培养细胞后继续传代,直到细胞密度达到 80% 以上弃去培养基后,用 PBS 洗涤细胞 3 次。然后向培养瓶中加入 1 毫升胰蛋白酶-EDTA 溶液,均匀涂抹,使细胞充分接触。一旦细胞从粘附形状变为小的圆点,如在显微镜下以 100 倍放大倍率观察的那样,取出消化液。
轻轻敲击培养瓶壁以分离细胞。加入 2 毫升 DMEM,重复冲洗培养瓶壁 10 次。轻轻敲击培养瓶壁,将 1 毫升细胞悬液转移到另一个玻璃培养瓶中。
向每个玻璃瓶中加入 5 毫升 DMEM。轻轻敲击培养瓶壁以均匀分布细胞。在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下培养细胞,直到细胞密度超过 80%