由美国国立卫生研究院（CA133085吉隆坡）和美国癌症协会的资助（RSG - 09 - 209 - 01 - TBG的吉隆坡）支持。

1。实验转移小鼠模型<ol><li>前一天的肿瘤细胞的注射剂，种子之一T75容量瓶中，用高达1 × 10 7 CMS4了10 mL的RPMI培养基中含有10％的血清，以获得快速增长的肿瘤细胞中的细胞。过夜孵育在37 ° C。 </li><li>在注射当天，去除培养基，用PBS冲洗细胞一次，然后用0.05％胰酶EDTA收获肿瘤细胞在37 ° C为5分钟。停止与10 mL的RPMI培养基中含有10％血清中反应。细胞转移到锥形管。 </li><li>分拆为3分钟，在室温下在Sorvall传奇RT离心机在1300 rpm的细胞。去除上清。重悬在10毫升的新鲜1X的HBSS洗细胞，然后降速再次重悬在以同样的方式。 </li><li>血球计数肿瘤细胞。在HBSS中稀释的细胞，所以，每次注射所需的细胞悬浮在总体积100μL。 </li><li>在温水中浸泡一个烧杯的尾静脉扩张，暖在6-8周龄BALB / c小鼠。鼠标放置在一个板凳上的尾静脉限位。使用microsyringe尾静脉注入100μL的肿瘤细胞。使用无菌技术操作，以避免感染。注射后，适用于注射部位轻微的压力，直到出血停止。 </li><li>返回鼠标笼子，使肿瘤生长所需的阶段。 </li></ol> 2。细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的过继转移免疫<ol><li>在转移的当天，吸管上下以重悬纯化的细胞毒性T淋巴细胞，或CTL的准备，如文中所述，。所有的细胞从一个板块转移到15 mL锥形管，不要让音量超过超过2 / 3管。 </li><li>无菌巴斯德吸管插入锥管和奠定下细胞的淋巴细胞分离液，或LSM，直到总量接近14毫升。 </li><li>要小心，不要去打扰层。在室温下20分钟在2000转离心。不要使用制动快后慢，旋转转子。 </li><li>转移到一个新的15 mL锥形管的CTL。容积约10毫升加入HBSS洗。 </li><li>细胞计数。在室温下5分钟1300转离心。重悬在HBSS中所需的细胞密度注射，每次注射总量保持在100μL。 </li><li>前面看到的那样在这个视频中注入荷瘤小鼠的CTL，使用相同的尾部注射技术。 </li><li>返回鼠标笼子，让CTL的互动与肿瘤。老鼠通常牺牲的CTL治疗后14-21天进行分析。 </li></ol> 3。肺转移的可视化<ol><li>为了直观肺转移，一个牺牲的鼠标在其上的一个泡沫塑料板的背面。 PIN的腿，以确保通畅进入气管。喷雾用70％乙醇的腹侧方。 </li><li>从中旬腹部开始，用剪刀沿中线切，通过胸腔，向唾液腺。公开气管。使用镊子，以消除气管周围的组织。 </li><li>线程下面的气管200μL枪头。一只手握住一角，轻轻气管和远离身体。 </li><li>平台旋转180 °。使用50 ml注射器注入印度墨水肺部通过气管。完全与油墨的肺部膨胀，直到你感到强烈的抵触情绪。 </li><li>用剪刀剪开气管。肺部下一双镊子滑动，并解除他们的鼠标。简要1L烧杯中的水冲洗肺部。 </li><li>在化学通风柜，肺部转移到闪烁的玻璃小瓶含5毫升的Fekete的解决方案。几分钟后，肿瘤组织会出现白色上黑色的肺部结节。肿瘤，现在可以计算和存储在无限期的Fekete的解决方案。 </li></ol> 4。在可视化的肺代表转移<ol><li>在这里，从与乳腺癌细胞株4T1注入小鼠的肺部显示白色斑点，说明肿瘤。一个IRF8显性负突变K79E的转染4T1细胞注射的小鼠肿瘤细胞的增强的转移潜能。 </li><li>这些图像显示CTL过继转移免疫组织学疗效分析。注射用生理盐水荷瘤小鼠表现为多发性肿瘤6天后，黄色箭头（一）表示。另一方面，表现出与肿瘤特异性T细胞注入小鼠体内，减少了肿瘤（二）。 </li><li>在相同的实验，墨汁治疗提供了一个简单的方法来衡量CTL过继转移的疗效。在这里，白荷瘤肺肿瘤结节明显区别于他们已成功地进行CTL过继转移，结节计数肺部允许学位定量不可能与组织学。 </li></ol> 5。代表性的成果<img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig1.jpg" alt="图1" /> 图1为实验肿瘤的转移和CTL的适应性转移免疫小鼠模型的试验计划。红色圆点表示肿瘤细胞和绿色圆点表示的CTL。 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig2.jpg" alt="图2" /> 图2中断IRF8功能增强对肿瘤细胞的转移潜能。稳定转染的小鼠乳腺癌细胞株4T1载体（4T1.Vector）或向量表示一个IRF8显性负突变K79E（4T1.IRF8K79E）（15，16）。鼠标横向尾静脉注射四到肿瘤细胞。荷瘤肺膨胀与印度墨水可视肿瘤结节。肿瘤结节很容易被看作是黑色的肺组织背景上的白色斑点。 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig3.jpg" alt="图3" /> 图3。CTL过继转移免疫组织学疗效分析。鼠标横向尾静脉注入小鼠肉瘤细胞株CMS4 - Met的第四。三天后，生理盐水（A）或肿瘤特异性T细胞（B）分别注入荷瘤小鼠。常规H＆E染色组织学染色CTL治疗后6天，肺部进行了分析。肿瘤结节是由箭头指示。 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig4.jpg" alt="图4" /> 图4。墨汁通胀的肿瘤结节的可视化。鼠标横向尾静脉注入小鼠肉瘤细胞株CMS4 - Met的第四。三天后，生理盐水（对照）或肿瘤特异性T细胞（+ CTL）分别注入荷瘤小鼠。的CTL治疗14天后，肺部进行了分析。白点，这是肿瘤结节，允许容易量化的CTL治疗的疗效。

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小鼠购自美国国家癌症研究所（Friderick，MD）和住在医学院格鲁吉亚动物设施。实验和关怀/福利协议联邦法规和医学院格鲁吉亚IACUC委员会批准的协议。

解决方案： 印度国内的油墨解决方案（17）： <ol><li>倒入150毫升蒸馏水250毫升容量瓶中。 </li><li>加入4滴氢氧化铵的蒸馏水。 </li><li>氨和水的混合物中加入30毫升墨汁的股票（即桑福德魔法防水绘图墨水4465项44011）。 </li><li>顶用蒸馏水到200毫升的量。解决方案是准备注射。 </li></ol>的Fekete的解决方案（17）： 是用来漂白印度虚增墨荷瘤肺的Fekete的解决方案，以区别于正常组织的黑色背景白色的肿瘤结节。 <ol><li> 350毫升95％的乙醇添加1L玻璃瓶。 </li><li>添加150毫升蒸馏水</li><li>添加50毫升甲醛</li><li>添加25毫升冰川酸的酸性物质</li></ol>

experimental metastasis and ctl adoptive transfer immunotherapy mouse model

实验转移小鼠模型是一个简单的，但有关生理转移模型。肿瘤细胞静脉注射（四）为小鼠尾静脉和殖民，从而在肺部，类似肿瘤细胞自发转移的最后步骤：在流通领域，外渗及远端器官的殖民化的生存。从治疗的观点来看，实验转移模型是最简单和理想的模式，自疗法的目标往往是：建立在远端器官的转移瘤的转移终点。在此模型中，肿瘤细胞注射四到小鼠尾静脉，并允许在肺部进行殖民和增长。然后注入肿瘤特异性CTL转移轴承鼠标第四。肺转移的数量和大小，可以控制被注入肿瘤细胞的数量和肿瘤生长的时间。因此，各个阶段的转移，从最小的转移到全身广泛转移，可为蓝本。肺转移，从而允许更容易直观地观察和定量分析与油墨的通货膨胀。

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Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

一个实验性肺转移和CTL免疫小鼠模型的肿瘤细胞- T细胞相互作用分析<em&gt;在体内</em&gt;。

实验转移和CTL过继转移免疫小鼠模型

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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