小鼠成肌细胞隔离的刀豆球蛋白-A 珠与抗体一起孵育用于 CUT&Tag 测定

首先，将 3 微升 H3K4me1 抗体移液到含有 150 微升抗体缓冲液的试管中。将稀释的抗体移液到包含小鼠成肌细胞的八个PCR管条的每管中，这些细胞被隔离到刀豆球蛋白A珠上。将试管倒置数次，以充分混合内容物。

然后将试管放在 4 摄氏度的跷跷板运动振荡器上过夜。第二天，在磁性架上澄清样品后，用移液液出上清液。吸出上清液后，将 50 μL 稀释的二抗加入每个样品管中。

通过倒置混合样品管，并在室温下在跷跷板运动振荡器上孵育一小时。丢弃澄清样品的上清液。然后将 200 微升 DIG 洗涤缓冲液移液到每个试管中。

将试管放回磁性架上，然后用吸液吸出上清液。接下来，将 100 微升含有 pA/G-Tn5a 的 300 DIG 缓冲液加入每个试管中。孵育完成后，将试管放回磁性架上。

然后用移液管取出澄清的上清液。现在向每个试管中加入 200 微升 300 DIG 缓冲液。将样品管在室温下放在振荡器上三分钟。

最后一次洗涤后，从每个磁性澄清管中彻底吸取上清液。然后加入 50 微升标记缓冲液。最后，将试管在 37 摄氏度的 PCR 机中孵育一小时，而不使用仪器的盖子加热功能。