我们感谢EUROSARF向我们发送咨询酵母表达质粒。我们也感谢来自瑞安Labadens社论帮助。这项工作是由美国国立卫生研究院一/ NINDS补助金（R01NS070962）为CW支持

1。产生UAS-TAP标签的转基因果蝇<ol><li>产生pUAST-TAP标签的DNA结构。 <ol><li>决定（N-或C-末端）诱饵蛋白的哪一侧的TAP标记应被融合到，基于蛋白质的结构/功能。详细信息请参见讨论。 </li><li>亚克隆目的基因的cDNA编码区插入pUAST-NTAP或pUAST-CTAP载体的多克隆位点（MCS），以生成N-或C-末端标记的UAS-TAP转基因，分别。参见图1详细的地图和可用限制性酶切位点和读码框。 </li></ol></li><li>产生UAS-TAP标记的转基因果蝇。 <ol><li>产生转基因果蝇以下用P元素介导的插入11标准协议。市售许多注射服务。 </li><li>交叉神经GAL4驱动程序（ 即 BG380-GAL4）每个单独的转基因株系，并确定蛋白表达水平每行由免疫印迹（用过氧化物酶抗过氧化物酶抗体）和/或免疫（抗-TAP抗体）的。在一般情况下，用蛋白质表达水平是接近内源蛋白的转基因株系被推荐用于丝锥程序。详细信息请参见讨论。 </li><li> PerformGAL4/UAS-based拯救实验来证实在TAP标记的转基因的功能，如果可丧失功能的目的基因的突变体。选择转基因，可以基本上挽救突变体的表型为下面的TAP实验。 </li></ol></li></ol> 2。准备样本的TAP程序<ol><li>生成一个苍蝇的股票，同时携带一个神经元GAL4驱动程序（ 如 BG380-Gal4的），为了缓解扩张苍蝇样本的选择TAP标签的转基因。收集GAL4驱动程序并在极少数情况下，UAS-转基因交叉时，上面的组合会导致生存和成长不利的F1后代。&lt;/ LI&gt; <li>收集小规模样品和优化裂解条件，增溶TAP-标签蛋白。 <ol><li>使用非离子洗涤剂NP-40（0.1-1％），NaDOC（0.1-1％）和Triton X-100（0.05-0.5％）的组合的系列裂解缓冲液中。 见表1和讨论了解更多信息。 </li><li>在二氧化碳垫的顶部，使用＃5镊子从表达苍蝇在TAP基因解剖20成人头和收集他们在1.5ml试管测试每个裂解缓冲液条件。 </li><li>添加100 UL检测裂解液管，均质头摸摸上下用塑料杵，然后再添100 UL测试缓冲区。 </li><li>旋转磁头裂解物在21500×g离心10分钟（4℃），并分离离心分离后的上清液和沉淀。加入25微升2×SDS上样缓冲液，以分别将沉淀和10微升4×SDS上样缓冲液30微升上清液。 </li><li>煮沸2样品5分钟，并分析它们并排侧使用SDS-PAGE及随后的Western印迹与PAP抗体。由TAP-蛋白水平的上清液与沉淀的比值决定的溶解度。 </li></ol></li><li>在大规模制备样品<ol><li>扩大并收集成蝇。 <ol><li>展开neuronal-GAL4/UAS-TAP-transgene股票的瓶子和翻转，每3天，直到累计250瓶用于收集瓶。 </li><li>收集1-3日龄成蝇入50ml锥形管，把管子立即在液氮中的苍蝇深度冻结。存储苍蝇在-80°C冰箱。注意，苍蝇的体积必须不超过50毫升管的2/3。 </li></ol></li><li>收集苍蝇头（执行上粉状干冰顶部此步骤）。 <ol><li>取出预冷的筛子，并从-80°C冰箱的研钵和杵，并把它们放在干冰，最好里面一个大的冰桶。栈中的两处美国标准试验筛与上个25号Ë顶部和底部40号​​。 </li><li>采取冻结苍蝇出来，把它们在液氮中，并保持苍蝇在那里约10分钟。涡或摇晃试管大力从机构打破了头，腿和翅膀。 </li><li>把混合物顶端筛子，然后摇动筛大力按住两个筛子一起。筛分后，尸体会留在上面筛，飞头将被保留在底部筛板，和腿，翅膀，和其他碎片将坠落于干冰。分开两筛并仔细苍蝇头转移到冷砂浆。 </li></ol></li><li>均质苍蝇头<ol><li>干冰的顶部，研磨头与臼和杵粉粒，然后将粉末转移到预冷是在冰上有15毫升的玻璃Dounce型组织研磨。 </li><li>测量粉碎机的重量前后头部样​​品倒入，然后计算出头部多少SAMP乐晕死。总共有6-15克飞头将足以为每个TAP实验做出相应的调整，以蛋白质的表达水平。加入15毫升冰冷的匀浆缓冲液（在步骤2.2优化的裂解液）的粉末，然后与中风的间隙过大杵，直到它容易使杵上去和下来。保持玻璃研磨机上的冰在任何时候。 </li></ol></li><li>准备上清液进行咨询<ol><li>将匀浆转移至高速离心管中并旋转20分钟，〜50,000×g离心（4℃）。将上清转移到一个新的高速离心管中，重复离心一次。 </li><li>将上清转移至超速离心管并进行40分钟〜250,000×g离心旋转，以进一步清除上清液。上清液准备超速离心后的串联亲和纯化程序。 </li></ol></li></ol></li></ol> 3。 TAP纯化</p&gt; 以下各节均来自塞拉芬实验室技术咨询protocol 12 (http://web.as.uky.edu/Biology/faculty/rymond/BIO%20510/Bertran%20Seraphin%27s%20TAP%20page.pdf ） <ol><li>执行的IgG磁珠亲和纯化<ol><li>准备的IgG琼脂糖珠而样品被离心。在一个15毫升的Falcon管中，用10ml冷的IgG洗涤缓冲液洗涤400微升IgG抗体磁珠3次。对于每次洗涤，摇动管轻轻地，持续2分钟，然后停止旋转的有孔玻璃珠在1,000 xg下再持续2分钟。在第三次洗涤结束时，除去缓冲，并只留下珠粒在管。 </li><li>将澄清的上清液（约15毫升）小心地转移到15ml试管中含有IgG的珠子。孵化珠和脑裂解液混合，4℃一个nutator 2小时。 </li><li>建立一个干净的空微柱约15ml总量在寒冷的房间。通过稳步浇注混合成列装载的IgG珠的混合物，尽量不要任何陷阱气泡柱内。让珠定居在列和缓冲慢慢靠重力流排水。 </li><li>用10毫升冷的IgG洗涤缓冲液彻底清洗柱后，所有的脑细胞裂解液通过结算的IgG柱流过。重复洗涤2倍。注意：永远不要让空气中的珠干燥。 </li></ol></li><li>执行TEV酶切<ol><li>在第三次洗涤后，用10毫升TEV裂解缓冲液反复冲洗色谱柱。这一步准备的IgG珠的sequestrates诱饵复杂的TEV酶切。 </li><li>右侧前TEV缓冲区中的最后一滴欲滴出来，把帽子在柱的底部阻塞流，添加包含130个单位TEV酶的列1.3毫升TEV缓冲区中，然后安全地帽顶部列。确保该列在两端密封良好。 </li><li>旋转柱在18℃维持2小时，以允许TEV酶裂解的肽在TEV站点并释放蛋白复合WHI乐离开背后的蛋白质域肽绑定到的IgG琼脂糖珠。 </li></ol></li><li>执行钙调素磁珠亲和纯化<ol><li>制备的钙调蛋白珠，而IgG抗体磁珠孵育与TEV酶。在一个15毫升的Falcon试管3次，每次用10ml冷的钙调蛋白的结合缓冲液洗涤200μl的钙调蛋白珠。对于每一个洗，轻轻摇动试管一个nutator 2分钟，然后降速珠在1000×g离心2分钟。在第三次洗涤结束时，取出所有的缓冲液和仅保留在管中的小珠。 </li><li>在TEV孵化（步骤3.2.3）的结束，返回的IgG列回冷室，并设置它直线上升。让珠粒沉降10分钟。 </li><li>取下顶盖，然后将底盖，然后收集在15毫升猎鹰管1.3毫升TEV酶切产物。让缓冲区完全排出。添加一个额外的200微升TEV缓冲柱推出列的死体积，收集了F低中相同的管中。 </li><li>添加4.5毫升钙调素结合缓冲液和4.5微升1米氯化钙上面收集的1.5毫升TEV酶切产物。将氯化钙2用于滴定的EDTA在TEV缓冲液中。该6毫升混合物转移到含有钙调素珠的管和旋转管在4℃在章动器1小时。 </li><li>设立另一个干净的空微柱约10ml总量在寒冷的房间。加载钙调蛋白珠混合物的柱，并允许它通过重力排出。 </li><li>当所有的溶液已通过结算钙调素柱流出，洗柱2次，每次用10ml冷的钙调素的结合缓冲液中。注意：避免干扰钙调素珠，并尽量保持珠子尽可能平整的表面在洗。 </li></ol></li><li>从洗脱柱钙调素的饵料复杂。 洗涤后右，洗脱钙调素列有五个部分的200微升冷Calmodu林洗脱缓冲液。对每个级分，轻轻地加入200微升的洗脱缓冲液的柱，并收集与一个标记1.5ml离心管中的洗脱液。重复此4倍。 </li><li>分析通过SDS-PAGE的蛋白质复合<ol><li>取一小等分来自五个部分（约30微升），并加入SDS上样缓冲液。煮沸样品5分钟，并加载样品侧由端与一个梯度（4-15％）的SDS-PAGE凝胶上的蛋白质分子标记。 </li><li>后样品中的凝胶已经完全解决，停止电泳，染色凝胶与任何G-250为基础的敏感胶体考马斯亮蓝染色程序，如“青银”染色13。银染是可选的，但不是优选的，因为它不与随后的质谱分析完全兼容。在-80℃冷冻用于进一步的分析，如质谱法用于发现纯化的蛋白质复合物的分子身份存储洗脱液的其余部分。硒Ë讨论。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Rigaut, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generic+protein+purification+method+for+protein+complex+characterization+and+proteome+exploration.">A generic protein purification method for protein complex characterization and proteome exploration.</a> Nat. Biotechnol. 17, 1030-1032 (1999).</li><li>Collins, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+comprehensive+atlas+of+the+physical+interactome+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Toward a comprehensive atlas of the physical interactome of Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol. Cell. Proteomics. 6, 439-450 (1074).</li><li>Gavin, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+survey+reveals+modularity+of+the+yeast+cell+machinery.">Proteome survey reveals modularity of the yeast cell machinery.</a> Nature. 440, 631-636 (2006).</li><li>Krogan, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+landscape+of+protein+complexes+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Global landscape of protein complexes in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Nature. 440, 637-643 (2006).</li><li>Forler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+protein+complex+purification+method+for+functional+proteomics+in+higher+eukaryotes.">An efficient protein complex purification method for functional proteomics in higher eukaryotes.</a> Nat. Biotechnol. 21, 89-92 (2003).</li><li>Veraksa, A., Bauer, A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+protein+complexes+in+Drosophila+with+tandem+affinity+purification-mass+spectrometry.">Analyzing protein complexes in Drosophila with tandem affinity purification-mass spectrometry.</a> Dev. Dyn. 232, 827-834 (2005).</li><li>Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tandem+affinity+purification+technology:+an+overview.">The tandem affinity purification technology: an overview.</a> Biotechnol. Lett. 33, 1487-1499 (2011).</li><li>Volkel, P., Le Faou, P., Angrand, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+proteomics:+characterization+of+protein+complexes+using+tandem+affinity+purification-mass+spectrometry.">Interaction proteomics: characterization of protein complexes using tandem affinity purification-mass spectrometry.</a> Biochem. Soc. Trans. 38, 883-887 (2010).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tandem+affinity+purification+method:+an+efficient+system+for+protein+complex+purification+and+protein+interaction+identification.">The tandem affinity purification method: an efficient system for protein complex purification and protein interaction identification.</a> Protein Expr. Purif. 72, 149-156 (2010).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Bachmann, A., Knust, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+P-element+transposons+to+generate+transgenic+flies.">The use of P-element transposons to generate transgenic flies.</a> Methods Mol. Biol. 420, 61-77 (2008).</li><li>Puig, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tandem+affinity+purification+(TAP)+method:+a+general+procedure+of+protein+complex+purification.">The tandem affinity purification (TAP) method: a general procedure of protein complex purification.</a> Methods. 24, 218-229 (2001).</li><li>Candiano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+silver:+a+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue silver: a very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Tian, X., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+ubiquitin-mediated+pathways+in+regulating+synaptic+development,+axonal+degeneration+and+regeneration:+insights+from+fly+and+worm.">The role of ubiquitin-mediated pathways in regulating synaptic development, axonal degeneration and regeneration: insights from fly and worm.</a> J. Physiol. , (2013).</li><li>Wu, C., Wairkar, Y. P., Collins, C. A., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highwire+function+at+the+Drosophila+neuromuscular+junction:+spatial,+structural,+and+temporal+requirements.">Highwire function at the Drosophila neuromuscular junction: spatial, structural, and temporal requirements.</a> J. Neurosci. 25, 9557-9566 (2005).</li><li>Wu, C., Daniels, R. W., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DFsn+collaborates+with+Highwire+to+down-regulate+the+Wallenda/DLK+kinase+and+restrain+synaptic+terminal+growth.">DFsn collaborates with Highwire to down-regulate the Wallenda/DLK kinase and restrain synaptic terminal growth.</a> Neural Dev. 2, 16 (2007).</li><li>Tian, X., Li, J., Valakh, V., DiAntonio, A., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Rae1+controls+the+abundance+of+the+ubiquitin+ligase+Highwire+in+post-mitotic+neurons.">Drosophila Rae1 controls the abundance of the ubiquitin ligase Highwire in post-mitotic neurons.</a> Nat. Neurosci. 14, 1267-1275 (2011).</li><li>Burckstummer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+tandem+affinity+purification+procedure+for+interaction+proteomics+in+mammalian+cells.">An efficient tandem affinity purification procedure for interaction proteomics in mammalian cells.</a> Nat. Methods. 3, 1013-1019 (2006).</li><li>Kyriakakis, P., Tipping, M., Abed, L., Veraksa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tandem+affinity+purification+in+Drosophila:+the+advantages+of+the+GS-TAP+system.">Tandem affinity purification in Drosophila: the advantages of the GS-TAP system.</a> Fly. 2, 229-235 (2008).</li><li>Bailey, D., Urena, L., Thorne, L., Goodfellow, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+protein+interacting+partners+using+tandem+affinity+purification.">Identification of protein interacting partners using tandem affinity purification.</a> J. Vis. Exp. (60), e3643 (2012).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+Angelman+syndrome.">A Drosophila model for Angelman syndrome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 12399-12404 (2008).</li><li>Liao, L., McClatchy, D. B., Yates, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+proteomics+in+neuroscience.">Shotgun proteomics in neuroscience.</a> Neuron. 63, 12-26 (2009).</li></ol>

作者什么都没有透露。

串联亲和纯化（TAP）的方法提供了双纯化协议，允许通过两个独立的亲和纯化步骤的分离和蛋白质复合物的富集。在TAP标签的设计并不局限于所显示的内容在本协议中，其它蛋白结合结构域和图案也同样适用，如果缓冲液条件进行相应调整。其他的TAP标签的一个很好的例子是GS-TAP标签，G蛋白的结合和链霉亲和结合基序，由Giulio Superti-Furga小组力求在培养的哺乳动物细胞系18纯化蛋白复合物...

定义调解特定的生物过程中的分子途径或网络是生物医学研究的终极目标之一。飞遗传学家们严重依赖正向遗传学，尤其是修饰符遗传筛选（包括增强和抑制屏幕），以确定共同合作，与平行，或上游或目的基因的下游因素。然而，正向遗传学的屏幕，很多时候无法识别重要的基因，如果发生变异，导致杀伤力在早期发育阶段，或与基因功能冗余和补偿其失去功能只会造成细微瑕疵是很难得分。克服这一困难的一种方法是筛选直接的蛋白 - 蛋白相互作用。超过十年，生物化学方法，包括酵母双杂交，噬菌体展示，化学交联，联合知识产权，串联亲和纯化（TAP） 等越来越列表。已被用于研究蛋白质- 蛋白质相互作用。每种方法都有自己的一套优势和问候敏感性和特异性的弱点。其中，TAP方法可以检测物理相互作用下的近生理条件下，保留了特异性和一致性2，并包括延伸到高通量的能力，分析3,4。 最初是由Rigautand同事开发1在酵母中的TAP方法。在该方法中，目的蛋白质的表达用TAP标记。在TAP标签藏着两个独立的亲和力结合结构域：一个蛋白结合于IgG域和钙调素结合结构域。这两个结构域通过一个TEV（烟草蚀纹病毒）裂解位点隔开。这样的组合使得两个独立的两轮亲和纯化，以充分降低非特异性绑定和丰富具体的绑定1。对于这种情况下，TAP方法是一个非常强大的METHOd，来确定在给定的蛋白质的体内相互作用，虽然过表达外源蛋白可使其更易于与蛋白质通常不复杂的，其内源性的对应关联。由于它的发展时，TAP方法已经在许多其他系统，包括细胞培养为基础的系统5,6等体内模型系统应用6-9。在这里，我们描述了果蝇的咨询方法的适应性。我们首先生成pUAST-NTAP和pUAST-CTAP矢量以有利于克隆的TAP标记的融合到感兴趣的基因或N-或C-末端。在UAS-TAP标记的转基因然后在神经GAL4驱动器10的控制下，对神经系统表达。接着，将大量的成年苍蝇头将被收集，其具有神经细胞的高含量，并且容易从身体的其它部位根据大小不同冷冻后分离。成人头均化并清零bŸ连续离心，取上清液受下述TAP程序。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="697">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">U.S.A. standard test sieve No. 25</td>
			<td style="width:104px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-881-18&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">U.S.A. standard test sieve No. 40</td>
			<td style="width:104px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-881-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Kontes Dounce Tissue Grinders 15 ml</td>
			<td>Kimble Chase</td>
			<td>885300-0015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;"></td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IgG sepharose beads</td>
			<td>Pharmacia</td>
			<td style="width:119px;">17-0969-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Econo-column 0.7 cm x 20 cm</td>
			<td style="width:104px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">737-4721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Econo-column 0.5 cm x 15 cm</td>
			<td style="width:104px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">737-4716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calmodulin beads</td>
			<td style="width:104px;">Stratagene</td>
			<td style="width:119px;">214303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Coors Mortar and Pestle</td>
			<td style="width:104px;">CoorsTek</td>
			<td>60311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AcTEV Protease</td>
			<td style="width:104px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">12575-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td style="width:104px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">11836153001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease Inhibitor Mix</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P8340</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying protein-protein interaction in drosophila adult heads by tandem affinity purification (tap)

利用果蝇 （果蝇）进行遗传筛选已在生物科学的进步提出了许多里程碑式的发现。然而，使用生化屏幕旨在扩大从遗传分析中获得的知识是最近才开发。在这里，我们描述的方法来净化蛋白复合物，随着兴趣的成年苍蝇头任何蛋白质的联系人。这种方法充分利用了果蝇 GAL4/UAS系统来表达融合在苍蝇体内一个神经元串联亲和纯化（TAP）的标签的诱饵蛋白，然后实现两轮净化使用类似于最初建立在一个咨询的过程酵母1，净化相互作用蛋白复合物。在此过程结束时，获得其分子的身份可以通过质谱法来确定多蛋白复合物的混合物。候选蛋白的验证将来自R受益esource和便于执行​​功能丧失的研究中的苍蝇。类似的方法可以应用到其它蝇组织。我们相信，基因操作和这个蛋白组学方法在果蝇模型系统的结合具有很大的潜力来解决在神经生物学领域及以后的基本问题。

在这里，我们证明了我们的努力物色HIGHWIRE相互作用的蛋白质在果蝇大脑。 HIGHWIRE（HIW）及其脊椎动物和无脊椎动物同系物是巨大的泛素连接酶，调节神经系统14的发育和修复。他们分享了一些高度保守的功能域。然而，它们的分子的行动是不完全清楚。在工作​​完成的蠕虫，蝇，鼠导致了当前的工作模式，HIW作为一个E3连接酶，并作为支架蛋白，以促进形成一个多亚基的泛素化复合物?...

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Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

果蝇是著名的强大的遗传操作，但不能进行深入的生化分析其适用性。在这里，我们提出了一个TAP为基础的程序，从果蝇大脑识别任何利益蛋白质相互作用的合作伙伴。此过程有可能导致新的研究途径。

鉴定蛋白质 - 蛋白质相互作用的<em&gt;果蝇</em&gt;成人头由串联亲和纯化（TAP）

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

identifying-protein-protein-interaction-drosophila-adult-heads-tandem

Research

JoVE Journal

Biology

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

13.8K 次观看.  Louisiana State University Health Sciences Center.  果蝇是著名的强大的遗传操作，但不能进行深入的生化分析其适用性。在这里，我们提出了一个TAP为基础的程序，从果蝇大脑识别任何利益蛋白质相互作用的合作伙伴。此过程有可能导致新的研究途径。 