利用斑马鱼对肠道转运时间进行高通量测量

这种方法可以帮助回答有关胃肠道生物学的关键问题，如基因表达如何改变或环境挑战如何改变肠道功能。这种技术的主要优点是，它占用的时间更少，而且比传统的测量肠道传递的方法更容易执行。在检测当天，幼虫被喂食含有荧光标签的食物，当他们吃这种食物时，这种标签会积聚在他们的肠道中。

喂养后，他们被冲洗，从未吃的食物分离，每个幼虫被转移到一个多井板井。井有一个圆锥形的底部，所以当粪便物失效时，它落在井的中心。现在请记住，多井板中有许多幼虫可以使用板分光光度计同时监测，该分光度计测量空粪物质的数量。

随着时间的推移，更多的信号会失效，信号也会相应增加。这样，我们就拥有了一种高吞吐量方法，用于测量肠道运输。在受精后的第四天，在每个培养皿的水面上撒两毫克粉状幼虫鱼食，以喂养幼虫。

让幼虫四个小时喂食。喂养后，将所有幼虫转移到含有新鲜胚胎培养基的大型冲洗盘中。使用50毫升血清移液器，尽可能轻柔地吸尘剩余的食物，小心不要捕获任何幼虫。

将幼虫转移到含有50毫升新鲜胚胎培养基的培养皿中。再重复两天的进料、冲洗和转移过程。在受精后的第六天，开始准备荧光食品，在10厘米的手表玻璃中加入200毫克的干粮。

加入300微升荧光标签和100微升的去维水，并短暂混合。将所得糊状物铺入手表玻璃上的薄层，让其在黑暗中室温干燥至少8小时。之后，将干燥的混合物从手表玻璃上刮掉。

粉碎成粉末，在室温下，在黑暗中储存。在受精后的第七天，将荧光食物洒到每个培养皿中的水上，将荧光食物撒到幼虫。让幼虫喂养两个小时。

同时，通过溶解胚胎介质中的每个试验化合物，以达到目标剂量的两倍，最终体积至少为2.5毫升，来准备浓缩剂量溶液。在喂食期结束时，使用转移移液器将它们移动到一个大冲洗盘。用更严格的吸尘方法冲洗之前描述的所有幼虫。

在最后冲洗过程中，尽可能多地去除剩余的荧光食物，以减少意外转移到 96 井板的可能性，这一点很重要。冲洗每个幼虫后，使用移液器将幼虫与100微升胚胎培养基一起从冲洗盘中取走。将幼虫和整个100微升的介质分配到96孔聚苯乙烯、锥形底部、多孔板的井中。

一旦所有幼虫都转移，在适当的井中加入100微升准备好的给给剂溶液。添加所有剂量溶液后，将板加载到板分光光度计中。从底部测量从板的荧光，立即连续五次，而不会摇晃板。

在数据分析过程中，每一井的最低读数将被指定为其初始荧光。在大约28摄氏度的温度下孵育板。重复测量过程，在做分后头两个小时每 20 分钟读取一次荧光，并在读取之间孵育。

在加分后的第三小时和第四小时，每 30 分钟测量一次荧光，然后每小时测量 5 至 8 小时。一夜之间在28摄氏度下孵育幼虫。第二天，在点分后24小时阅读荧光。

该协议使用基于板的分光光度测量法来评估GI传输作为荧光显微镜的高通量替代品。通过分析24小时后处理相同的鱼类，可以比较这两种方法。如这里所见，结果高度相关，负斜率，因为显微镜测量保留的荧光信号，分光光度测量测量传输信号。

对不同机制的化合物的分析表明，与车辆处理控制相比，阿托平和阿米替线减缓GI传递。另一方面，气化和多溴二氮酰胺被认为会加速过境时间。Erythromycin，根据哺乳动物的反应，预计会加速过境时间，相反，它被认为对斑马鱼的过境时间没有影响。

进一步分析表明，在斑马鱼幼虫中，阿托平减缓了GI的传递，剂量取决于剂量。最低剂量测试，042微摩尔，没有显著效果。而两个更高的剂量都被视为有显著的影响。

这种方法有许多应用，包括检测药物或候选药物的毒性GI效应、疾病建模，如肠易激综合征、发现此类疾病的新疗法，以及发现亲动剂化合物。