的评估软件进行数据分析。要对 VHL-MZ1-BRD4 三元复合物进行 SPR，首先激活链霉亲和素。
注入 VHL 溶液以将其固定到大约 100 个共振单元中。对于仅使用BRD4的阴性对照，在体积为200微升的电泳缓冲液中制备最高浓度的25微摩尔。在接下来的四个孔中，每个孔加入 160 微升两微摩尔 BRD4。
将 40 微升从孔 A5 转移到 A4。然后，用移液管吸取孔充分混合。同样，将 40 微升从孔 A4 转移到 A3，继续这个过程直到到达 A1。对于与 MZ1 和 BRD4 形成的三元复合物，移出 196 微升 25.5 微摩尔 BRD4 溶液。为此，加入在100%DMSO溶液中制备的四微升20微摩尔MZ1。
将 160 微升 BRD4 以两微摩尔的运行缓冲液移液到左侧的下一个四个孔中。接下来，将 40 微升从孔 B5 转移到 B4 并移液器充分混合。继续从每个孔转移溶液，直到B1。现在将 SPR 运行到单周期设置，接触时间为 100 秒，解离时间为 720 秒，流速为每分钟 50 微升。
对VHL-MZ1二元配合物和VHL-MZ1-BRD4三元配合物进行了表征。观察到积极的合作性。通过SPR对大脑、PROTAC和PPM1D系统进行表征。
PPM1D实验使用镍NTA芯片，每次化合物注入后芯片表面都会再生。仅与大脑结合的 BRD-2512 和仅与 PPM1D 结合的 BRD-4761 显示出可忽略不计的结合反应。BRD-5110 诱导 PPM1D 之间形成三元络合物，并在高化合物浓度下显示出钩效应。
