优化肺癌组织样本的多重免疫组化 （mIHC） 染色以解决自发荧光问题

首先，获得先前制备的配方和固定和石蜡包埋的肺癌组织样品载玻片。在 65 摄氏度下孵育 5 分钟。通过将载玻片浸入二甲苯中，然后浸入浓度降低的乙醇溶液中进行脱水。

然后将载玻片浸入灭菌水中三次，每次一分钟。对于抗原修复，将载玻片放入染色和修复盒中。用pH 6或9的免疫组化抗原修复缓冲液工作溶液填充。

盖上盖子，在微波炉中以 100% 的功率加热八分钟。然后将载玻片冷却至室温。用封闭溶液覆盖组织，然后在室温下在加湿室中孵育10分钟。

取出封闭溶液后，用一抗工作溶液覆盖载玻片，并将其置于加湿室中。然后在 37 摄氏度下将该腔室孵育一小时。接下来，用洗涤缓冲液工作溶液洗涤载玻片两分钟。

将聚合物辣根过氧化物酶直接滴加到载玻片上，并在室温下孵育15分钟。洗涤载玻片后，将荧光团工作溶液直接滴加到载玻片上，并在室温下孵育10分钟。洗涤载玻片后，如前所述进行微波处理。

当载玻片冷却至室温时，用双蒸水洗涤三次，每次一分钟。接下来，将载玻片浸入洗涤缓冲液工作溶液中两分钟，并如图所示进行抗体孵育，辣根过氧化物酶和荧光基团添加。对于细胞核染色，用DAPI工作溶液覆盖载玻片，并在室温下在加湿室中孵育五分钟。

然后用双蒸水清洗载玻片三次，每次一分钟。从载玻片上取下水滴。向载玻片中加入10至20微升抗荧光淬灭剂，并用显微镜盖玻片密封。