沙门氏菌筛选的高通量平台.

该方法为沙门氏菌和沙盖拉的筛查提供了一个高通量平台。此技术的主要优点是重复、具体、敏感和高吞吐量。该技术结合了NAAT快速方法与培养相结合的方法，首先应用了实时PCR筛查，然后发送阳性方法进行细菌培养和鉴定。

虽然这种方法侧重于沙门氏菌和石盖拉筛查，它也可以应用于其他病原体，如维布里奥斯，葡萄球菌，大肠杆菌，等等。这种方法的视觉演示至关重要，因为样品中的背景菌群很难选择正确的菌落。首先，在每个样品中加入三毫升的营养汤。

然后，在36摄氏度下孵育样品6小时。在此之后，将浓缩前培养培养在800克下离心两分钟。然后，将上一代转移到一个新的管子上，然后在12，000克后再次离心5分钟。

丢弃上经剂后，在颗粒中加入100微升DNA提取溶液。然后，旋转管子一分钟。接下来，在干浴中将样品加热到1000摄氏度。

重复离心后，将上经剂收集到新管中。首先，创建反应混合物，并根据文本协议设置循环程序。然后，在荧光实时 PCR 机器上执行实时 PCR。

首先，在5毫升的石矿晶体培养中加入100微升的富集前培养。然后，在36摄氏度下孵育18至24小时。接下来，收集一个区域性循环，并传播到一个盘子。

然后，在36摄氏度下孵育板18至24小时。孵育后，选择可疑的菌落，并把它们转移到一个盘子。在36摄氏度下孵育板18至24小时。

然后，使用自动微生物识别系统识别可疑菌落。要开始 O-抗原表征，请将一滴 O-抗原多价血清添加到干净的幻灯片中。将殖民地的一个循环转移到幻灯片中，并在 Sera 中研磨它。

如果细菌看起来像流动的沙子，重复以前的处理与O-抗原单价血清，直到抗原的特征。要开始H-抗原特性，请将一滴H-抗原多价血清添加到干净的幻灯片中。然后，收集殖民地的一个循环，并在血清网格。

使用H-抗原单价血清重复治疗，直到特定H-抗原被描述。要分离文化，请收集一个浓缩前文化的循环，并传播到盘子上。然后，在36摄氏度下孵育18至24小时。

孵育后，将一个可疑的菌群收集到盘子上。在36摄氏度下孵育板17至24小时。然后，使用自动微生物识别系统对菌群进行生化鉴定。

接下来，将一滴氏菌种多价血清涂抹在干净的幻灯片上。然后，使用微循环收集一些细菌，并研磨成血清。最后，如果血清类似于流动的沙子，使用希盖拉物种单价血清进一步定性的细菌。

使用这种方案，对患者的粪便样本进行沙门氏菌和希盖拉的筛查。使用实时PCR，在十六进制通道中成功放大，表明样本对沙门氏菌物种呈阳性。进一步的实时PCR表明样本2对沙门氏菌呈阳性，并被选为指导性沙门氏菌物种培养。

在沙门氏菌物种的引导培养中，粉红色和紫色菌落分别镀上，并经过生化鉴定。结果表明，样本二中的菌落为沙门氏菌寄生虫B.利用实时PCR，在BS FAM通道中成功放大，表明样本对希盖拉物种呈阳性反应。进一步的实时PCR表明样本10对Shigella呈阳性，并被选为引导培养。

在希盖拉物种的引导培养中，粉红红和无色菌落分别镀上，并经过生化鉴定。结果表明，样本10含有西盖拉松奈II期细菌。在尝试此过程时，必须记住由于序列变化而对方法的限制。

按照此过程，可以执行其他方法（如直接区域性）以避免误负实时 PCR 结果。这项技术为沙门氏菌和希盖拉检测领域的研究人员铺平了道路，因为新协议可以增加两倍的阳性率，并显著减少工作量和TAT。不要忘记，与沙门氏菌和希盖拉工作可能是极其危险的，个人防护装备，PPE，应始终采取，而执行这个程序。