KF和KO是共同第一作者以及堪萨斯州 这项工作是由AHPBA奖学金（堪萨斯州），美国国立卫生研究院K23 CA148964-01（LZ），医学的约翰霍普金斯学院的临床科学家奖（LZ），Viragh基金会和跳过Viragh胰腺癌症中心的约翰霍普金斯大学（EMJ，部分支持LZ），全国胰腺基金会（LZ），在莱夫科夫斯基家族基金会（LZ），美国国立癌症研究所孢子在胃肠道癌症P50 CA062924（EMJ，LZ），在Lustgarten基金会（LZ）和索尔高盛胰腺癌中心补助（KS ，BHE，LZ）。

所有的动物实验符合美国约翰霍普金斯大学的动物护理和使用委员会的指导方针，与动物保持在按照协会的评估和实验室服务的认证（AAALAC）的指导方针。在无菌条件下在手术室中的经历至少每小时15空气交换进行的外科手术过程。所有的仪器是由高压灭菌之前的程序，并再次用70％乙醇中的每个小鼠的过程中，灭菌。预计无法生存的外科手术所有小鼠都CO 2条件下实施安乐死3分钟后颈椎脱位，同时仍然在麻醉状态下。 1，细胞的制备<ol><li>悬浮培养的PANC02细胞在磷酸盐缓冲盐水中以2×10 7个细胞/毫升，并保持在冰上。 </li></ol> 2，鼠标准备<ol><li>管理氯胺酮E（100毫克/千克），甲苯噻嗪（10毫克/千克）混合腹腔，以8-12周龄的C57BL / 6雌性小鼠，分次给药。 </li><li>请检查脚趾捏撤回反射被废除，以确保鼠标完全麻醉。 </li><li>施用额外剂量的氯胺酮（100毫克/千克）和赛拉嗪（10毫克/千克），为需要充分麻醉小鼠混合。 </li><li>申请Puralube兽医软膏对小鼠的眼中，以防止干燥时的小鼠是在麻醉状态下。 </li><li>剃鼠的手术区，以避免伤口污染。 </li><li>制备型切口，用70％乙醇中，然后碘的左肋下区域。 </li><li>放置在腹部外科手术铺巾，以保持无菌。 </li></ol> 3，剖腹<ol><li>让左肋下切口线与通过皮肤，并通过使用手术刀腹膜左耳。 </li><li>通过应用同步数字p表示通过切口脾沿切口的头部和尾部方面ressure。 </li><li>找到脾血管在脾脏的下结束。 </li><li>将两个豪华中型结扎夹在脾，请小心操作以免损坏脾血管的脾极的中心划分脾。 </li><li>将脾脏的上极放回腹腔，以避免污染。 </li></ol> 4，肿瘤注射液<ol><li>拟定150μL磷酸盐缓冲液成26国祥5/8“注射器。 </li><li>拟定100微升PANC02（2×10 6细胞）到相同的注射器的注射过程中保持在任何时候都将注射器在一个直立的位置。 </li><li>浸在70％的乙醇溶液中的针。针被浸在70％的乙醇，以确保无菌。 </li><li>慢慢注入的细胞进入暴露hemispleen是肯定的注射器保持直立在任何时候。该syrin的伞GE应该在任何时候都通过脾胶囊可以观察到，以避免脾下注入细胞。脾血管美白应在注射后观察。 </li><li>提高脾脏和应用脾下一个媒介地平线剪辑闭塞脾血管。 </li><li>将一个小的地平线剪辑胰腺和脾脏血管的最前端部分。 </li><li>通过削减上述地平线短片结扎从hemispleen胰腺和脾脏血管。 </li><li>放置在其&#39;侧的鼠标和灌溉的切口，用蒸馏水。 </li></ol> 5，关腹和麻醉恢复期<ol><li>关闭腹膜有4-0跑步针。 </li><li>适用于两到三个皮肤剪辑，关闭皮肤切口。 </li><li>管理0.1毫克/公斤丁丙诺啡或5-10毫克/千克卡洛芬皮下，以减轻手术后疼痛。 </li><li>把鼠标放在一个加热垫的REC安理，直到移动和鼠标演示了普通的呼吸方式。动物从外科手术完全恢复后只返回到其他动物的公司。 </li></ol> 6，剖检检查和肝脏的收获<ol><li>介于30至60天以下的手术，小鼠开始显示转移的临床症状和需要安乐死。转移性疾病的需要人道安乐死的症状包括腹部增大，腹水的发展。通过吸入CO 2安乐死的小鼠。 </li><li>下面吸入，进行颈椎脱位。 </li><li>后的动物已被确定为无响应，使一个切口穿过腹膜，露出用剪刀腹部。 </li><li>使用镊子和剪刀，轻轻地割肝出了腹部。 </li><li>放置在OCT化合物中的肝和闪光灯用液氮速冻。储存在肝脏-80℃。可替代地，实况r的在RT被固定在16％中性福尔马林缓冲液中24小时和石蜡包埋。 </li></ol>

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	<li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts &amp; Figures. , (2013).</li><li>Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosurveillance+of+pancreatic+adenocarcinoma:+insights+from+genetically+engineered+mouse+models+of+cancer.">Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer.</a> Cancer letters. 279, 1-7 (2009).</li><li>Rhim, A. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer cell. 7, 469-483 (2005).</li><li>Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+evaluation+in+high-frequency,+40+MHz+imaging:+a+comparative+study+of+four+vector+velocity+estimation+methods.">Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods.</a> Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).</li><li>Zheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine+23+phosphorylation-dependent+cell-surface+localization+of+annexin+A2+is+required+for+invasion+and+metastases+of+pancreatic+cancer.">Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer.</a> PloS one. 6, e19390 (2011).</li></ol>

作者没有利益冲突的相关披露。

胰腺癌转移这个临床前鼠模型中，以通过一个hemispleen注射技术肝脏是反映了许多的转移性疾病患者的肝的临床和免疫学条件描述的第一模型。这种模式提供了比其他小鼠模型中的几个优点。首先，与胰腺癌的转基因模型中，只有30％的小鼠发生转移至肝脏和转移瘤的形成时机是相当的变量，该模型提供始终如一获得转移的优势，肝脏中的小鼠100％以统一的时间，使研究人员能够研究转移性疾病在?...

胰腺导管腺癌（PDA）是癌症相关死亡的美国1的第四大死因。的5年生存率为治疗转移性PDA是2-12％1。虽然辅助和新辅助化疗对胰腺癌的效果更明显今天比以往任何时候都仍然是一个迫切需要新的治疗方法。 新颖的治疗学的发展就必须可靠的临床前动物模型。虽然皮下肿瘤模型是直接使用，缺点包括这些肿瘤无法转移和模仿肿瘤进展和微环境见于人类癌症。基因工程化的模型，如遗传工程小鼠含有的Kras和p53敲除中的致癌基因突变（保护团模型）2与KPC模型与YFP谱系示踪（在PKCY模型）3允许在immunocompete天然存在的肿瘤的研究NT小鼠。此外，在肿瘤微环境是不变的和更类似于见于人类肿瘤进展。不幸的是，肿瘤发展的时间是这些模型中，这使得它难以研究实验性疗法中的变量。此外，这些小鼠回交需要显著大量的时间和资金承诺，这并不总是可行的。最后，异种移植小鼠的PDA机型必要免疫功能低下小鼠，改变或缺失的肿瘤微环境。其结果是，在这些临床前模型中显示出实验性疗法的功效通常是在人类临床试验4不能再现。 这hemisplenectomy小鼠模型利用PANC02肿瘤细胞，这是一种高度致瘤性，甲基胆蒽诱导的胰腺肿瘤细胞的C57BL / 6小鼠5,6衍生线。此外，其他的PDA小鼠细胞系从KPC麦克风衍生E可在该模型中使用。 Schulick 等人以前开发的hemisplenectomy技术，创造了结肠癌转移7同系小鼠模型。这hemisplenectomy模型（ 图1），提供一致和平等的肿瘤接种在免疫小鼠贷款本身的新的治疗药物7-10调查。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="713">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cell culture media and components</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">will vary depending on cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:197px;">Gibco by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL centrifigure tubes</td>
			<td style="width:197px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">430052</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Curved Operating Scissor</td>
			<td style="width:197px;">Roboz Surgical Store</td>
			<td style="width:119px;">RS-6835</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro dissecting Graefe Forceps</td>
			<td style="width:197px;">Roboz Surgical Store</td>
			<td style="width:119px;">RS-5130</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Needle holder (regular)</td>
			<td style="width:197px;">World Precision Instruments, Inc</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3-0 or 4-0 suture</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">137085</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">237115</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon medium ligating clips</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">002200</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon small ligating clips</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">001200</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8&#34; slip tip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8&#34; slip tip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309597</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9 mm Autoclip Applier</td>
			<td style="width:197px;">Mikron</td>
			<td style="width:119px;">427630</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9 mm Autoclip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">427631</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heating pad</td>
			<td style="width:197px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:119px;">CAT93</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">sold by numerous vendors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Hospira</td>
			<td style="width:119px;">22395DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td style="width:197px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">X1251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical murine model of hepatic metastases

许多小鼠模型已经被开发，研究人类癌症和推进癌症治疗和发展的理解。在这里，临床前，鼠胰腺肿瘤肝转移通过hemispleen注入同系小鼠胰腺肿瘤细胞的模型描述。此模型模拟了许多在转移性疾病患者的肝的临床情况。小鼠持续开发在肝脏允许调查的转移过程中，实验性治疗试验和肿瘤免疫学研究转移。

PANC02肿瘤细胞注射到hemispleen（ 图1）在小鼠的100％形式肝转移，而如果正确地进行技术肺和腹膜转移都没有观察到。这种技术已在一百多个，独立的实验中使用PANC02细胞的小鼠被执行，并重复地，所有未治疗的小鼠死于与以下的hemisplenectomy过程（ 图2）30到60天之间的肝转移。要获取未处理和处理组之间的统计学意义，还需要每组10只。但是，这个数字将相对于所使用的细...

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A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

通过hemispleen注射技术进行肝转移的临床前，小鼠模型。

肝转移的临床前小鼠模型

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

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Medicine

28.1K 次观看.  The Johns Hopkins University School of Medicine. 通过hemispleen注射技术进行肝转移的临床前，小鼠模型。 