1）斑马鱼的卵收集<ol><li>化学屏幕一天前的下午，成立10到20的斑马鱼的繁殖坦克。每个水箱装满水从水产养殖系统。使用渔网，将一个成年男性和一到两个成年女性在每个养殖池的内部容器。独立分频器从对方的男性和女性的鱼。标签的笼子，并把他们的盖子。 </li><li>在屏幕上午上，删除从养殖池的分隔，使斑马鱼进行交配。在未来1小时的课程，让受精卵通过电网秋天在每个内部容器的底部。 </li><li> 1小时后，返回成年斑马鱼永久储存罐，取出内部容器，收集鸡蛋，使劲在每个养殖池的水通过塑料茶滤网。 </li><li>反转培养皿中的过滤器和冲洗过滤网轻轻培养皿中，通过使用一个洗瓶的E3媒体冲入鸡蛋。 </li><li>所有未受精卵，从而出现不透明的，应予删除，使用一次性塑料吸管。每次交配交应产生大约200个胚胎。 </li></ol> 2）阵列胚胎在96孔板<ol><li>约5到每一个使用玻璃巴斯德吸管96孔板以及胚胎在E3介质的转移。 </li><li>一旦胚胎在96孔板上摆着，消除可能使用12个通道（30 - 300μL）井出的E3媒体的吸管，小心不要穿刺胚胎。使用12道移液器，可提供250μL的E3中每个含有0.5μg/ml卡那霉素以及尽快，以免使胚胎干起来。 </li><li> 28.5 °彗星孵化器放入96孔板时要添加的化合物，直到他们达到预期的阶段。 </li></ol> 3）转让的小分子库而化合物转移可自动化与机器人的传输方法，我们将介绍的手动传输方式。 <ol><li>小分子库通常在96孔板格式提供，与存储在DMSO为10毫米的股票每个化合物。约60分钟前胚胎到达时，该化合物是无以复加的阶段，解冻所需数量的96等分的小分子（源盘）板。请注意源板的串行或其他识别号码。为了尽量减少对板凝结，解冻可以发生在一个干燥室，含Drierite（WA HAMMOND DRIERITE，森雅，）。 </li><li>在配备多孔板适配器桌面离心机简单自旋向下的板块。 </li><li>从源盘取出铝箔封口胶带。使用12通道移液器，稀释浓度为0.5毫米（例如，如果250 NL等分10mm的股票开始，添加4.75μL二甲基亚砜，每孔）在源盘的化合物。 </li><li>当胚胎在96孔板（收件人板）达到预期的阶段，使用12个通道（2-20μL）移液器从源头上板转移到收件人板块2.5μL化合物（0.5MM）胚胎。 </li><li>记录收件人胚胎板源板的识别号码。现在包含有盖的胚胎和化合物包括收件人板，轻轻混匀，轻轻摇动板，并放置在28.5 ° C培养箱。 </li><li>封面每个源板，铝箔封口胶带和一个-80℃长期储存的冷冻含有未使用的小分子（0.5毫米）。 </li></ol> 4）为小分子的影响，通过目视检查表型的筛选<ol><li>执行屏幕前，制定一个什么构成一个“打”的具体标准。 </li><li>在发展中所需的时间从孵化器中含有复合处理的胚胎，取出96孔板和立体显微镜下检查每口井。微妙的变化，如在循环模式的转变，对于更好的可视化，一个相衬倒置显微镜下可以使用。荧光显微镜可用于研究组织特异性启动子的绿色荧光蛋白或DsRed的蛋白表达的扰动。 </li><li>快速扫描以及其中至少3 5胚胎展出规定“砸”表型的96孔板。记录板，和每一个潜在的冲击以及位置的身份。 </li><li>再次确认由复检几个剂量（1微米，5微米，10μm和50微米）的复合型的影响，一个潜在的冲击。每个剂量，10个胚胎在0.5毫升在48孔板格式的E3媒体测试。复方此外复检的时间应该是相同的的原筛查。一击确认复检的compoun转载时引起的表型ð </li><li>确定从的小分子化学库中的数据库的命中化合物。 </li></ol>

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规划斑马鱼为基础的化学屏幕时，必须特别注意​​正在审议的表型，这种表型的背景率的稳健性。诱导表型的化学抑制器的屏幕，这一点尤为重要。例如，对于引起热休克诱导转基因表型，导致表型的条件下再现，必须精确地映射出启动屏幕前，以避免不可接受的高误报率。通过精心规划，斑马鱼化工屏幕，这就需要适度的资本投资，可能会导致的细胞信号转导和生理的新型调制器的发现，以?...

<ol><li>最小的20对成年斑马鱼所需的基因型。 </li><li>鱼网，养殖坦克，带有可拆卸的内胆和除法（水生境）。 </li><li>培养皿（10厘米）。 </li><li>塑料滤茶器。 </li><li>洗瓶containg胚胎水。 </li><li>一次性聚乙烯转移移液器。 </li><li>聚苯乙烯96圆底实验板（康宁COSTAR;洛厄尔，马）。 </li><li>玻璃巴斯德吸管（尔科技）。 </li><li>手动泵吸液管，10毫升（倍儿最先进的产品，Pequannock，新泽西州）。 </li><li> E3胚胎中期：5毫米氯化钠，0.17 mM的氯化钾， 氯化钙 0.33毫米，0.33毫米硫酸镁4，含有0.003％机动部队（苯，尿素，Sigma公司;圣路易斯，密苏里州）。溶解在1 L E3胚胎媒体0.3 - G机动部队，机动部队可以准备作为一个10倍的解决方案。解决方案包含机动部队应避光，用铝箔覆盖。 </li><li> 12通道移液器2-20μL（Eppendorf公司）。 </li><li> 12通道移液器，3-300μL（Eppendorf公司）。 </li><li>一次性聚苯乙烯吸管盆地，50毫升（尔科技）。 </li><li>小分子结构不同的化合物在96 - WLL格式排列在DMSO中的10毫米股票库。每个主板是分装成96孔聚丙烯存储板（康宁），并储存于-80 ° C，直到使用。 </li><li>铝箔封口磁带96孔板（NUNC，纽约州罗彻斯特）。 </li><li> DMSO（Sigma公司，圣路易斯，密苏里州）。 </li><li>基本孵化器，28.5℃（尔科技）。 </li><li>体视显微镜与透射光基地（徕卡显微系统，班诺克本，IL）。 </li></ol>

large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen

鉴于他们的小胚胎的大小，快速发展，透明度，繁殖力，以及众多的分子，形态和生理上的相似性，对哺乳动物，已经成为一个强大的斑马鱼<em&gt;在体内</em&gt;表型为基础的药物屏幕和化学遗传分析平台。在这里，我们展示了一个简单，实用的方法大规模使用斑马鱼的胚胎小分子筛选。

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Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

斑马鱼已成为一个强大的<em&gt;在体内</em&gt;表型为基础的药物屏幕和化学遗传分析平台。在这里，我们展示了一个简单，实用的方法大规模使用斑马鱼的胚胎小分子筛选。

斑马鱼为基础的大型在体内小分子屏幕

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

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Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

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