用于荧光成像的最佳切割温度化合物中的眼组织包埋和冷冻切片

兔眼冷冻保护完成后，将其从30%蔗糖溶液转移到100毫米解剖培养皿中。在解剖显微镜下，小心地翻转眼睛，以去除眼睛内部多余的蔗糖溶液。使用湿巾轻轻擦去眼睛外部多余的蔗糖溶液，用最佳切割温度或 OCT 化合物填充一次性包埋模具至 0.5 至 1 厘米的深度。

将眼睛朝上放入嵌入模具中，然后慢慢用 OCT 化合物填充眼睛内部，避免气泡形成。一旦眼睛在OCT化合物中出现，并且不接触模具的内表面，就用石蜡包裹包埋模具，并在4摄氏度下储存过夜。第二天，将包埋模具放入解剖皿中。

如果可能，用湿巾轻轻地从眼睛内部去除 OCT 化合物。将眼睛转移到填充有新鲜 OCT 化合物的新包埋模具上。然后像以前一样填充模具，以确保最终的包埋介质没有碎屑或缺陷。

为模具贴上标签以进行定向。将眼睛在冷冻模具中朝上放置，使 OCT 化合物与内视网膜形成一条线。使用视神经头作为确定眼睛上部的标志 将标记的嵌入模具放在干冰上，确保眼睛没有接触模具的内表面或暴露在空气中。

将块安装在低温恒温器上，眼睛的上部朝上，下部朝下。剩余的角膜和虹膜朝向右侧或左侧。将新鲜刀片平行于眼睛的垂直轴放置以将其切片。

切下切片并干燥过夜后，将载玻片放入 80 摄氏度的冰箱中。兔眼整个视网膜冷冻切片的荧光图像显示，色素沉着的视网膜色素上皮层均匀，与上覆的感光层没有明显分离。视网膜切片的明场图像进一步显示了所有层的完整视网膜形态。