我们想感谢所有成员的香港实验室和邓焰博士为的显微镜核心，办公室协同科学，NYUMC他们的援助和技术支持。这项工作是支持的试点补助金从纽约大学艾滋病研究中心（CFAR，美国国立卫生研究院授予AI027742）。

1。质粒DNA纯化<ol><li>变换到DH5α 大肠杆菌感受态细胞的真核质粒DNA编码EGFP（PCX-EGFP）。空PCX载体也可以使用作为阴性对照。 </li><li>文化和收获DH5α 大肠杆菌细胞和纯化的质粒DNA根据到的Qiagen公司EndoFree的质粒纯化手册“。 </li><li>筛选pDNA的溶液通过0.22μm的PVDF无菌过滤器，并将其储存在-20℃直到使用。 </li></ol> 2。纹身系统准备<ol><li>手持式单元和控制踏板连接到电源单元，按照制造商的说明书。 </li><li>设置针的振荡频率约为100赫兹。我们选择了纹身的设备（隐形旋转纹身系统），表盘上的电源应设置为4伏。请参阅用户手册或其他纹身系统的技术支持。 </li><li>消毒针头AR使用光前。我们建议您使用一个针阵列的每个动物。用肥皂水清洗和高压灭菌后可重复使用的针。 </li><li>针阵列安装到手持设备和松散连接的塑料把手。 </li><li>针深度调整到一个适当的设置，通过向上或向下移动的塑料的抓地力。我们使用我们的小鼠实验深度大约为0.5毫米的针。 </li><li>正确设置时，进针深度，拧紧塑料把手和纹身系统是可以使用的。 </li></ol> 3。动物剃毛<ol><li>选择网站纹身的治疗。该网站应该是一个相对稳固，平坦的，和肉质部位的皮肤，例如，动物的后腿侧。 </li><li>与氯胺酮（90毫克/千克）和赛拉嗪（5毫克/公斤），根据动物的体重的混合物麻醉的BALB / c小鼠。对于其他动物，请参阅您的机构的麻醉指引。 </li><li>检查动物的反射，按捏它的脚，以确认动物是适当的麻醉。 </li><li>使用电剪修剪下来的头发，动物的后肢慢慢地，仔细地。从计划的纹身现场及周边地区的去除毛发。 </li><li>去除残留的短发的一次性使用的安全剃须刀。注意不要剪动物的皮肤。需要注意的是，可以使用脱毛膏脱毛作为一种替代方法;然而，我们宁愿剃须超过脱毛膏。 </li><li>删除杂散切下的毛发从皮肤如有必要，用压缩空气。 </li></ol> 4。质粒DNA的纹身交货<ol><li>如果先前已建立的免疫协议，剂量和要应用的DNA溶液的体积应据此计算。我们建议您使用尽可能小的体积为实际使纹身的过程中更易于管理。在这EGFP示范，我们使用7.5μlDNA溶液在CON对中的0.25毫克/毫升，施加到一个纹身面积约1厘米2。用于免疫的实验中，更高的质粒DNA浓度可能需要诱导强烈的免疫反应1,2。 </li><li>纹身的网站上移液直接应用DNA解决方案。可替换地，加载到塑料把手的DNA溶液通过移液，因此针和塑料把手的前端之间的液体悬浮。一个用于演示的视频。我们已观察到的两种方法之间没有明显的区别。然而，加载溶液倒入塑料把手可能是有利的垂直的皮肤表面上，例如。 </li><li>启动针振荡和放置针阵列与动物的皮肤纹身的站点上的压力的光。然后将振荡针轻轻地，慢慢地以线性方式提供质粒DNA在整个纹身区。维持一个90度角之间的针和皮肤上，以免皮肤割伤。 </li><li>观察皮肤。磨损和炎症是正常的。如果出血情况时，停止纹身的过程中，减少进针深度。 </li><li>继续针运动约1分钟，然后停止纹身的过程。 </li><li>用干净的棉签涂抹一层薄薄的局部止痛纹身的网站上。如磺胺嘧啶银乳膏（SSD霜）或抗生素软膏软膏外用止痛药可以帮助减轻疼痛或痛苦的动物，因此建议申请前的麻醉消退。第二天观察动物的疼痛或痛苦的步态变化，缺乏运动的迹象。如果仍然存在的迹象，重新应用止痛膏。 </li></ol> 5。确认抗原的表达<ol><li>纹身的治疗后48小时内（注意，不同的质粒DNA结构可能需要不同的表达时间），鼠标CO 2麻醉安乐死。对于其他动物安乐死的指引，你的机构。 </li><li>剖析在纹身的部位，并修复皮肤组织4％多聚甲醛4℃过夜。 </li><li>用70％乙醇冲洗组织，并将其转移到的1X PBS中，用于成像。 </li><li>检查整个组织使用激光共聚焦显微镜检查EGFP信号。另外，皮肤组织可以被嵌入在石蜡中，并在荧光显微镜下检查节。 </li></ol>

<ol>
	<li>Bins, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+potent+DNA+vaccination+strategy+defined+by+in+vivo+monitoring+of+antigen+expression.">A rapid and potent DNA vaccination strategy defined by in vivo monitoring of antigen expression.</a> Nat Med. 11, 899-904 (2005).</li><li>Pokorna, D., Rubio, I., Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-vaccination+via+tattooing+induces+stronger+humoral+and+cellular+immune+responses+than+intramuscular+delivery+supported+by+molecular+adjuvants.">DNA-vaccination via tattooing induces stronger humoral and cellular immune responses than intramuscular delivery supported by molecular adjuvants.</a> Genet. Vaccines Ther. 6, 4 (2008).</li><li>van den Berg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intradermal+vaccination+by+DNA+tattooing+in+human+skin.">Optimization of intradermal vaccination by DNA tattooing in human skin.</a> Hum. Gene Ther. 20, 181-189 (2009).</li><li>Liu, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines:+a+review.">DNA vaccines: a review.</a> J. Intern. Med. 253, 402-410 (2003).</li><li>Koide, Y., Nagata, T., Yoshida, A., Uchijima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccines.">DNA vaccines.</a> Jpn. J. Pharmacol. 83, 167-174 (2000).</li><li>Peachman, K. K., Rao, M., Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+DNA+through+the+skin.">Immunization with DNA through the skin.</a> Methods. 31, 232-242 (2003).</li><li>Verstrepen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+HIV-1+specific+T-cell+responses+by+short-interval+DNA+tattooing+as+compared+to+intramuscular+immunization+in+non-human+primates.">Improved HIV-1 specific T-cell responses by short-interval DNA tattooing as compared to intramuscular immunization in non-human primates.</a> Vaccine. 26, 3346-3351 (2008).</li><li>Potthoff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+and+efficacy+of+intradermal+tattoo+immunization+with+adenoviral+vector+vaccines.">Immunogenicity and efficacy of intradermal tattoo immunization with adenoviral vector vaccines.</a> Vaccine. 27, 2768-2774 (2009).</li><li>Quaak, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+tattoo+vaccination:+effect+on+plasmid+purity+and+transfection+efficiency+of+different+topoisoforms.">DNA tattoo vaccination: effect on plasmid purity and transfection efficiency of different topoisoforms.</a> J. Control Release. 139, 153-159 (2009).</li><li>Pokorna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+with+human+papillomavirus+type+16-derived+peptides+using+a+tattoo+device.">Vaccination with human papillomavirus type 16-derived peptides using a tattoo device.</a> Vaccine. 27, 3519-3529 (2009).</li></ol>

没有利益冲突的声明。

DNA疫苗比传统的疫苗接种策略，被认为是更安全，因为它不要求操作，或暴露疫苗，活的或减毒的病原体。然而，DNA疫苗接种的结果，在很大程度上依赖于配送路线。皮肤是丰富的抗原呈递细胞，如朗格汉斯细胞和树突状细胞1，从而在一个理想的站点用于免疫的免疫原性和易于访问5,6。其结果是，皮内接种策略是用于DNA疫苗的最流行的选择之一。在这个视频中，DNA纹身是一个简?...

<table border="1"><tbody><tr><td>的试剂/材料名称</td><td>公司</td><td>目录编号</td><td>评论</td></tr><tr><td> PCX-EGFP质粒DNA </td><td> Clontech公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEALTH旋转纹身系统</td><td>全球纹身器材</td><td> STEALTH-L </td><td></td></tr><tr><td>纹身针</td><td>全球纹身器材</td><td> 1207RSB </td><td></td></tr><tr><td> EndoFree质粒试剂盒</td><td> Qiagen公司</td><td> 12362 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22微米PVDF无菌过滤器</td><td>密理博</td><td> SLGV013SL </td><td></td></tr><tr><td>电发剪</td><td>市售</td><td></td><td></td></tr><tr><td>一次性使用的安全剃须刀</td><td>市售</td><td></td><td></td></tr><tr><td>银磺胺嘧啶霜</td><td>沃森</td><td> NDC 0591-0810-55 </td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮HCL </td><td></td><td> NDC 0856-2012-01 </td><td></td></tr><tr><td> Zylazine无菌溶液</td><td></td><td> NADA 139-236 </td><td></td></tr></tbody></table>

skin tattooing as a novel approach for dna vaccine delivery

基于核酸的疫苗接种是一个主题的日益增长的兴趣，特别是质粒DNA（pDNA的）编码免疫学上重要的抗原。工程质粒DNA疫苗给药后，它被转录和翻译成免疫原的蛋白质，可以从免疫系统引起的反应。提供DNA疫苗的方法很多被调查，但每次送货路线都有自己的优点和缺陷。皮肤纹身是一种新的技术是安全的，符合成本效益，方便的。此外，穿刺针造成，也可以作为一种有效的佐剂。在这里，我们a）表现出增强型绿色荧光蛋白的质粒DNA编码的皮内交付（PCX-EGFP）在小鼠模​​型中，使用纹身的移动设备和b）在皮肤细胞中，使用共聚焦显微镜，确认有效的EGFP表达。

在小鼠皮肤细胞中可以观察到在488nm和发射峰在509 nm处的激发峰的EGFP的表达。从1.875μg剂量的DNA，含有约3×10 17个拷贝的质粒，我们通常观察到10-20的EGFP信号在1厘米2纹身面积。这种相对较低的转染细胞的数量是先前的研究3的结果相一致。 EGFP表达（ 图1）提供的证据表明，EGFP质粒被输送到动物的皮肤细胞，使用的DNA纹身技术。 <p class="jove_content" fo:keep-togethe...

Watch this Scientific Journal Video about Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery at JoVE.com

Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

皮肤纹身是一个强大的和安全的方式来传递DNA疫苗皮内。在这里，一个DNA质粒EGFP交付纹身实验室小鼠的皮肤，和EGFP在皮肤细胞中的表达，然后通过激光共聚焦显微镜检查。

皮肤纹身作为一种新的方法DNA疫苗交货

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

skin-tattooing-as-a-novel-approach-for-dna-vaccine-delivery

Research

JoVE Journal

Bioengineering

15.8K 次观看.  New York University School of Medicine. 皮肤纹身是一个强大的和安全的方式来传递DNA疫苗皮内。在这里，一个DNA质粒EGFP交付纹身实验室小鼠的皮肤，和EGFP在皮肤细胞中的表达，然后通过激光共聚焦显微镜检查。