用于流式细胞术分析的小鼠脾单细胞悬液的分离和制备

首先，将安乐死的小鼠仰卧在干净的工作台上。沿小鼠腹部中线切割，逐层分离腹部结构。用镊子轻轻打开大网膜和胃。

然后轻轻拉出带有胃脾韧带的脾脏，钝将其与周围组织和韧带分离，以获得完整的脾脏。将 70 微米细胞过滤器放入 100 毫米无菌培养皿中。将脾脏添加到细胞过滤器中，并用注射器柱塞将其压碎。

加入 5 至 8 mL 匀浆冲洗液，将脾细胞通过过滤器推入培养皿中。在室温下将滤液以 450 g 离心 5 分钟，然后弃去上清液。使用淋巴细胞分离试剂盒提供的样品稀释剂重悬沉淀。

在血细胞计数器上计数细胞后，将细胞浓度调整为 2 X 10 至每毫升 8 个细胞的幂。在离心管中，取与组织单细胞悬液相同量的淋巴细胞分离溶液。小心地将单细胞悬液移液到淋巴细胞分离液的表面，并在 25 摄氏度下以 800 g 离心 30 分钟。

离心后，从上到下观察管中的四层。使用移液管，小心地将环状乳白色淋巴细胞层吸入另一支管中。向试管中加入 10 毫升清洁溶液以混合细胞。

将细胞悬液以 250 g 离心 5 分钟。弃去上清液，将沉淀重悬于 10 ml RPMI 1640 培养基中用于细胞计数。