万古霉素滴入硫酸钙和自体骨治疗兔骨感染的改进模型

可生产动物模型对骨感染研究非常重要。然而，目前没有兔子模型的感染状态和细菌的数量是一致的。我们的骨感染兔子模型使用一致的细菌，并由万科霉素加载硫酸钙和自体片段处理。

该技术可推广到骨感染和骨非联合治疗的诊断，并用于了解骨感染的发病机制。这种方法可以深入了解大鼠、小鼠和猪的其他骨骼感染模型。将相同体积的细菌悬浮液加载到骨髓中是很困难的。

视觉演示可以帮助研究人员轻松准确地执行关键步骤。要准备细菌悬浮液，首先在0.3毫升LB培养基中溶解0.5毫克S.aureus冷冻干燥粉末。将悬浮液彻底混合，将细菌条纹到37摄氏度的试菌大豆加糖盘上，进行16小时的孵育。

第二天早上，在37摄氏度下，在试制大豆汤管中挑选一个细菌菌落形成装置，进行24小时培养。当细菌处于中对数生长阶段时，将1毫升细菌转移到1.5毫升管中，通过离心收集细菌。然后，每次洗涤用100微升PBS洗三次细菌细胞颗粒，在最后洗涤后将细菌重新用3毫升新鲜PBS中重新产生。

为了建立骨感染模具，确认在三个月大的三公斤雄性新西兰白兔中，爪子捏紧缺乏反应，并用电剃须刀将头发从近侧肉质区域去除，以对抗头发的生长方向。用波维酮碘溶液对裸露的皮肤进行消毒，并使用笔和尺子标记头骨的上端和 S.Aureus 注射的钻孔位置，注意钻孔位置位于蒂比亚尔高原的横向中间。接下来，使用数字11手术刀在皮肤上切口，随后在皮内酮中切口1厘米。

使用电骨钻单元，在头骨上打一个直径两毫米的孔，用两毫米直径的两毫米长的骨蜡圆柱按孔。沿蒂比亚高原的水平平面去除任何多余的骨蜡，并确认孔内布满了骨蜡。然后，使用可吸收的手术缝合缝制的月牙和皮肤在垂直床垫缝合，以防止动物咀嚼缝线。

并使用一毫升的 asepsis 喷油器将每毫升 S.Aureus 溶液的 8 个菌落形成单位缓慢地注入钻孔中 10 倍。注射后的第7天、第14天、21日、28日，将受感染的兔子放入兔子的抑制器中，将头部和耳朵放在限制器外，从动脉静脉采集血液样本，用于白血球和C反应蛋白分析。麻醉后，使用数字11手术刀做厘米的三分皮肤和内皮切口，并清洁骨蜡。

接下来，使用电骨钻单元打两个相邻的直径4.8毫米的孔来脱粒坏死骨，并使用骨勺去除骨坏死骨髓和造粒组织。然后，刮擦和清洁两个洞之间的骨组织，并传播一毫升的脱毛骨髓到羊血红板，在37摄氏度下过夜孵育。第二天早上，选择有30到300个菌落的板块，并计算每个受感染动物形成菌落的单位数量。

感染后第28天，在9.5克医用级硫酸钙中加入一克万科霉素盐酸粉，用铲子用三毫升正常盐水搅拌混合物30至45秒。将混合产品加入柔性硅胶模具中，使产品在室温下干燥 15 分钟。然后，弯曲模具以去除装有硫酸钙的万康霉素或VCS珠。

对于自体骨的抗生素治疗和植入，首先，在剃掉尾部区域之前重新暴露受伤的头骨，用波维酮碘溶液对暴露的尾皮肤进行消毒。使用手术剪刀切割尾巴，并使用可吸收的手术缝合线关闭垂直床垫缝合的皮肤，以防止动物咀嚼缝线。使用数字 11 手术刀切割尾皮以露出尾骨。

去除任何肌肉、软组织和胸膜，并分离每个关节的尾骨。将骨片转移到含有无菌盐水的100毫米塑料盘中。接下来，使用弯曲的剪刀将四块VCS珠植入骨髓腔，并使用弯曲钳子用八块自体尾骨碎片填充骨骼缺陷。

然后，用可吸收的手术缝合以床垫缝合的方式关闭周膜和皮肤切口。骨感染模型组的C反应蛋白和白细胞水平高于对照动物。VCS或VCS自生骨治疗后两、四、六、八周，C反应蛋白和白细胞水平显著降低。

二维重建图像显示，使用VCS或VCS和自体骨治疗后12周内骨量逐渐增加，而未经治疗的骨骼感染模型组骨质流失显著。为了分析骨骼再生定量指标，可以使用位图数据重建3D模型图像，并在每个骨骼中选择一个直径为9.6毫米的椭圆形椭圆形区域。未经治疗的骨感染模型组中骨体积与组织体积的比例明显低于VCS和VCS自生骨组。

VCS自体骨组的皮眼数和厚度分数明显高于未经治疗的骨感染模型和VCS动物。此外，VCS自生骨组的眼皮分离分数明显低于未经治疗的骨感染模型和VCS组。注意选择体重合适的兔子。

用骨蜡阻断金黄色葡萄球菌溶液。彻底去皮化坏死骨，打两个相邻的直径4.8毫米的孔。按照该程序，可以执行其他诊断测量方法，如超声波、放射学和计算机断层扫描，以监测骨感染和修复的病理过程。

这种改进的骨感染模型以及VCS和自生骨治疗的组合有助于研究骨感染和骨再生的下划线机制。由于金黄色葡萄球菌冻干粉是危险的，细菌悬浮液应始终在隔离的细菌实验室中准备。