首先，打开层流柜，使其稳定三分钟。使用以下消毒剂对橱柜的内表面进行无菌清洁和消毒。对任何会进入橱柜的材料进行消毒后，将餐巾纸和丁腈手套放入橱柜中。
然后关闭机柜并将其暴露在紫外线下 15 分钟。照射后，重新启动机柜。将引物设计试剂置于充满冰的冷却器中。
用 70% 乙醇消毒后，将容器放入柜内。在 0.6 毫升微量离心管中制备环介导的等温扩增或 LAMP 混合物。用移液管吸取混合物以使其均质化。
接下来，将密闭的试管在 95 摄氏度的加热块中孵育 5 分钟。然后在充满冰的聚苯乙烯冷却器中冷却试管五分钟。冷却后，将管子放入层流柜中。
要完成 LAMP 混合物，加入 4 微升 DNA 聚合酶，然后加入 1 微升逆转录酶。要进行比色检测，请加入二羟基萘酚蓝。添加试剂后，用移液管吸取每种溶液以正确混合 LAMP 试剂。
接下来，将 22 微升溶液移液到 PCR 管中，注意不要产生气泡。对于阴性对照，加入3微升0.1%焦碳酸二乙酯水。留出任何剩余的试管以添加遗传物质。
接下来，从机柜中取出所有材料。用 70% 乙醇消毒橱柜表面后，将其关闭。在单独的区域中，向每个PCR管中加入3微升样品，然后用20微升微量移液器进行移液器孔，以彻底均质化。
在开始比色反应之前，使用高质量的相机拍摄PCR管的照片。现在，使用热循环仪和水浴进行反应。对于热循环仪，将试管放入反应块中，并在设备上设置温度曲线。
如果使用水浴，请将试管牢固地放入圆形容器中，然后将这些容器放入 66.3 摄氏度的水浴中 60 分钟。反应时间过后，取出试管并将它们储存在 4 摄氏度直至使用。如果进行了比色反应，则使用高质量相机捕获PCR图像。
温度梯度分析表明，最佳熔融温度为66.3摄氏度。BST 3.0 酶的浓度优化为每微升 3.2 国际单位。为了确定比色策略，对中性红染料中的酚红进行了评估。
然而，扩增后没有观察到颜色变化。对不同浓度的羟基萘酚蓝进行了标准化，其中 125 微摩尔的羟基萘酚蓝发生了最佳变化。扩增的样品显示出根据其浓度的颜色变化。
通过电泳进一步确认了样品扩增。
