从视网膜微血管内皮细胞 （REC） 培养物中收集内皮下基质，用于原子力显微镜 （AFM） 刚度测量

首先，在轨道振荡器上，在含有钙镁的 PBS 中冲洗戊二醛交联明胶涂层的盖玻片约五次。在前三次冲洗过程中，使用无菌镊子提起盖玻片，以彻底冲洗戊二醛。接下来，用补充有无菌过滤抗坏血酸的新鲜培养基替换小鼠 REC 的培养基。

处理 15 天后，用不含钙镁的 PBS 冲洗细胞。将细胞在 250 μL 温热脱细胞缓冲液中孵育 2 至 3 分钟。在相差显微镜下确认细胞的脱细胞化。

轻轻移出缓冲液，而不会干扰 REC 分泌的内皮下基质。然后向每个孔中加入 0.5 毫升 PBS。去除 PBS 后，加入 200 微升不含 RNase 的 DNase one。

将混合物在 37 摄氏度下孵育 30 分钟，以去除所有细胞碎片。接下来，在相差显微镜下观察宏观纤维内皮下基质。然后使用共聚焦显微镜以 100 倍放大倍率观察更细的纳米级基质纤维。

在人或小鼠 REC 的 10 天或 15 天培养物脱细胞后，在玻璃盖玻片上观察到内皮下基质聚集体。脱细胞基质的共聚焦显微镜显示致密的纳米纤维状胶原蛋白-IV 和纤连蛋白基质。