使用振动惊吓测定法评估斑马鱼胚胎中化学物质的致死性和神经肌肉毒性

首先，收集斑马鱼胚胎并将它们饲养至受精后 72 小时，在 28.5 摄氏度的培养箱中。同时准备所需浓度的待测化学品。检查受精后 72 小时的胚胎。

取出死亡或未孵化的胚胎。将 10 个胚胎放入每个 6 厘米的组织培养皿中，其中含有 9 毫升 E3 培养基。这些称为曝光板。

用化合物名称、暴露浓度和复制编号标记每个暴露板。在每个板上加入一毫升暴露溶液，从最低浓度开始，轻轻旋转板。对于溶解度低的化合物，用暴露溶液替换整个 10 毫升培养基。

记录将复合溶液添加到胚胎中的顺序，然后将平板在28.5摄氏度的培养箱内的湿润室中孵育48小时。要开始振动惊吓测定，请打开计算机和振动设备。为配置文件创建电子表格。

包括五个板位置中每个位置的暴露信息，指定化合物、浓度和重复。打开振动惊吓检测试剂盒的通用用户界面或 GUI 程序。在GUI程序中选择不同的位置，以检查相机的移动并观察相机的响应。

从培养箱中取出样品板。将它们放在五个指定位置，让胚胎沉淀几分钟。在GUI程序中，单击“记录”，将出现新窗口。

在此窗口中，选择之前准备的配置文件。验证样品描述是否与每个位置的样品匹配。观察程序激活声音脉冲时 LED 亮起。

录制后，相机将返回到位置一，软件开始压缩文件。用下一组替换测量的样品，然后按照所示进行下一次运行。然后从所有测量的平板中收集暴露溶液，使用筛子同时保留胚胎。

要启动数据分析，请使用虚拟配音或其他观看软件打开视频数据。目视评分响应声脉冲的胚胎数量。在电子表格中记录化合物名称、重复次数、化合物浓度和运动胚胎的百分比。

使用带有嵌入式 R 脚本的 KNIME 工作流进行基准浓度分析。对未经处理的野生型胚胎的不动性评估显示，当受到振动刺激时，平均不动性为14.33%，不同离合器之间存在差异。Tricaine对运动影响的基准浓度计算显示，在1%浓度下运动减少，在2.5%以上停止活性，基准浓度50为164.9微摩尔。

一个次优的测定示例显示胚胎反应不一致，这意味着发育问题影响了惊吓反应的稳健性。