纤维成脂祖细胞 （FAP） 的荧光激活细胞分选和培养

首先，准备 30 微升 2 倍工作浓度的染色缓冲液，用于单色和 FMO 对照。将单色和 FMO 对照染色缓冲液转移到 96 孔板的孔中。用 20 微升 FACS 缓冲液填充体积。

为了对样品进行染色，在 1.5 毫升离心管中制备 0.5 毫升 2x FACS 染色缓冲液。将 10 μL 细胞悬液移液至单色和 FMO 对照孔中。然后，将 2x FACS 染色缓冲液添加到细胞悬液的其余部分并孵育。

接下来，将 100 微升 FACS 缓冲液加入孔中，将 2 毫升缓冲液加入样品管中。在 4 摄氏度下以 500G 离心 5 分钟。吸出上清液，然后将细胞沉淀重悬于活力缓冲液中。

将 300 μL 增殖培养基添加到 1.5 mL离心管中。这些将用作细胞分选的收集管。使用 FACS 对细胞进行分选后，将收集的细胞在 4 摄氏度下以 800G 离心 10 分钟。

使用 P1000 移液器小心去除上清液，不要干扰沉淀。将沉淀重悬于增殖培养基中，最终密度为 100 个细胞/微升。将细胞悬液接种到 48 孔组织培养板的孔中。

最后，将板转移到 37 摄氏度的培养箱中，并补充相应的气体，直到细胞汇合。在培养后 5 天内获得具有典型成纤维细胞形态的汇合细胞。