首先,将一个大的 P200 切割移液器吸头连接到 10 毫升注射器上,并用 PBS 填充。使用镊子将注射器尖端插入与安乐死小鼠隔离的肠段开口中。用镊子将肠段固定在注射器上,以每秒约 50 微升的速度轻轻冲洗以去除内容物。
将肠道内容物收集到空的称重船中。然后将湿肠段沿直线铺在一条干燥的贴有标签的纤维素滤纸上。使用解剖剪刀,沿肠系膜线纵向切开肠道,一次约 5 毫米。
使用剪刀的底部边缘或一把镊子将切割的组织平放在滤纸上。现在将另一张滤纸放在肠段的顶部,以防止其在固定过程中卷曲或变形。要将组织固定到位,请钉住滤纸的边缘,同时避免缝合组织。
将组织浸入 10% 正常缓冲福尔马林中。轻轻去除接触肠道管腔侧的顶部滤纸。在丢弃之前,用镊子小心地将肠子从底部的滤纸上剥下来。
然后在 PBS 中洗涤组织 3 次,以从组织中去除福尔马林。使用反向作用镊子,沿着短边缘夹起一块肠子,管腔侧朝上,然后转动镊子滚动组织。将组织放入干重舟中。
用一只手用镊子将组织固定到位。小心地打开反向作用镊子并释放组织,使用其他镊子将组织从反向作用镊子中移出。将 00 号解剖针插入组织。
使用剪线钳去除销钉的锋利尖端。所有样品均已滚动完毕,将所有四个组织卷放入同一个组织包埋盒中,并将组织包埋入组织脱水机中。在包埋站,将少量石蜡放入模具中。
从盒中取出四个瑞士卷,将它们放入单独的模具中,尽可能平放。添加更多石蜡以填充模具。将模具移至冷板上,并确保所有瑞士卷都平放在模具底部。
将标记的小盒顶部放在模具上。蜡凝固后,从模具中取出块。