内膜是一个组织，每月改变对激素的反应。激素失衡可以防止胚胎附着，也会导致癌症等疾病。我们的协议重建内膜，以便它可以在女性的身体外以生理方式研究。
这项技术的主要优点是，它提供了一个3D结构的细胞，由两种激素反应细胞类型组成，上皮细胞和频闪细胞，它们特别组织和行为，就像它们在体内一样。由于器官可以更好地模仿组织行为，他们最终可以用来测试不同的药物。子宫内膜器官可用于研究目前已知的癌症危险因素的直接影响，包括肥胖和多囊卵巢综合征。
我们的器官强调两种细胞类型之间的寄生虫行为的重要性。重要的是要从足够的组织量开始。获得上皮细胞和频闪细胞的右密度可能比较棘手。
此外，器官非常小，可能很难与 IHC 染色可视化。此过程的可视化非常重要，因为看到这些步骤后，有些步骤更易于理解。其中包括获得子宫的右组织层，获得正确的细胞密度组合，以及播种阿加罗斯模具。
在开始细胞隔离之前，根据制造商的指令，铸造和平衡1.5%的阿加罗斯微模。在生物安全柜中，使用无菌技术在 37 摄氏度下准备酶溶液，并使用 0.2 微米注射器过滤器将溶液无菌过滤到 15 毫升锥形管中。使用手术刀，从子宫活检中刮掉子宫内膜，将组织切碎成非常小的碎片。
将新鲜切碎的组织放入含有酶溶液的15毫升锥形管中。关闭盖子，用蜡膜包裹管顶，防止污染。将管子放入37摄氏度的水浴或孵化器中，轻轻摇晃30分钟。
在此之后，将 100 微米细胞过滤器堆叠在 20 微米细胞过滤器的上面，放在 50 毫升锥形管上。通过两个过滤器过滤溶液。用HSS冲洗15毫升锥形管，然后通过过滤器进行洗涤，以确保收集所有细胞。
然后，将20微米细胞过滤器倒置到新的50毫升锥形管上，用20毫升的有机体介质将上皮细胞从过滤器上洗净，并辅以1%青霉素和链霉素。将锥形管在500G下离心5分钟。对于收集的频闪细胞，去除上流液，将颗粒重新在10毫升红血球解液缓冲液中。
在37摄氏度下孵育10至15分钟。这些细胞在500G下离心5分钟。取出上一杯，用200至300微升的有机体介质重新暂停颗粒。
对于收集的上皮细胞，去除上音，并在100微升的有机体介质中重新暂停颗粒。平衡1.5%的加糖模具后，去除黄玫瑰模具外侧有机介质，倾斜组织培养板，使胶糖盘细胞播种室的介质也可以小心地取出。在显微镜下查看上皮和频闪细胞悬浮液，并在悬浮液中添加更多的器官介质，确保一次只添加 100 微升，使悬浮液的密度大致相等。
然后按体积将一部分的频闪细胞与上皮细胞的三个部分混合。移液50微升的组合细胞悬浮液进入阿加罗斯模具的细胞播种室。一旦阿加罗斯模具充满细胞，小心地将400微升的新鲜有机体介质加入到24孔板的井中。
在37摄氏度下用5%的二氧化碳孵育，确保每两天用500微升的有机体基体改变介质。七天后，将介质更改为辅以0.1纳米摩尔雌二醇和0.8纳米摩尔睾酮，以促进上皮细胞和频闪细胞的组织。首先，通过煮沸在PBS中溶解1.5%的加糖。
将液体加糖放入热水杯中，使其冷却至约50摄氏度。在解剖显微镜下，倾斜 24 井板，小心地从红糖模具外部移液介质。然后小心地移液从红糖模具内部移液介质，以避免破坏有机体。
小心地将70至75微升的暖、1.5%的加糖加入加糖的腔室，小心不要干扰有机体。让盘子在四摄氏度下冷却五分钟。在此之后，在24井板的每个井中加入4%的甲醛，并在4摄氏度下将整个密封的阿加罗斯模具过夜。
第二天，将板在4摄氏度的乙醇中储存，直到准备加工石蜡嵌入。要开始RNA分离，请用解剖显微镜观察板。倾斜板，小心地从加糖模具的腔室移液介质。
强行移液一毫升新鲜有机体介质直接进入阿加罗斯模具，使有机体被冲出微井，小心不要产生太多的气泡。使用同一介质重复此强力移液过程。在此之后，收集所有含有器官的介质。
在500G下离心收集有机体，然后进行RNA提取。在这项研究中，由子宫内皮和子宫内皮细胞组成的人类子宫内膜器官是不使用外源支架材料产生的。在组织学加工中，含有子宫内膜器官的阿加罗斯霉菌用黄糖密封，然后用4%的甲醛固定过夜。
这些模具被加工为标准石蜡嵌入部分和染色组织学，免疫荧光，或免疫组织化学。eosin染色中的赤氧蛋白揭示了一个球状结构，外部和细胞中心有一层细胞。子宫内膜、上皮细胞和频闪细胞的细胞特异性标记揭示了器官周围的上皮细胞，中心有频闪细胞。
子宫内膜生理学标记确认子宫内膜器官保留了原生组织的某些特征。三铬染色，染色胶原蛋白蓝色和细胞红色，显示胶原蛋白在中心的存在，其中频闪细胞居住，显示活性生产和分泌胶原蛋白的频闪细胞类似于本地组织。此外，免疫组织化学染色揭示了雌激素受体、激素受体和黄体酮受体在上皮细胞和频闪细胞中的存在。
重要的是要密集地盘板细胞，以便我们有足够的器官进行下游实验。这将需要一些练习。子宫内膜器官可以在不同条件下培养，然后收获用于免疫组织化学或免疫荧光染色等实验，以研究蛋白质表达或收获RNA研究基因表达。
我们的实验室研究子宫内膜如何对激素水平变化的反应，这可能导致子宫内膜增生和癌症。我们可以使用这些器官长期治疗激素，并添加病理条件，如多囊卵巢综合征中发现的过量睾酮，或来自脂肪细胞的信号，以研究肥胖引起的子宫内膜变化。人体组织被认为是生物危害，采取适当的预防措施非常重要。
