用于再生和完整肢体组织中原子力显微镜测量的蝾螈组织安装和加工

要制备直径为 1 厘米的 1 厘米长的圆柱体，请在本生灯火焰下加热纸板切割机，然后用加热的刀片切割 15 毫升的管子。用 Parafilm 片覆盖圆柱体的一侧。麻醉蝾螈并确保它对触觉刺激无反应后，将肢体垂直于体轴。

截肢紧邻 zeugopodial 区域的钙化区域。将蝾螈放回装有新鲜饮用水和镇痛药的水箱中。24 小时后，将蝾螈转移回新鲜的保水中，让肢体再生，直到所需的感兴趣阶段。

将麻醉的蝾螈置于立体显微镜下后，测量组织溶解和浓缩软骨阶段所需再生阶段的肢体长度。收集肢体后，将它们放入培养皿中进行解剖。在立体显微镜下，用手术刀在肘部水平解剖肢体，并将它们放入含有 APBS 溶液的培养皿中。

将巴斯德移液器和加热块设置在 37 摄氏度，琼脂糖等分试样放在工作平台上。从零下 20 摄氏度的冰箱中取出冷块，然后将圆柱体放在上面，封口膜覆盖的一端朝下。将肢体放在干净的板上，用纸巾轻轻去除解剖肢体上多余的液体。

在顶部添加熔化的低熔点琼脂糖，并在琼脂糖中短暂移动肢体，以从皮肤表面置换任何剩余的 APBS。快速将肢体放入圆柱体内，确保其垂直定向，感兴趣区域朝上。在圆筒内加入低熔点琼脂糖，直到组织完全覆盖。

接下来，从冷块中取出圆筒，让琼脂糖凝固 30 秒。凝固后，从圆柱体底部取出 Parafilm，并用氰基丙烯酸酯胶将含琼脂糖的组织连接到振动切片机载物台上。然后，用手术刀去除周围多余的琼脂糖。

将载物台浸入 APBS 溶液中进行切片。开始以 100 微米的步长对琼脂糖进行切片，直到到达组织尖端。然后，切开直到去除组织的远端部分。

使用剃须刀片，小心地从振动切片机阶段去除含有组织的琼脂糖块。立即用手术组织胶水将块连接到 35 毫米塑料培养皿上。加入大约 2 毫升的培养基以覆盖组织。