骨感染研究には、生産可能な動物モデルが非常に重要です。しかし、現在、感染状態と細菌の数が一貫しているウサギモデルはありません。私たちの骨感染ウサギモデルは、一貫した細菌を使用し、バンコマイシンを搭載した硫酸カルシウムおよび自己原性断片によって治療されます。
この技術は、骨感染および骨非組合療法の診断に向けて、および骨感染の病因を理解する上で拡張することができる。この方法は、ラット、マウス、およびブタの他の骨感染モデルに関する洞察を提供する可能性があります。同じ量の細菌懸濁液を骨髄に積み込むのは難しい。
視覚的なデモンストレーションは、研究者が重要なステップを簡単かつ正確に実行するのに役立ちます。細菌懸濁液を調製するために、まず0.3ミリリットルのLB培養培地でS.aureus凍結乾燥粉末の0.5ミリグラムを溶解する。懸濁液を十分に混ぜ、細菌をトリプティック大豆寒天プレートにストリークし、摂氏37度で16時間インキュベーションします。
翌朝、摂氏37度で24時間トリプティック大豆スープチューブの培養用単一の細菌コロニー形成ユニットを選びます。細菌が中対数増殖期にある場合は、1ミリリットルの細菌を1.5ミリリットルのチューブに移し、遠心分離によって細菌を採取する。次いで、細菌細胞ペレットを1回の洗浄につき100マイクロリットルのPBSで3回洗浄し、最終洗浄後に細菌を3ミリリットルの新鮮なPBSで再懸濁する。
骨感染型を設定するには、生後3ヶ月の雄ニュージーランド白ウサギの足ピンチに対する応答の欠如を確認し、電気剃毛器を使用して毛髪の成長方向に対して近位脛骨領域から毛髪を取り除きます。露出した皮膚をポビドーネ溶液で消毒し、ペンと定規を使用して脛球の上端とS.Aureus注入のための掘削穴位置をマークし、掘削穴位置が脛体台の水平真ん中にあるのに注意してください。次に、数11メスを使用して皮膚を切開し、続いて腹骨に1センチメートルの切開を行います。
電気骨ドリルユニットを使用して、脛骨に直径2ミリメートルの穴を開け、2ミリメートルの直径2ミリメートルの長い骨ワックスで穴を押します。脛骨高原の水平面に沿って予備の骨ワックスを取り除き、穴が骨ワックスでいっぱいであることを確認します。その後、吸収可能な外科縫合糸を使用して、垂直マットレス縫合糸で骨膜と皮膚を縫い上げ、動物がステッチを噛むのを防ぎます。
そして、1ミリリットルの敗血症注入器を使用して、S.Aureus溶液のミリリットル当たり8つのコロニー形成単位をドリルホールにゆっくりと10回注入します。注射後7日目、14日目、21日目、28日目に、感染したウサギを頭と耳を持つウサギの拘束剤に拘束剤を入れ、白血球およびC反応性タンパク質分析のために耳介静脈から血液サンプルを採取する。麻酔後、数11メスを使用してセンチメートル脛骨皮膚および腹膜切開を行い、骨ワックスをきれいにします。
次に、電気骨ドリルユニットを使用して、隣接する直径4.8ミリメートルの穴を2つパンチして壊死した骨を脱花させ、骨スプーンを使用して壊死性骨髄および造粒組織を脱花する。その後、2つの穴の間の骨組織を削ってきれいにし、残骸骨髄の1ミリリットルを羊の血液寒天プレートに広げ、摂氏37度で一晩インキュベーションする。翌朝、30〜300コロニーのプレートを選択し、感染した動物1匹あたりのコロニー形成ユニットの数を計算する。
感染後28日目に、バンコマイシン塩酸塩粉末1グラムを9.5グラムの医療グレード硫酸カルシウムに加え、ヘラを使用して3ミリリットルの正常生理食塩水で30〜45秒間攪拌する。混合生成物を柔軟なシリカゲル型に加え、室温で15分間乾燥させます。次いで、バンコマイシンを硫酸カルシウム、またはVCSビーズを除去するために金型をフレックスする。
抗生物質治療および自生骨の移植のために、まず、尾部を剃る前に、負傷した脛骨を再び露出させ、露出した尾部皮をポビドーネ溶液で消毒する。手術用はさみを使用して尾を切り倒し、吸収可能な外科縫合糸を使用して垂直マットレス縫合糸で皮膚を閉じ、動物がステッチを噛むのを防ぎます。尾の骨を明らかにするために尾の皮をカットするために数11メスを使用してください。
筋肉、軟部組織、骨膜を取り除き、各関節で尾骨を取り外します。骨片を滅菌生理食糸を含む100ミリメートルのプラスチック皿に移します。次に、湾曲したはさみを使用して、VCSビーズの4つの部分を脛骨骨髄腔に埋め込み、湾曲した鉗子を使用して骨の欠陥を8個の自己生状尾骨片で満たします。
次に、マットレス縫合の方法で吸収可能な外科縫合糸で骨膜および皮膚切開部を閉じる。C反応性タンパク質および白血球レベルは、対照動物よりも骨感染モデル群において高い。VCSまたはVCSの自己異性骨治療の2、4、6、および8週間後に、C反応性タンパク質および白血球レベルが有意に低下する。
2次元再構成画像は、VCSまたはVCSおよび自己生骨による治療後12週間の間に骨容積の進行的な増加を示し、骨損失は未治療の骨感染モデル群において有意である。骨再生定量インデックスを解析するために、ビットマップデータを使用して3Dモデル画像を再構築し、各ボーンで目的の楕円領域を9.6ミリメートル長さ楕円の楕円領域で選択することができます。未治療の骨感染モデル群における骨容積と組織容積の比は、VCSおよびVCS自在骨群で測定されたものよりも有意に低い。
VCS自己属骨群の骨柱数と厚さのスコアは、未治療の骨感染モデルおよびVCS動物の中のトラベクトラ数および厚さのスコアよりも有意に高い。さらに、VCS自己異性骨群における骨膜分離スコアは、未治療の骨感染モデルおよびVCS群で測定されたものよりも著しく低い。適当な体重のウサギを選びに行くように注意してください。
骨ワックスでブドウ球菌溶液をブロックします。壊死性骨を完全にデブライドし、直径4.8ミリメートルの2つの隣接する穴をパンチします。手順に従って、超音波、放射線学およびコンピュータ断層撮影などの他の診断尺度法は、骨感染および修復の病理学的プロセスを監視するために行うことができる。
この改善された骨感染モデルとVCSと自己生骨治療の組み合わせは、骨感染と骨再生の下線メカニズムを研究するのに役立つ可能性があります。黄色ブドウ球菌凍結乾燥粉末は危険であるため、細菌懸濁液は常に単離された細菌検査室で調製する必要があります。
