Cloning of Solute Carriers (SLCs) into pHTBV1.1 Bacmid for High-Throughput Protein Expression

首先，在 96 孔板中加入 150 纳克的溶质载体或 SLC 克隆和 100 纳克的载体。用 10 毫摩尔 tris 溶液使反应体积达到 8 微升 pH 8。然后加入 2 微升重组酶混合物，在室温下孵育 1 小时。

孵育后，加入 1 微升蛋白酶 K，并在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。将 4 微升反应混合物加入 50 微升化学感受态大肠杆菌 Mach1 细胞中，并使用热休克方法转化细胞。转化后，将细菌悬浮液铺在LB琼脂平板上。

使用适当的引物和菌落PCR标准方案鉴定携带带有SLC基因插入片段的pHTBV1.1载体的菌落。