隔离调节骨骼肌再生的人类肌肉祖细胞使我们能够研究作为再生过程基础的过程，同时保持供体变异性。这种技术允许利用少量的细胞从少量组织及其表型分析中获得大量人类肌肉祖细胞。这种方法被专门设计用于分离人类肌肉祖细胞，以跟踪其增殖和分化能力，并关联这些数据与骨骼肌肉再生过程。
这种相当简单的技术最困难的方面是确保每一步都重复执行，以优化细胞的产量和纯度。要成功隔离单元格，需要完成多个步骤。如果直观地观察这些步骤，它们就更容易理解。
为了将人体肌肉祖细胞从活检组织中分离，在无菌条件下将肌肉组织放入无菌培养皿中，并使用无菌手术刀将组织切碎成一毫米的立方体。当所有组织都碎了，将碎片转移到含有10毫升PBS的15毫升管中，让组织在小心吸上清液之前通过重力沉淀，而不会干扰组织。第二次清洗碎片后，如刚刚证明的，用10毫升的低葡萄糖Dulbeco的改良鹰介质替换PBS。
组织结算后取出上清液，并在三毫升的消化介质中重新暂停。将组织在37摄氏度下放置30分钟，每10分钟用一毫升血清移液器对肌肉碎片进行三段式三重奏。在孵化结束时，在样品中加入83微升额外的消化介质和24微升的 Dispase 溶液，每5至10分钟用宽孔移液器尖端对组织进行三联，直到达到均匀的泥浆。
均匀的浆料对于人类肌肉祖细胞的最大恢复非常重要。如果泥浆没有通过标准的 1，000 微升移液器尖端，请继续消化。要分离Pax7阳性细胞，请根据协议染色并封闭细胞。
将 CD56、CD29 双阳性人类肌肉祖细胞用流量的细胞仪与 100 微米喷嘴一起，每平方英寸 20 磅的压力，分类到含有 300 微升荧光激活细胞分拣缓冲液缓冲液的收集管中。然后将分类的人类肌肉祖细胞播种到胶原蛋白涂层的24孔板中，含有预加热的生长介质，浓度为3.5倍，达到每厘米平方浓度的第四细胞。要执行汇合扫描，请将板加载到成像圆度计上，然后选择"创建新扫描"和"板类别、板轮廓"和"板 ID"。
找到与背景相比单元格显示为白色的焦点平面，然后选择"寄存手册"。使用鼠标突出显示需要扫描的所有孔，然后选择"开始扫描"。将自动扫描整个井区。
选择最适合板和单元格类型的分析设置，然后选择"开始分析"。最初使用成像细胞计测量汇合。然后计算成像细胞仪上的细胞数，用200微升染色溶液替换每井中的介质。
在37摄氏度下15分钟后，用100微升的新鲜火腿F12代替染色溶液。将板返回到成像细胞仪，在"应用"下，选择"细胞可行性"和"活死总数"。现场通道将是一个明亮的领域图像， 死通道将显示碘化染色的丙烯， 和总通道将是 Hoechst 33342 染色.
在"聚焦设置"下，单击"自动注册"。在"总计"通道下，将通道设置为蓝色。使用"查找焦点"将原子核转换为焦点，然后单击"设置偏移"以选择焦点。
在死通道下，将通道设置为红色，并使用"查找焦点"将死细胞聚焦。单击"设置偏移"以选择焦点，然后选择"开始扫描"以开始扫描。然后选择适合板和单元格类型的分析参数，然后选择"开始分析"以开始分析。
分析完成后，目视验证分析是否适当地计算了单元格。如果扫描和分析令人满意，请将板返回到培养箱，否则重新扫描或修改分析参数。人类肌肉祖细胞可以通过基于侧面和向前散射区域的第一次浇注事件来识别，以消除死细胞或碎片，然后只选择对7-AAD呈阴性的细胞，因此是可行的。
CD56 和 CD29 细胞表面标记的细胞均呈阳性，然后表示人类肌肉祖细胞群。人类肌肉祖细胞也可以通过他们的Pax7表达来识别。事实上，Pax7 在 FACS 之后在总人口中具有丰富性，并通过多个通道进行维护。
此处显示了一个代表性的汇合扫描。绿色轮廓由成像细胞仪生成，并显示成像细胞仪如何根据所选分析设置确定汇合。异质性和核计数在捐赠者之间很常见。
发现并准确描述这种异质性是成像细胞仪的关键应用。然而，来自独特捐赠者的汇合测量值和核计数高度相关。人类肌肉祖细胞分化形成肌管可以通过其胚胎肌素重链表达来区分。
在选择流式磁体仪上的浇注参数时，必须保持一致，以便从每个捐赠者中分离出相同的细胞群体。一旦分离，人类肌肉祖细胞可用于多种目的，包括识别人类肌肉祖细胞增殖和分化的独特代谢需求。人类肌肉祖细胞的分离使得对人与小鼠肌肉祖细胞的细胞表面标记表达的差异有区别。
