首先,将人卵巢运送到 0.9% 氯化钠或类似的冰上无菌盐水溶液中实验室。在培养皿中用新鲜的冷盐水溶液冲洗卵巢。将每个卵巢转移到 50 毫升锥形管中,并添加 2 到 3 毫升消化培养基以覆盖卵巢。
将试管放入珠浴中,在 37 摄氏度下回火 30 分钟。然后小心地将卵巢转移到含有 10 毫升收集培养基的 60 毫米培养皿中。使用细胞刮刀轻轻擦伤含有人卵巢表面上皮细胞的卵巢表面。
在至少再刮擦两次之前,先在介质中清洗刮刀。将收集培养基中的人卵巢表面上皮细胞转移到 15 mL 试管中。将细胞以 240G 离心 5 分钟。
如果沉淀显示红色,表明被红细胞污染,请将沉淀重悬于一毫升红细胞裂解缓冲液中。然后,加入 4 毫升含钙和镁的 PBS,以 240G 离心 5 分钟。冷冻保存人卵巢表面上皮细胞沉淀以备将来培养使用。