首先，取一个大滑盒并取下粘在盖子上的纸板盖，准备一个加湿室。将湿纸巾垂直放在载玻片盒的底部，确保它们平放。通过脱蜡、再水化、抗原修复和洗涤准备玻片进行染色。
从 PBS 中取出载玻片并擦去多余的 PBS，同时避开组织。用疏水笔在组织周围画一个框以形成屏障。将导玻片水平放在湿纸巾上。
加入大约 100 微升的封闭缓冲液以覆盖组织。关闭加湿室，在室温下孵育玻片 90 分钟。然后，轻轻敲掉封闭溶液。
立即添加准备好的 mouse-on-mouse 块以覆盖组织，并在室温下孵育 15 分钟。孵育结束时，从加湿室中取出载玻片，并将其直接放入浸没在 PBS 中的载玻片架中。然后，从 PBS 中删除载玻片。
轻轻敲掉多余的 PBS，然后将它们水平放回加湿室中。添加适当稀释的目标一抗以覆盖组织。从加湿室中取出载玻片后，轻轻敲掉一抗，并将载玻片放入浸没在 PBS 中的载玻片架中 5 分钟。
从 PBS 中取出载玻片并敲掉多余的 PBS 后，将它们水平放回加湿室中。添加适当稀释的二抗荧光基团或目标偶联的一抗以覆盖组织。然后，将适当稀释的 Huist 直接添加到组织上，然后在室温下避光孵育。
之后，将玻片放入装满 PBS 的新耐溶剂培养皿中，在黑暗中放置 5 分钟。一次取出一张玻片，将剩余的玻片浸没在 PBS 中避光。去除多余的 PBS 后，向组织中心添加 1 到 2 滴抗淬灭封固剂。
握住干净的盖玻片的边缘，然后以 45 度角慢慢将其降低到载玻片上。从组织中心开始，用两根手指轻轻按压盖玻片。将切割的、未过滤的 P200 移液器连接到连接到真空的血清移液器的尖端。
沿着盖玻片的边缘，使用真空去除多余的封固剂。在新的载玻片盒中，将载玻片水平平放，然后在室温下避光干燥。显微图像显示了不同肠段的形态和杯状细胞的染色。
顶膜、上皮细胞的侧膜和细胞核。肠道免疫荧光染色突出了许多不同的细胞区室，包括增殖细胞、间质、溶酶体结构域和上皮细胞。
