载脂蛋白 E 缺乏小鼠盐皮质激素受体的活化诱导动脉粥样硬化斑块的研究

该方法有助于回答小鼠早期动脉硬化病理生理学中的关键问题。该技术的主要优点是，醛固酮在成人生长中诱导动脉硬化斑块发育的效率、快速性。此方法的可视化演示至关重要，因为仅通过文本教学很难学习一些技术步骤。

演示这个程序的将是卡特琳娜·马米，一个来自我实验室的工作人员科学家。戴上手术手套，将迷你泵灌装管连接到一毫升注射器，并用 125 微升的醛固酮或车辆溶液将管子装载。将灌装管插入微型泵顶部的孔，直到它不再前进，并缓慢地用醛固酮溶液填充泵。

当液体珠从泵体中升起时，停止加注泵，并小心地拆下灌装管。将流量调节器插入微型泵体，注意调节器紧贴在泵体上，并在含有无菌盐水溶液的烧杯中填充，在植入前长达 24 小时。要植入泵，请使用剃须刀去除手术现场的头发，并使用 70%异丙醇浸泡无纺布材料对裸露的皮肤进行消毒。

接下来，通过皮肤进行0.8至1厘米的切口，而不是底层组织，并使用钳子打开切口。使用另一只手的trocar，展开皮肤，为泵创建一个口袋，从切口向肩骨，并插入泵到切口，与调节器的头部朝向鼠标的前面，轻轻地将泵完全推入口袋，使有足够的皮肤关闭伤口没有张力或拉伸。泵插入后，用手术线缝合切口，并使用干净的拭子涂抹局部的10%波维酮碘软膏。

然后允许鼠标在加热阶段恢复，并监控直至完全保持。在适当的实验端点，使用重力灌注鼠标通过左心室，用10至15毫升的冰冷DPBS，然后是40至50毫升的10%中性缓冲配制。10至20分钟后，将鼠标置于立体显微镜下，用钳子和剪刀去除多余的周生忘道和心肌脂肪组织。

用钳子握住固定的心脏，并垂直切到大音的通道，尽可能与心脏保持一致，而不会造成伤害。心脏从大干带分离后，使用手术刀沿直线横向切割，连接左右中庭的下部点，用最佳的切割温度化合物填充开放心脏的上部。将被修复的组织与低温节塑料模具放置，将大干的轴轴垂直于矩形模具的底座，用新鲜的 OCT 覆盖组织。

背光模具，以确保组织正确定向，然后小心地将模具放在干冰上的金属板上，当 OCT 变白时，用银箔包裹整个模具，以存放零下 80 摄氏度。当低温物达到零下 20 摄氏度时，将冷冻心块安装到试样支架上，心室朝外，并将试样支架插入试样方向头。调整试样支架的方向，将大音根垂直于刀片的块切开，并切割块，直到到达大音根。

将串行部分收集到玻璃幻灯片上，监测解剖大音根轮廓，直到出现所有三个大音瓣。然后收集六到八，10微米厚的部分，或直到三个阀门之一消失或不再完好无损。对于油红O中性脂肪染色，将70毫升37%甲醛的截面固定5分钟，然后彻底清洗自来水。

两到三分钟后，将接触水污迹，在 70 毫升 0.3% 油红色 O 中染色 10 分钟。在孵化结束时，用自来水清洗滑梯10分钟，在迈耶的赤氧树脂素70毫升中染色细胞1分钟，然后用70毫升0.5%碳酸锂清洗1分钟。然后在水中清洗细胞最后一分钟，然后用水性安装介质安装部分，通过光显微镜进行成像。

经过四周的治疗，与控制野生型动物相比，脂质蛋白-E敲除小鼠的脂质含量显著增加。此外，醛固酮治疗增加了淘汰动物的巨噬细胞含量，mack-3染色就证明了这一点，表明与车辆处理的小鼠相比，这些动物体内的动脉硬化斑块更加发炎。然而，醛固酮治疗不会改变动脉硬化斑块的胶原蛋白含量。

在尝试此程序时，重要的是要记住，这种方法只对非脂蛋白小鼠进行验证，这些小鼠在喂养致畸染料时自然容易患上动脉硬化。因此，它不能应用于不同的动物模型。按照这个程序，其他方法，如红外线可以执行，以描述动脉硬化在其他大动脉区域，并量化动脉硬化负担的总数。

这项技术开发后，为动脉硬化领域的研究人员探索早期动脉生成机制铺平了道路，如炎症和内皮功能障碍。不要忘记，使用挥发性化合物（如异丙烷和甲醛）可能极其危险，并且在执行此过程时应始终采取预防措施，如佩戴安全实验室面罩。