我们感谢4匿名审稿人的工作，提高了稿件。我们感谢中心法国国家科学研究因为它有MBG和YG的财政支持，以及大学德勃艮第和法国研究部彩信。研究YG实验室是由欧洲研究委员会（ERC开始格兰特，GliSFCo-311403）中，法新社国立德拉RECHERCHE（ANR-JCJC，GGCB-2010），行政法院地区的勃艮第（麦嘉华）和法国国家科学研究中心资助。

1。开始之前<ol><li>使用isogenized参考现货供应稳定和强大的行为表型。有选择这个股票，因为所有的潜在控制可以进行异构背景等位基因没有一般的规则。 </li><li>使用这个控制应变必要回交所有其他股票的后续步骤。本回交步骤通常 ​​是由一个单一的处女雌性至少5连续十字表示（以允许可能互换以上同源染色体之间），以2-3等基因参考男性5。这个步骤是重要的，均质的不同蝇种群之间的遗传背景。 </li><li>维持果蝇股上，在25补充有抗生素（0.4％甲基对羟基苯甲酸酯），在12小时光照/黑暗周期的标准玉米粉（9％），酵母（10％），以及琼脂培养基（1.5％） °C。 </li><li>实现在一个恒温室（25℃）下的远红光化学感受实验（消除视觉线索的贡献，并把重点放在化学感应信号）。定期更新的房间进行通风每次实验之间的区域的空气。 </li></ol>采用Y型迷宫测定2。嗅觉反应<ol><li>在包含湿纸巾测试之前玻璃管饿死苍蝇16-18小时，在25°C。 </li><li>加入一个Y形连接器连接到两个玻璃小瓶中，并以一个较小的塑料瓶（装小瓶）。使用通过泡沫塞子传递给连接器链接到三个小瓶中，并得到紧密密封的Y-迷宫1毫升移液器吸头。削减两个移液器吸头的两端窄（〜2个毫米直径，以避免任何回报的苍蝇一旦作出决定），形成两个“陷阱”的小瓶，和一个枪头，一个大底形成的“加载”管（ 图1A）。 </li><li>只要连接了“陷阱”瓶（ 图1B）之前，放置一〜6mm直径的滤纸每个小瓶。加40微升加臭剂溶液在1滤纸，并且将40μl相应的溶剂对第二滤纸。 </li><li>介绍10 4〜9日龄苍蝇进入“加载”的小瓶。这个传输过程中不使用二氧化碳麻醉，因为其对行为10有很强的影响。而使用冰短暂冷却。正确操作麻醉蝇重要的是限制应力尽可能的主题。 <ol><li>在25℃下的远红光执行一系列的Y-迷宫测试（使用LED灯泡来限制可能的加热源），以避免视觉刺激尽可能。小心地交替使用Y型迷宫的方向（含气味管在左边，或者右边，并在前面或后面装管; 图1C）。 </li><li>允许几个小时的苍蝇在含有增味剂或溶剂的陷阱小瓶进入。 24小时后计数的苍蝇增加participati上可达80％以上，并提供最大的嗅觉索引值（SIMONNET，个人通讯）。 </li><li> - /加载蝇总数（在溶剂管数数的气味管）：使用下列公式计算由此产生的嗅觉指标。 </li></ol></li><li>洗Y型迷宫设置，如下图：浸泡拆除设置在苏格兰皇家银行35 MD过夜。彻底冲洗用自来水。最后用去离子水冲洗，让干。 </li></ol>该数据3。统计分析<ol><li>进行t检验，单向ANOVA或双向ANOVA取决于数据和变量。 </li></ol>

<ol>
	<li>Mombaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+and+ligands+for+odorant,+vomeronasal+and+taste+receptors.">Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).</li><li>Silbering, A. F., Benton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionotropic+and+metabotropic+mechanisms+in+chemoreception:+'chance+or+design.">Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: 'chance or design.</a> EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).</li><li>Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+smell+of+love+in+Drosophila.">The smell of love in Drosophila.</a> Front. Physiol. 4, (2013).</li><li>Silbering, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+function+and+integrated+wiring+of+the+evolutionarily+distinct+Drosophila+olfactory+subsystems.">Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems.</a> J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).</li><li>Grosjean, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+olfactory+receptor+for+food-derived+odours+promotes+male+courtship+in+Drosophila.">An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila.</a> Nature. 478, 236-240 (2011).</li><li>Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+olfactory+behavior+in+Drosophila:+a+new+screen+yields+the+ota+mutants.">Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants.</a> Genetics. 123, 315-326 (1989).</li><li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion.">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li><li>Budick, S. A., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-flight+responses+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors.">Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).</li><li>Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+affecting+the+cAMP+transduction+pathway+modify+olfaction+in+Drosophila.">Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).</li><li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Ai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acid+sensing+by+the+Drosophila+olfactory+system.">Acid sensing by the Drosophila olfactory system.</a> Nature. 468, 691-695 (2010).</li><li>Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flying+the+fly:+long-range+flight+behavior+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors.">Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).</li></ol>

作者什么都没有透露。

我们的Y-迷宫协议是基于一个先前描述的方案9。然而，我们引入两个主要区别。首先，我们使用窄的枪头，以防止苍蝇返回一旦他们决定在含有溶剂或溶剂加臭剂小瓶进入。这些窄的尖端也是有用的，以限制在Y-迷宫的加臭剂的扩散。其次，我们使用一个较小的负载小瓶强制苍蝇在Y-迷宫进入。有这些苍蝇的高参与重要的是（24小时后80％至100％; SIMONNET，个人通讯）。 ...

通过味觉或嗅觉化学感受是一个关键的感官方式对动物的生存。它给社会互动所需的危险或食物来源的检测重要线索，以及。它还可以帮助动物找到它们的繁殖需要一个性伴侣。对于超过20年，深入的研究，其中包括诺贝尔文学奖获奖作品由理查德·阿克​​塞尔和琳达·巴克在2004年“对气味受体和嗅觉系统的组织他们的发现”，已经进行了揭示的分子和细胞基地嗅觉1,2。 其中一个最喜欢的动物模型，科学家解剖嗅觉感知是D。果蝇 。这种昆虫股与哺乳动物类似的细胞和分子的气味编码策略。科学界采用不同的行为范式，研究的气味在这个果蝇的作用。这些测试包括多模态试验，如courtship测试，其中各种感觉方式，包括嗅觉，是重要的诱发雄性求偶3。其它测定法也已经被开发，以更具体的处理的加臭剂的作用;这些包括T型迷宫，Y型迷宫，陷阱检测，四场舞台和风力隧道4,5,6,7,8。 在这篇文章中，我们提出一个简单的改性Y型迷宫试验，其中使用D.提供强大的嗅觉反应果蝇 。我们的设置使用终端提示中违背先前描述的方法9。因此，我们的Y型迷宫有两个好处。首先，它避免了系统中任何的回报，一旦苍蝇作出了她的选择。第二，它限制的气味在Y型迷宫的各个领域的交流。这最后的优点是重要的，因为果蝇是被经常使用，以避免加臭剂的饱和空气流非常敏感。以调整实验装置与空气流动将是时间和成本消耗。因此，我们的Y型迷宫试验表示EFficient和快速的方法来测试果蝇的嗅觉表现。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="835">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila Polystyrene tube</td>
			<td>VWR europe</td>
			<td>734-2255</td>
			<td>30 x 25 mm&#160; 
			Y-maze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila Borosilicate tube</td>
			<td>Dijon verre</td>
			<td></td>
			<td>95 X 25 mm 
			Y-maze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam stopper</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>999038</td>
			<td> 
			Y-maze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-shaped connector</td>
			<td>Europrix</td>
			<td>11020605</td>
			<td> 
			Y-maze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-1000&#181;l pipet tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4868</td>
			<td>Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a &#8764;2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. 
			Y-maze</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Far-Red LED Bulb</td>
			<td>Rubin-Lacaque</td>
			<td>0RB180238</td>
			<td>625-630 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylacetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P16621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast</td>
			<td>Sensient Flavors Strasbourg</td>
			<td>1018880464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td>eurogerm</td>
			<td>Farine de ma&#239;s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Kalys</td>
			<td>HP-697-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl hydroxy 4 benzoate</td>
			<td>VWR international</td>
			<td>25605293</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing drosophila olfaction with a y-maze assay

从环境探测信号是必不可少的动物，以确保其生存。为了这个目标，他们使用环境线索，如视觉，mechanoreception，听觉和味觉，通过chemoperception，通过直接接触或通过嗅觉，它代表了响应于作用在较长的范围内挥发性分子。挥发性的化学分子是大多数动物非常重要的信号，在危险，食物来源，或个人之间进行通信的检测。 果蝇是最常见的生物模型，科学家探索嗅觉的细胞和分子基础之一。为了突出这种小虫子的嗅觉能力，我们描述的基础上，Y型迷宫测试小鼠用经典修改选择的协议。用Y型迷宫获得的数据提供有价值的信息，以更好地了解动物如何处理他们不断变化着的环境。我们引入了一个一步一步的协议研究增味剂的使用这个Y型迷宫试验探索动态响应的影响。

图1D显示了使用这个Y型迷宫实验两个有代表性的回应。广-S雄性极力避开10％乙酸稀释在蒸馏水中，而它们没有显著避免10％的苯乙酸。这些分析都是基于每个重复10只雄性放在一起装载小瓶。这个协议有时会导致平均值的大的标准偏差。如果需要，可以使用，而不是只有10个。在数学上，一个人的选择对指数值更大的样本量较低的重量每重复20的男性减少这种缺陷。 <p class="jove_conte...

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Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

我们提出了一个选择的测试揭示使用Y型迷宫试验对果蝇行为的气味的影响。

测试<em&gt;果蝇</em&gt;用Y型迷宫测定嗅觉

Detecting signals from the environment is essential for animals to ensure their survival. To this aim, they use environmental cues such as vision, ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

14.7K 次观看.  UMR-6265 CNRS. 我们提出了一个选择的测试揭示使用Y型迷宫试验对果蝇行为的气味的影响。 