首先，将高压灭菌的手术器械放在手术台上。剃掉麻醉大鼠的腹部，并将大鼠置于手术板上的仰卧位。用聚维酮碘和 70% 乙醇清洁腹部。
将眼药膏放在大鼠的眼睛下方以防止干燥。将大鼠固定在手术板上。启动数据采集软件并开始记录。
以每公斤 4 毫升的速度打开呼吸机，并确保呼气末正压约为 2 厘米水。使用剪刀，进行从剑突到耻骨联合的中线剖腹手术。然后在钝器的帮助下，进行内侧-外侧内脏旋转并观察肝下腔静脉。
用 20 号针头将肝素注射到下腔静脉。用一把剪刀，从胸骨切迹切开皮肤到下颌骨角度下方，然后开始向气管解剖。然后，直接解剖必要的带状肌肉以露出气管。
在软骨环之间的气管前部做一个横向切口，确保不会切开气管的后部。在气管周围放置 5-0 丝缝合线。将气管插管插入软骨环，并用 5-0 丝缝合线固定。
将气管插管连接到呼吸机，并确保胸部适当起伏。使用剪刀进行正中胸骨切开术并进入胸腔。放置胸壁牵开器以露出心脏和肺部，避免对肺部进行任何意外操作。
通过锐器和钝性解剖的组合，从前纵隔中取出胸腺。识别肺动脉并在其周围放置 5-0 丝缝线以准备插管。用剪刀在右心室流出道切开 2 到 3 毫米，将动脉插管放在肺动脉内，并用 5-0 缝合线固定。
对大鼠实施安乐死后，迅速将脱气的保肺液连接到动脉插管，以重力冲洗肺部。将动脉插管连接到 EVLP 回路。打开滚轮泵，让少量灌注液流经肺部，从左心室流入胸腔。
一旦灌注液开始从左心房流出，请关闭滚轮泵。接下来，在左心室放置一个小镊子，轻轻拉伸二尖瓣环。在心形周围系上一条 5-0 的真丝领带，然后松散地系上领带。
将左心房插管插入左心室并推进插管，直到可以在心房内看到它。用预先打结的 5-0 缝合线固定左心房。识别食道并用止血钳将其夹在尽可能靠近隔膜的位置。
然后，切开止血钳下方的食管。以脊柱为导向，用剪刀剪断所有连接心肺阻滞和周围结构的韧带附件。然后从颈部解剖气管，切开气管插管上方的气管，以释放心肺阻滞。
将心肺阻滞移动到 EVLP 回路内的胸套上，并将左心房套管连接到回路上。打开滚轮泵并连接呼吸机监视器。检查气泡捕集器，确保没有空气栓塞进入系统。
在最初的 15 分钟内，缓慢将通气和灌注设置更改为所需的实验水平。此外，将灌注流速增加到所需的流速和压力。在指定的时间点，检查灌注液气体水平和肺功能测试。
所有测试的灌注液均显示左心房氧分压略有降低，基于 RBC 的灌注液在 1 小时时显着降低。在接下来的几个小时里，polyhHB 和对照灌注液的左心房氧分压均保持稳定。RBC 灌注液组氧分压 δ 在 1 h 时显著降低，而在 polyhHB 和对照灌注液中保持稳定，趋势不显著。
与聚 hHB 相比，第一小时后，红细胞和对照灌注液中的左心房二氧化碳分压显著降低，并且这种趋势在接下来的几个小时内持续。1 小时后，RBC 灌注液中二氧化碳的 δ 分压显著增加，此后在 polyhHB 和对照灌注液中保持稳定。实时肺生理学数据表明，RBC 灌注液在第一小时内显着增加了肺血管阻力。
虽然 polyhHB 和对照灌注液在此期间都保持了低且稳定的肺血管阻力，但最初 RBC 灌注液中肺重量的变化是显着的，所有灌注液的持续增加，polyhHB 中的肺重量略多。RBC 灌注液的顺应性在第一小时内显著降低，而其他灌注液的顺应性下降不显著。PolyhHB 在 4 小时后的依从性最高。
