作者感谢教授亨德里克Tevaearai心血管外科为研究的初始部分资金支持的部门。

注：刘易斯雄性和雌性大鼠，200〜220克的安置标准实验室条件下（12小时光照和黑暗周期， 随意的水和食物，IVC笼）下。所有动物均符合FELASA和瑞士法律对动物保护的建议处理。 1，细胞的制备：从骨髓间充质干细胞分离<ol><li>麻醉大鼠用异氟烷5％和O 2的5升/分钟的感应腔室5分钟。将动物的口鼻部到鼻锥相连的麻醉系统。执行脚趾或尾巴捏确认镇静。 </li><li>通过切割皮肤从脚踝到臀部除去从腿部的皮肤用剪刀。取出肌肉，减少经股动脉动物放血。显露髋关节脱位和股骨头。不损坏股骨头是很重要的。把骨头无菌PBS在50毫升的塑料管。 </li><li>移除所有亩scles和韧带从骨子里不破坏它们。注意：它是重要的骨保持完整，以避免冲洗溶液或污染，用乙醇联动。漂洗在70％乙醇中剥离骨头5分钟。 </li><li>在无菌层流罩，切骨头用剪刀的两个技巧。冲洗骨髓从骨端注入无菌PBS中。骨髓采集到15毫升管。离心7分钟300×克。 </li><li>除去上清液。暂停在3ml红细胞裂解缓冲液沉淀。再次纺丝在300×g下7分钟前孵育悬浮液在室温下放置1分钟。在150 ml培养瓶中，加入无菌细胞培养液（395毫升IMDM培养基中，加入5ml青霉素/链霉素100毫升FBS）和种子细胞。 </li><li>改变介质的第二天，除去非粘附细胞。 <ol><li>直到获得所需的细胞量为2-3周进行中的变化，每隔一天。 </li><li>另外，准备biograft种子根据需要和其它地方描述的3荷兰国际集团的细胞在固体基质中。 </li></ol></li><li>心脏移植的当天，制备细胞或刚心外膜应用之前收获biograft。 <ol><li>收集使用的Accutase细胞脱离液细胞。计数细胞。填1.5ml的离心管中以计算得到所需的细胞数量的细胞悬浮液的体积。离心机在300 XG 7分钟，除去上清液。 </li><li>或者，收获来自细胞培养基的biograft，冲洗用无菌PBS中，并保持在新鲜培​​养基中无血清。 </li></ol></li></ol> 2，第一次开胸结扎LAD <ol><li>称取鼠。打开加热垫在37℃。麻醉，用5％异氟醚和5升/分钟100％O 2的大鼠中的感应腔室为5-7分钟。执行脚趾或尾巴捏确认镇静。放置在加热垫的老鼠。 </li><li>插管的动物有14ğ静脉导管。插管导管连接到编程为2.5升/分钟的氧气，2.5％异氟醚，2毫升潮气量，以及90次/分钟的呼吸频率啮齿动物呼吸机。 </li><li>准备在0.1毫克/公斤丁丙诺啡的解决方案。注入皮下的溶液的三分之一。剃胸廓的左侧部分。消毒，用1％的聚维酮碘溶液。 </li><li>切开皮肤垂直于胸骨在第四肋间。分出3层胸肌肉（胸大肌，胸升和腹外斜肌胸大肌）。打开第四肋间（肋4和5之间）。 </li><li>用小拉钩传播肋骨和暴露的心脏。小心地打开心包。找到并结扎冠状动脉左前降支（LAD）与7.0缝线4毫米中庭下方。 </li><li>使用3.0缝合两针封闭肋间。从胸骨近端和远端放置两个缝合。首先，Tighten远端缝合。用镊子将呼吸机的排气管2秒，以抬高胸部，避免气胸。收紧第二缝合。肌肉层放置回原位（不需要任何缝线）。关闭皮肤用5.0缝合。 </li><li>消毒用1％的聚维酮碘溶液的缝合。注射丁丙诺啡溶液的剩余部分。关闭麻醉系统。移除插管导管。 </li><li>请在笼子里的老鼠在一个温暖的灯为1-2小时。保持温度计在笼和控制，以避免过度加热的暖灯和轿厢之间的距离。返回在大鼠下腔静脉单元。注入皮下丁丙诺啡0.05-0.1毫克/公斤后-operatively每6-12小时48小时。 </li></ol>在通过治疗3。心外膜政府当局二次开胸<ol><li>重复步骤2.1-2.3。 </li><li>切开皮肤垂直于胸骨在第五肋间。分离出3层胸肌肉S（胸大肌，胸升和腹外斜肌胸大肌）。打开第五肋间（肋5与6之间）。 </li><li>用小拉钩传播肋骨和暴露的心脏。如果有一些坚持，小心地用细镊子取出。 </li><li>找到出现结扎下方的浅区的梗死面积。注：必要时，可使用10厘米长的缝合（7.0）的先端，以更好地可视化的左心室。轻轻拉至通过夹具松散地保持着，露出心脏的缝合。 </li><li>应用下列治疗之一： <ol><li>定位biograft在心脏表面。使用该预填充纤维蛋白封闭剂注射器预热，在室温下放置10分钟。通过将25g鲁尔针应用纤维蛋白胶的biograft下降（50-100微升）。验证biograft是完全密封的。 </li><li>另外，申请用枪头收集细胞沉淀在表面ØF表示心脏上的绷带下面的苍白区。应用纤维蛋白胶的下降（50〜100μL）到细胞沉淀。 </li></ol></li><li>从顶点中取出一块缝合。 </li><li>重复步骤2.6-2.8。 </li></ol>

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Imaging Biol. 11, 408-414 (2009).</li><li>Conradi, L., Pahrmann, C., Schmidt, S., Deuse, T., Hansen, A., Eder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+Imaging+for+Assessment+of+Immune+Responses+Following+Implantation+of+Engineered+Heart+Tissue+(EHT).">Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT).</a> J. Vis. Exp. 52 (e2605), (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

法援署的永久结扎造成不可逆的心肌损伤。第一个动物模型于1960年4被描述。从那时起，它已被认为是慢性心肌梗塞标准和合适的模型。其稳定性和重复性使治疗的实验评价心肌梗死5。继最初的描述改进程序报告了一个手术死亡率35-13％6。 正如预期的那样，LAD结扎诱导的2个星期内观察到受损的心脏功能。在心脏功能的进一步下降，记录长达6周，并与...

自19 世纪结束时，心血管疾病一直留在工业化国家的头号连环杀手。其中，冠状动脉疾病代表了主要病因。急性期会导致心肌梗死（MI），随后是不适应的重塑是逐步走向慢性期和严重的心脏衰竭的发展。尽管最近显著技术和治疗的进步，发病率和死亡率因心脏衰竭的进展仍在增长1。在这种情况下，细胞疗法已经获得了越来越多的关注作为一种新的治疗方案，以阻止疾病朝向心脏衰竭的恶化和刺激心肌的最近确定的再生能力。实验和临床研究已经提供的各种细胞类型的心脏移植后获得的有益效果令人信服的证据。主要成果包括改进CARDI交流收缩功能降低，左心室重塑，减少梗塞面积，并在梗死区血管密度增加。然而，细胞注射后低细胞数量保持仍然是一个重要的缺点。细胞与生物基质，以改善电池交付2协会最近促成研究者和临床利益。 左冠状动脉前降支（LAD）结扎是心肌梗死的小动物模型，导致透梗死和成熟的疤痕的参考方法。在心肌梗死慢性期应用细胞治疗还需要第二个手术干预。正中胸骨切开术通常执行，使心肌内注射细胞或biografts的心外膜植入。这种微创外科手术增加的死亡率，手术后的恢复时间，疼痛和感染的风险。这里介绍的微创手术方法不仅可以防止这样的偏见，但也提供了Ô心脏的治疗应用ptimal访问。心肌梗死和凝胶型生物基质相关的细胞外膜植入是通过左肋间开胸手术在跳动的心脏进行。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="678">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:104px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:239px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">POLYSORB 3-0 suture</td>
			<td style="width:104px;">COVIDIEN</td>
			<td style="width:119px;">UL 204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">POLYSORB 5-0 suture</td>
			<td style="width:104px;">COVIDIEN</td>
			<td style="width:119px;">UL 202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SURGIPRO II 7-0 Suture</td>
			<td style="width:104px;">COVIDIEN</td>
			<td style="width:119px;">VP904X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CATHETER INSYTE 14G</td>
			<td style="width:104px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">381267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">INSPIRA ADVANCED VOLUME CONTROLLED VENTILATOR</td>
			<td style="width:104px;">HARVARD APPARATUS</td>
			<td style="width:119px;">557058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DUMONT #7 Forceps</td>
			<td style="width:104px;">FST Germany</td>
			<td style="width:119px;">11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fibrin sealant</td>
			<td style="width:104px;">BAXTER</td>
			<td style="width:119px;">1501441</td>
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		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CASTROVIEJO EYE SPECULA</td>
			<td style="width:104px;">HARVARD APPARATUS</td>
			<td style="width:119px;">72-8925</td>
			<td>use as retractor for the ribs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IMDM Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>PAA Clone</td>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; A15-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">bone scissors</td>
			<td style="width:104px;">Fine Science Tols</td>
			<td style="width:119px;">16044-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Red Blood Cell Lysis Solution</td>
			<td>Gentra Systems</td>
			<td>D-50k1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Accutase cell detachment solution</td>
			<td style="width:104px;">Stem cell technology</td>
			<td style="width:119px;">7920</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix

心脏细胞疗法已经获得了越来越多的关注与细胞相关的生物材料和植入已成为一个主要的问题，优化心肌细胞传递。心肌梗死的啮齿动物模型（MI）由左前降支（LAD）结扎已普遍被通过开胸进行的;在传统上一直进行用于治疗心外膜应用程序通过胸骨第二心脏直视手术。由于LAD结扎模型的描述，手术后的死亡率已经从35-13％下降，但第二次手术依然是至关重要的。为了改善手术后的恢复，减少疼痛和感染，微创手术过程给出。两个开胸被执行，初始一个用于LAD结扎，而第二个用于治疗心外膜给药。 Biografts包括与固体或凝胶型的矩阵相关联的单元的方式进行涂敷在梗塞芳EA。 LAD结扎导致心脏功能的丧失证实了2周，6周后进行超声心动图。 Goldner对心脏切片进行三色染色证实透瘢痕形成。第一和第二次手术产生了小于10％，术后死亡率。

开胸手术后1小时内的所有动物恢复。伤口愈合快。无感染或水肿观察。 双左侧开胸允许的心脏最优访问（ 图1）。疼痛和手术后的死亡率较低。动物从手术中恢复迅速和体重增加（ 图2）。卡普兰梅厄成活率为96％，为第一开胸手术。四只超过104 通过第二开胸手术24小时以下处理应用程序内死亡。卡普兰-梅尔存活百分比从当动物接受第二次开?...

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Cell-based Therapy for Heart Failure in Rat: Double Thoracotomy for Myocardial Infarction and Epicardial Implantation of Cells and Biomatrix

àbiograft植入治疗心肌梗死的啮齿动物模型由法援署结扎诱发了常规需要两个开放式心脏手术。为了降低死亡率，并提供用于治疗与细胞相关的固体和胶状biomatrices固定最佳条件，微创手术已得到了发展。

基于细胞治疗心脏衰竭大鼠：双开胸心肌梗死和细胞与生物基质植入心外膜

Cardiac cell therapy has gained increasing interest and implantation of biomaterials associated with cells has become a major issue to optimize myocardial ...

cell-based-therapy-for-heart-failure-rat-double-thoracotomy-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.8K 次观看.  University of Fribourg.  àbiograft植入治疗心肌梗死的啮齿动物模型由法援署结扎诱发了常规需要两个开放式心脏手术。为了降低死亡率，并提供用于治疗与细胞相关的固体和胶状biomatrices固定最佳条件，微创手术已得到了发展。 