我们感谢这个手稿的阅读和编辑医生诺亚魏斯勒德。这项工作得到了香港研究资助UMDNJ基金会62-09透明带，美国心脏协会SDG2630086到新征，0535555N到MB，国立卫生研究院RC2AR058962-01到MB。

1。细胞内Ca 2 +测量单个细胞<ol><li> KYSE-150，一个人食管鳞状细胞癌（ECSS）细胞株培养在5％CO 2的气氛，在37°C的混合的RPMI 1640/Ham的F-12培养基（1:1），含5％胎牛血清。 </li><li> KYSE-150细胞转染质粒或者含有shRNA的专门针对Orai1或炒序列。质粒基因编码作为记者，这是由一个独立的启动子驱动的红色荧光蛋白（RFP），还包括。 </li><li>细胞生长在玻璃底菜（第1.5玻璃盖，MatTek，马）48小时。 </li><li>取出介质和冲洗细胞，用平衡盐溶液（BSS）（140毫米氯化钠，氯化钾2.8毫米，2毫米氯化钙2，MgCl 2的 2毫米，10毫米肝素钠，pH值7.2）。 </li><li>加入1毫升的BSS解决方案，包含2微米的Fura-2乙酰酯（分子探针）入菜，并用铝箔纸包裹，整道菜蛋白酶CT光。 </li><li>在37°C孵育40分钟的细胞，然后离开他们在室温下为一个额外的15分钟内让酯水解完成。与BSS洗涤细胞两次。 </li><li>装入菜尼康TE200倒置显微镜，它是连接公共交通交汇处分光光度计激发波长，在350和390 nm和510 nm处的发射阶段。要使用的确切的激发波长可以略有不同取决于各个系统的光学。确定最佳比例动态两个波长激发频谱扫描的Fura-2盐中含有的Ca 2 +从0到39.8μM（或更高浓度的Fura-2荧光饱和）的解决方案。 </li><li>成立了4个不同的解决方案在BSS重力灌注系统的Ca 2 +（2毫米），EGTA（0.5毫米），EGTA-TG（毒胡萝卜素，5μM）的Ca 2 +-2-建业（SOCE抑制剂“，75 μM）计算机控制的自动化perfusi系统上也可以使用。 </li><li>选择细胞表达RFP的可视化模式。 </li><li>定位在10倍放大倍率的灌注系统启用提示，直到针尖以上地区的利益是在45度角。 </li><li>同时记录的F 为350nm和F 390nm荧光信号。比（F 为350nm / F 390nm）显示，在第三个窗口。更改灌注以下顺序的解决方案的Ca 2 +; EGTA的Ca 2 + EGTA-TG的Ca 2 +的Ca 2 +-2-建业。 </li></ol>上述协议可以修改为测量细胞内Ca 2 +在细胞悬液系统。 <ol start="12"><li>文化KYSE-150细胞在与上述相同的培养条件下的T25瓶。 </li><li>当细胞达到90％汇合，除去介质和冲洗细胞与BSS解决方案。 </li><li>添加2.5毫升含2微米的Fura-2 AM和孵化的BSS解决方案细胞40分钟，在37°C间跟着脱酯化。 </li><li>删除的BSS，添加2.5毫升胰蛋白酶在37°C，直到细胞分离到烧瓶，并培育。再加入2.5毫升培养基停止胰蛋白酶和收获的细胞，在800转离心5分钟。 </li><li>离心洗更多的时间与培养基中的细胞重新悬浮颗粒细胞的BSS解决方案（不加2毫米氯化钙2，含有μm范围内的Ca 2 +）和计数细胞使用hematometer数。 </li><li>加入到石英比色皿（10毫米，Starna细胞）〜10 6细胞和填充量高达2毫升与BSS。 </li><li>放入分光光度计试管（与磁棒搅拌）。 </li><li>同时记录与发射波长在510 nm处的F 340nm的和F 380nm的荧光信号。正在运行的协议是：BSS的，除了0.5μLEGTA（0.25M股票），另外1μL毒胡萝卜素（甘油三酯（TG），10毫米股票），另外4μL的Ca 2 +（1米股票）。 </li></ol> 2。培养细胞中的锰淬火法<ol><li>执行的Fura-2激发波长扫描解决方案，包含不同的Ca 2 +浓度范围从0到39.8微米，以确定钙离子浓度等色点的独立波长。通常情况下，等色点或360纳米左右。 </li><li> KYSE-150细胞培养在玻璃底部的菜肴和加载的Fura-2 AM。 </li><li>成立灌注系统：与5个不同的BSS解决方案的Ca 2 +（2毫米），EGTA /易性癖（0.5毫米和5μm，分别），锰2 +（0.5毫米，不加EGTA或钙离子含有游离的Ca 2 +在μm范围内），锰2 + / 2-APB（75μM），EGTA /剂Triton X-100（0.1％）。 </li><li>装载显微镜阶段的菜，然后选择“激励比”模式，激发波长为360 nm和390 nm，发射，在510纳米。 </li><li>同时记录的F比390nm与360nm处和F（F 360nm处 / F 390nm）在第三个窗口显示的荧光信号。正在运行的协议是：1分钟的Ca 2 +稳定的荧光， 锰+ 30秒，10分钟，锰EGTA /易性癖2 + 2分钟，EGTA海卫X-100的（0.1％），持续1分钟获得的背景读数。可用于锰2 + / 2，建业解决方案，而不是对Mn 2 +检查取消的荧光猝灭，这表明了Mn 2 +入门SOCE途径是通过。 </li></ol> 3。在肌肉细胞中的锰淬火法<ol><li> C2C12细胞，小鼠肌细胞线，是在37°C的DMEM含10％胎牛血清，10％马血清的培养基培养玻璃底菜在5％CO 2气氛。 </li><li>细胞达到汇合后，改变培养基分化培养基（除去胎牛血清和减少é马血清2.5％）。后4天，C2C12细胞分化成肌管。 </li><li>加载C2C12肌管与5μM终浓度的Fura-2上午在1.4-1.6。 </li><li>添加终浓度为20μM的N-苄基-P-甲苯磺酰胺（BTS），来抑制肌肉收缩和运动造成的工件，并允许在开始实验前15分钟。 </li><li>交汇处的设备连接到显微镜的舞台上安装盘和灌注系统装入以下BSS解决方案：2的Ca 2 +（2毫米），0的Ca 2 +，锰2 +（0.5毫米）;锰2 + / TG（0.5毫米，20μM，分别）。 </li><li>成立如上所述灌注系统。 </li><li>在第三个窗口中显示的比率（F 360nm处 / F 390nm），同时记录的F 360nm处和F 390nm荧光信号。正在运行的协议是：2的Ca 2 + 1分，0的Ca 2 + 1分钟FLUSH距离的Ca 2 +，锰2 +为0.5分钟，锰2 + / 10分钟，和Mn 2 TG + / EGTA的Triton X-100（0.1％）。 </li></ol> 4。空间和时间上解决皮肤肌纤维SOCE <ol><li>准备以下的解决方案。 等渗缓冲台氏：140毫米氯化钠，氯化钾5毫米，10毫米的肝素钠，MgCl 2的 2毫米，2.5毫米氯化钙2，pH值7.2，290 mosm 培养基：2％和1％的马血清青霉素，链霉素的DMEM培养液 解决方案＃1：109.6毫米的K-谷氨酸， 洗净 2毫米EGTA氢氧化钾，6.7毫米MgCl 2的三磷酸腺苷，2毫米，6毫米的磷酸肌酸（CP）20毫米列印，N-二（2 -羟乙基）-2 -氨基乙酸（BES），氢氧化钾，pH值7.0 清洗解决方案＃2：140毫米的K-谷氨酸EGTA-KOH毫米，6.5毫米MgCl 2的 ，2毫米的三磷酸腺苷，CP的6毫米，20毫米的BES，氢氧化钾，pH值7.0，5 剥皮的解决方案：140毫米的K-谷氨酸，MgCl 2的 6.5毫米，2毫米的三磷酸腺苷，CP的6毫米，20毫米的BES，氢氧化钾，pH值7.0 TT加载解决方案：90.6毫米，18毫米谷氨酸钠， 氯化钙 0.55毫米，2毫米EGTA-KOH，MgCl 2的 6.7毫米，5.4毫米ATP，15毫米的CP，0.0025毫克/毫升肌酸激酶（CK），20毫米的K-谷氨酸百世氢氧化钾，5微米羰基氰化物P-trifluoromethoxyphenylhydrazone（FCCP），PCA，pH值7.0 7.0 SR装载解决方案：107.8毫米，0.98毫米氯化钙2，EGTA-KOH 2毫米，6.6毫米MgCl 2的 ATP的5.4毫米，15毫米的CP，0.0025毫克/毫升对照，20毫米的BES-氢氧化钾，5微米FCCP的K-谷氨酸， pH值7.0，6.6前列腺癌 简消耗的解决方案：K -谷氨酸，100毫米40毫米10毫米谷氨酸钠，EGTA-KOH，10毫米1,2 -双（邻氨基苯氧基）乙烷-N，N，N&#39;，N&#39;-四乙酸（BAPTA ），0.35毫米MgCl 2的 ATP的0.5毫米，1毫米，20毫米的BES-氢氧化钾的CP，5微米FCCP，pH值7.0。 25毫米caffeine/20μM的毒胡萝卜素（TG），实验前加入。 </li><li>解剖的趾长伸肌（EDL）的肌肉，先放下老鼠，并安排在腿侧卧位，然后从脚踝到膝盖皮肤，切浅表肌肉层组织揭露了EDL，并断绝上下肌腱释放完整的EDL肌;重要的是保持尽可能长的肌腱。 EDL是转移到台氏液，含0的Ca 2 +和EGTA 0.1毫米，以防止任何收缩。 </li><li>立体显微镜下，用两个镊子保持较低的插入肌腱，并分成两束的EDL肌。重复的过程，以获得4年，然后8束。肌腱保持在该进程的结束，8束，这是关键。如果他们失去了一些捆绑，抛弃他们。 </li><li>立体显微镜下，每个EDL捆绑带是抱怨道，两筋和仔细拉长，直到3〜4分离的单个肌纤维都留下完整与肌腱两侧。 </li><li>将1滴的Ca 2 +在中间的玻璃底菜免费台氏缓冲直线上的菜，放下了EDL带，尽可能的快速清除解决方案，然后都用防水胶带，确保磁带的筋向下的磁带是严密的。先洗纤维0的Ca 2 +溶液中，然后用2.5毫米的Ca 2 +溶液的2倍。如果纤维超合同和损害注意到，丢弃的纤维。 </li><li>如果需要，可以培养的光纤长达96小时，使遗传操作。完整的培养基洗纤维的3倍，并加入2毫升入菜的介质，在5％CO 2和37°C间孵化器的地方。每次实验前，检查肌肉纤维和丢弃那些没有明确的条纹或污染的迹象，或如细胞膜膜挛缩损伤的迹象。良好的纤维回应，氯化钾，电刺激，刺激和咖啡因。 </li><li>单肌纤维的洗涤与洗涤液＃1的3倍和沐浴Rhod-5N 500微米和0.5毫米的Ca 2 + 5分钟内像剥皮的解决方案。 </li> &lt;李&gt;使用钨针连接到针座，机械立体显微镜下皮肤的纤维，使横小管（TT），自动重新密封，并捕获与Ca 2 Rhod-5N共轭+在TT，两次洗皮肤纤维洗涤液＃2。在蒙皮过程中删除单元格的宽度小于25％时是最佳的机械剥皮过程。 </li><li>加载SR，皮肤纤维孵育20μM的FLUO-5N 1小时，在室温下，广泛使用一个额外的30分钟洗涤液＃2，孵育清洗，让皮肤含有的解决方案，完整的去酯化染料。 </li><li> 30分钟后，皮肤纤维60X客观的共聚焦显微镜下可视化。获得相应的染料（激发波长为543 nm和发射时间比570纳米Rhod-5N;激发在488 nm和排放量在530-560纳米荧光5N）波长的荧光图像。 regi每个染料装领域选择感兴趣的组件（投资回报）​​。 </li><li>实验的协议如下：TT -负荷为120秒，装载的SR-120，SR消耗400-750以消耗的SR的Ca 2 +存储的解决方案解决方案解决方案。在此过程中，Rhod-5N强度的变化（电汇的Ca 2 +）和5N荧光强度（简的Ca 2 +）的记录，创造一个相对荧光的变化，在TT和SR的时间当然决心。荧光强度的平均值，从多种纤维作进一步分析。在TT /简式结束时的最大负荷强度正常化至100％。 </li></ol> 5。代表结果我们审查KYSE-150细胞的SOCE活动，利用细胞内Ca 2 +测量（ 图2）。使用利福平作为记者，我们可以选择orai1含有特定的shRNA质粒转染对单个细胞的基因编码SOCEÇhannel。与转染质粒与含有争夺的shRNA（ 黑色线 ），敲Orai1减少的SOCE活动（ 红色曲线 ）的蛋白质结果。 SOCE KYSE-150细胞中也证实了Mn 2 +淬火法（ 图3）。激发波长为360 nm报告等色点的Fura-2，荧光是独立的Ca 2 +浓度。后甘油三酯完全耗尽的ER的Ca 2 +店，灌注的Mn 2 +导致在一个显着的荧光减少。整体SOCE活动可以衡量的Fura-2荧光强度显示出更积极的SOCE一个陡峭的斜坡下降速率，而浅的斜坡意义不太积极的SOCE。 2建业细胞荧光下降的斜率要浅得多，这表明，这种化合物被阻断SOCE活动。锰2 +淬火率进行了测定，从最初的10秒，淬火仍然没有饱和的线性范围的记录。 类似的锰2 +淬火法进行肌肉（ 图4）。在这种情况下，锰2 +与TG。而甘油三酯消耗的SR的Ca 2 +商店，荧光猝灭坡逐渐改变，直至达到其最大速率。 S形曲线，表明这些实验条件下的分级SOCE激活。 健康完好的文化单肌纤维表现出明确和统一的条纹，没有污染的迹象，没有收缩损伤的迹象。这些纤维能够响应电刺激或去极化的解决方案合同。在共聚焦成像，Rhod-5N染料剥皮纤维在TT车厢诱捕表明哺乳动物的特征双峰模式（visu就是靠在红色通道）。在加载SR FLUO-5N上午，穿插典型的SR模式是可见的（绿色通道）。 TT /简装载解决方案的皮肤纤维灌注后，Rhod-5N和Fluo-5N荧光强度增加;灌注SR枯竭的解决方案后，在SR车厢和TT的车厢荧光水平开始下降，表明紧耦合之间的SR的Ca 2 +商店枯竭和SOCE激活，分别为（ 图5）。 <img src="/files/ftp_upload/3415/3415fig1.jpg" alt="图1" /> 图1。激活存储操作的Ca 2 +进入（SOCE）。Orai1，孔隙通道形成单位，位于质膜（PM）和STIM1的， 一种 Ca2 +传感器，位于质或肌质网（ER / SR）的膜。时，ER / SR的Ca 2 +门店减少，由于封锁，ER / SR的Ca 2 +泵（电监会A）或通过IP 3受体或ryanodine受体的Ca 2 +释放，STIM1的被激活。激活STIM1的分子形成的补丁和诱导的聚集Orai1，从而进一步导致SOCE激活。 <img src="/files/ftp_upload/3415/3415fig2.jpg" alt="图2" /> 图2。测量KYSE-150细胞内Ca 2 +在细胞外液的外汇。0的Ca 2 +（0.5毫米EGTA）到2毫米的Ca 2 +并没有引起任何细胞内钙离子的变化。 5μM的甘油三酯在0的Ca 2 +沐浴液引起的被动的ER的Ca 2 +释放。耗尽后雌激素受体 ​​的Ca 2 +商店（10分钟），持续内Ca 2 +海拔SOCE，可以通过阻断SOCE抑制剂通过激活胞外Ca 2 +（2毫米）此外，如SKF-96365和2 -建业（数据未显示）。含有专门针对的shRNA质粒转染细胞orai1（红色）显示SOCE争夺序列（黑色）转染细胞相比，显着降低。 <img src="/files/ftp_upload/3415/3415fig3.jpg" alt="图3" /> 图3。锰2 +的SOCE淬火法在KYSE-150细胞的Ca 2 +独立的Fura-2（360 nm）的激发波长测定锰2 +（0.5毫米）的Fura-2荧光猝灭。细胞经5μM10分钟TG完全耗尽的ER的Ca 2 +商店。 +加法（虚线，在第10秒）后， 锰的Fura-2荧光衰减斜率代表，这是表示单位时间内的荧光（初始值的100％）减少百分之SOCE激活。最大淬火的荧光信号是建立在实验结束后，裂解细胞，0.1％的Triton X-100（0％）。 2-APB（75μM）处理的细胞表现出了浅斜坡，建议SOCE这KYSE-150细胞中的化合物被封锁。 <img src="/files/ftp_upload/3415/3415fig4.jpg" alt="图4" /> 图4。在肌肉细胞中发现锰2 +淬火法梯度SOCE激活。SOCE激活可以注册，而甘油三酯的消耗SR的Ca 2 +商店。同时应用的Mn 2 +（0.5毫米）和TG（20μM）诱导细胞内的Fura-2荧光（青色虚线显示最快的淬火点），这是明显的，从最初的锰2 +淬火梯度和S形下降率（蓝色虚线）。锰2 +淬火坡度为2-APB（75μM）处理的基底细胞水平几乎保持相同，这表明，SOCE抑制。 <img src="/files/ftp_upload/3415/3415fig5.jpg" alt="图5" /> 图5。空间和时间上解决皮肤的肌纤维SOCE。 （一）RHOD-5N盐加载到TT和FLUO-5N AM被加载到的SR（B）申请的Ca 2 +消耗的解决方案后，在TT和SR车厢荧光下降。 FLUO-5N荧光的损失迅速释放的SR的Ca 2 +含量和Rhod-5N荧光损失建议SOCE激活。

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	<li>Parekh, A. B., Putney, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-operated+calcium+channels.">Store-operated calcium channels.</a> Physiol. Rev. 85, 757-810 (2005).</li><li>Ma, J., Pan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+activation+of+store-operated+calcium+channel.">Retrograde activation of store-operated calcium channel.</a> Cell Calcium. 33, 375-384 (2003).</li><li>Feske, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ORAI1+and+STIM1+deficiency+in+human+and+mice:+roles+of+store-operated+Ca2++entry+in+the+immune+system+and+beyond.">ORAI1 and STIM1 deficiency in human and mice: roles of store-operated Ca2+ entry in the immune system and beyond.</a> Immunol. 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B., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+intracellular+Ca2++by+caffeine+and+ryanodine+induces+apoptosis+of+chinese+hamster+ovary+cells+transfected+with+ryanodine+receptor.">Depletion of intracellular Ca2+ by caffeine and ryanodine induces apoptosis of chinese hamster ovary cells transfected with ryanodine receptor.</a> J. Biol. Chem. 275, 19978-19984 (2000).</li><li>Hirata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+store-operated+Ca2++entry+and+altered+Ca2++release+from+sarcoplasmic+reticulum+through+silencing+of+junctophilin+genes.">Uncoupling store-operated Ca2+ entry and altered Ca2+ release from sarcoplasmic reticulum through silencing of junctophilin genes.</a> Biophys. 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没有利益冲突的声明。

虽然的Ca 2 +结合的Ca 2 +免费的Fura-2激发波长为340 nm和380 nm处，分别的最佳比例的Fura-2的动态范围为Ca 2 +浓度测量，可能会发生在其他波长在一个特定的显微镜系统。波长的这种变化通常是由于除了与各种光学元件的光学路径的变化。在这项研究中，FURA-2激发波长为350 nm和390 nm的决定FURA-2荧光光谱的分析。 细胞内Ca 2 +水平的细胞质结果从几个来源的平衡，包括细胞内Ca 2 +释放，细胞外Ca 2 +进入，以及在ER和细胞膜钙离子排斥机制。为了隔离从单向SOC介导的Ca 2 +涌入细胞内Ca 2 +释放和Ca + EXTR延髓的Mn 2 +淬火法都可以使用。锰2 +被称为是能够渗透到细胞通过SOCE，但防渗膜表面挤压或吸收钙的ER +泵。因此，荧光猝灭代表进入细胞的单向锰2 +流量测量估计SOCE激活程度。锰2 +淬火法等色点波长在这样的Fura-2荧光强度是独立的Ca 2 +浓度。为每个系统等色点应确定由光谱扫描。另外， 锰+淬火可以在任何两个波长，在这样一种方式，最终的价值是独立的Ca 2 +浓度13记录调整后的荧光。 为了获得的SOCE骨骼肌肉的活动空间和时间的信息，我们采用双染的方法，它允许同时measuremeNT SOCE活性和SR的Ca 2 +在皮肤成年哺乳动物的EDL肌纤维含量。 SR钙2的变化之间的关系+活动内容和SOCE可以绘制指示阈值和灵敏度SOCE激活枯竭的SR的Ca 2 +存储的。 TT加载的解决方案进行了优化，另外加载的T管与Ca 2 +和吸T型管和SR的装载解决方案旨在促进最大的SR的Ca 2 +负荷，另外加载的T-管〜500微米的Ca 2 +。 FCCP在TT /简加载的解决方案和SR消耗的解决方案，以消除从线粒体的影响。

特定的试剂和设备表： <table border="1"><tbody><tr><td> 试剂名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td><td> 评论 </td></tr><tr><td> RPMI 1640培养</td><td>敏达</td><td> 10-040-CV </td><td></td></tr><tr><td>火腿的的F-12 </td><td>敏达</td><td> 10-080-CV </td><td></td></tr><tr><td> DMEM培养液</td><td>敏达</td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td>玻璃底菜</td><td> MatTek </td><td> P35G-1.5-14-C的</td><td></td></tr><tr><td> FURA-2 </td><td> Invitrogen公司（分子探针） </td><td> F1221 </td><td> -20℃，密封紧密，避光，溶解到二甲基亚砜</td></tr><tr><td>荧光5N </td><td> Invitrogen公司（分子探针） </td><td> F14204 </td><td> -20℃，密封严密，从l保护IGHT </td></tr><tr><td> rhod-5N </td><td> Invitrogen公司（分子探针） </td><td> R14207 </td><td> -20℃，密封紧，轻保护</td></tr><tr><td>石英比色皿</td><td> starna细胞</td><td> 3 Q-10 </td><td></td></tr><tr><td>毒胡萝卜素</td><td> tocris </td><td> 1138 </td><td></td></tr><tr><td> 2 Aminoethoxydiphenylborane（2-APB） </td><td> tocris </td><td> 1224 </td><td></td></tr><tr><td> N-苄基-P-甲苯磺酰胺（基站） </td><td> Sigma-Aldrich公司</td><td> 435600 </td><td></td></tr><tr><td>胶原酶I型</td><td>西格玛</td><td> C0130 </td><td></td></tr></tbody></table>设备： <ol><li>一个荧光光谱仪（光子技术国际，新泽西州）：氙弧灯，电脑控制高速随机存取单色，试管基于TE-200倒置荧光发射单色器，尼康microscopE，的小号氟40x/1.30石油的目标，PMT探测器。 </li><li>激光扫描共聚焦显微镜（Radiance210​​0 BioRad公司）：453/477/488/514氩激光，氦氖激光543nm，尼康TE2000倒置显微镜，60X目标（不适用1.4，油）。 </li><li>一个立体显微镜放大功率&gt; 100（蔡司STEMI SV11 APO）。 </li></ol>

fluorescence-based measurement of store-operated calcium entry in live cells: from cultured cancer cell to skeletal muscle fiber

商店经营的Ca 2 +进入（SOCE），早期称为库容的Ca 2 +进入，是一个涌入细胞外Ca 2 +进入细胞，以补充枯竭的内质网（ER）或肌浆网（SR）的Ca 2 +商店严格监管机制1,2。由于钙离子是一种普遍存在的第二信使，它是不奇怪，SOCE多种细胞过程中起着重要的作用，包括增殖，凋亡，基因转录和运动。由于其广泛发生在几乎所有类型的细胞，包括上皮细胞和骨骼肌，这一途径已得到极大的兴趣3,4。然而，在不同类型的细胞和生理功能的SOCE特征的异质性仍然不明确5-7。 SOCE功能的通道特性可以发现，而大量的知识约氏体膜片钳研究基于荧光的细胞内钙离子的测量，因为它的方便和高通量筛选的可行性已经获得人生道路。本报告的目的是总结了一些基于荧光的方法来衡量SOCE在单层细胞，悬浮细胞和肌纤维5,8-10激活。最常使用这些荧光的方法是直接动态监测胞内Ca 2 +使用的F 340nm的发射波长（510 nm）的比例的Ca 2 +荧光浓度指示剂fura-2和F 380nm的比例。隔离开来单向SOCE活性细胞内Ca 2 +释放和Ca 2 +挤压，常用的Mn 2 +淬火法。锰2 +被称为是能够渗透到细胞通过SOCE，而这是防渗膜表面的挤压过程，或雌激素受体 ​​摄取钙+泵由于其非常高的亲和力机智ĤFURA-2。因此，外锰2 +进入细胞诱导的Fura-2荧光猝灭SOCE 9测量的活动。可以进行比率测量和Mn +2淬火检测细胞的人口模式，或在显微镜为基础的系统，以可视化的单细胞在试管基于分光光度计。单细胞测量的优点是可以选择使用GFP或RFP的记者，让转基因或突变的细胞研究，基因操作的单个细胞。 SOCE结构专门骨骼肌中的时空特征，可以实现皮肤的肌纤维，同时监测两个低亲和力钙荧光FLUO-5N，如肌纤维中的SR和具体的车厢有针对性地+指标Rhod 5N在横管9,11,12。

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Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

店经营CA的程度<sup&gt; 2</sup使用荧光钙可以监视&gt;进入（SOCE）<sup&gt; 2</sup&gt;指标。锰<sup&gt; 2</sup&gt;等指标检测在培养细胞和骨骼肌纤维的SOCE淬火。允许的时间和空间分辨率SOCE机械剥皮的肌肉纤维的共焦成像的一种技术也被描述。

基于荧光测定活细胞中的钙进入商店经营：从培养的肿瘤细胞，骨骼肌纤维

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

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21.0K 次观看.  Robert Wood Johnson Medical School. 店经营CA的程度 2进入（SOCE） 2指标。锰 2等指标检测在培养细胞和骨骼肌纤维的SOCE淬火。允许的时间和空间分辨率SOCE机械剥皮的肌肉纤维的共焦成像的一种技术也被描述。